秦皇岛沿海主要海产品副溶血性弧菌及其毒力基因的检测

为了解秦皇岛主要海产品副溶血弧菌污染状况及其毒力特征,依据国家标准GB 4789.7—2013检测方法,并适当改进,分别在春、夏、秋、冬季节,对秦皇岛沿海主要鱼类、虾类、蟹类、贝类进行了副溶血性弧菌的检验。采用PCR方法对分离的副溶血性弧菌进行了tdh,trh,tlh毒力基因检测。结果显示,秦皇岛沿海主要海产品副溶血性弧菌污染相对较轻,其总检出率为10.07%。污染主要发生在夏秋两季,污染品种夏季主要为鱼类和少量贝类,秋季主要为虾蟹类和贝类。4个采样点中,副溶血性弧菌的检出率由高到低依次为:秦皇岛的海港区,昌黎县,北戴河区,山海关区。检出的15株副溶血弧菌均携带tdh和tlh毒力基因,说明秦皇岛沿海主要海产品携带的副溶血性弧菌毒性较强,具有潜在的感染风险。     

重庆市水产品中副溶血性弧菌分离株的毒力基因研究

目的:了解重庆市副溶血性弧菌分离株的毒力基因、血清型以及耐药性,为防治副溶血性弧菌引起的食源性疾病提供依据.方法:采用PCR方法检测溶血素基因,并结合药敏试验以及血清分型进行综合分析.结果:323份水产品样品中共分离出的35株副溶血性弧菌,其tdh和trh基因携带率分别为14.29%、2.86%,血清群主要为:O3群、O5群、O1群;14株临床分离株主要为O1群、O3群.两组不同来源的菌株均对头孢噻肟、环丙沙星、诺氟沙星敏感,对氨苄西林均有较强的耐药性.结论:重庆地区水产品中副溶血性弧菌的毒力基因携带率较低,但是血清型呈现多样性,且耐药性较严重,因此存在发生副溶血性弧菌食物中毒的潜在危险.     

海水中副溶血性弧菌检验方法的优化

为优化海水中副溶血性弧菌的检验方法,笔者采用碱性蛋白胨水、氯化钠多粘菌素B肉汤、3%氯化钠碱性蛋白胨水三种增菌培养基及其组合的增菌方法与用TCBS琼脂、弧菌显色培养基两种分离平板分别检验20份海水样品中的副溶血性弧菌。结果显示,采用碱性蛋白胨水+3%NaCl的碱性蛋白胨水增菌液进行二次增菌,能获得较高的检出率;使用弧菌显色培养基的分离符合率高于TCBS琼脂;增加增菌次数通常能提高分离符合率和检出率。     

一种水产弧菌快速药敏检测方法的建立

【目的】实现弧菌药物敏感性的现场快速检测。【方法】以副溶血性弧菌、溶藻弧菌及灿烂弧菌3种弧菌为试验菌株,在Mueller-Hinton(MH)培养基基础上通过添加鱼肉蛋白胨及调节无机盐离子浓度,优选弧菌的增菌液。同时利用阿尔玛蓝作为颜色指示剂,选择11种水产常见药物并设置8个倍比稀释的浓度梯度,结合运用海藻糖作为包被保护剂,制备弧菌快速药敏检测微孔板,板内设有药敏检测区、生长对照区及质控区。【结果】利用药敏微孔板法及传统的试管稀释法分别对副溶血性弧菌、溶藻弧菌及灿烂弧菌进行药敏检测,结果显示微孔板法测定的所有药物对3种弧菌的MIC值与试管稀释法完全吻合。【结论】本研究建立的药敏微孔板法能够实现对3种弧菌药敏特性的快速、简便、准确检测,研究结果将为水产病原微生物的现场快速选药技术提供重要参考。     

基于可变带宽的食源性疾病的制图方法构建——以副溶血性弧菌为例

食源性疾病是全球性的公共卫生问题之一,识别食源性疾病的阳性病原体检出高发区域并进行精细尺度的空间制图研究具有重要意义.文章在核密度分析的基础上,提出了一种感知病例位置信息的可变带宽核密度分析方法(case-location-aware adaptive kernel density, CLA-AKD),并采用该方法对浙江省由副溶血性弧菌引起的细菌性食源性疾病病例点开展空间点模式分析,探索其空间聚集特征.结果显示,副溶血性弧菌的阳性检出率在浙江省内表现出了较为明显的空间聚集特征,在浙江省沿海周边地区阳性检出率较高,特别在湖州市、绍兴市、宁波市和温州市等地均探测到较为明显的“高高”聚集区域.研究结果为探索有针对性的食源性疾病防控措施提供了新方法.     

应用噬菌体检测对虾发光病致病菌哈维氏弧菌的可行性研究

探讨了应用哈维氏弧菌噬菌体检测对虾发光病致病菌哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)的方法和可行性.实验表明,从对虾育苗场分离的哈维氏弧菌噬菌体对对虾发光病致病菌哈维氏弧菌的噬菌作用具有相当高的特异性,它不能裂解同样来源的溶藻弧菌、副溶血性弧菌、光合细菌,却能特异地裂解本实验所用的不同来源的哈维氏弧菌,噬菌斑出现率可达80%~100%,并且噬菌斑的出现率与虾苗发生发光病的发病程度有一定的相关性,可应用于哈维氏弧菌的检测和对虾发光病致病菌的诊断.     

副溶血弧菌K抗原基因决定簇的破译及液相芯片检测方法的建立

副溶血性弧菌是一种革兰氏阴性嗜盐致病菌,被认为是多血清型引起的主要食源性致病菌.通过全基因组测序技术,实现对K3、K29、K61菌株的测序.并且使用相关软件对测序数据进行基因预测和功能注释从而实现抗原决定簇的破译.鉴定的3个血清型的K抗原基因簇,表现出高程度的遗传多样性.根据K抗原基因决定簇的特异基因,建立了用于检测和鉴定这3种K血清型的液相芯片检测体系.本研究中破译的副溶血弧菌K抗原基因决定簇以及基于分子技术建立的检测分型体系,为高效的细菌检测提供了可能.     

舍曲林对副溶血弧菌的抑制作用

近年来关于副溶血弧菌环境和海产品分离株出现抗生素耐药性的报道日益增多,亟需寻找替代传统抗菌剂抗菌的策略以控制副溶血弧菌的污染和感染。本研究通过最小抑菌浓度（MIC）和最低杀菌浓度（MBC）的测定、生长曲线的绘制,以及运动性实验和结晶紫染色实验,并利用透射电镜观察副溶血弧菌形态的变化,来评估以舍曲林为代表的5-羟色胺再摄取抑制剂（SSRIs）类药物对副溶血弧菌的抑制活性及抗生物被膜形成能力。同时,通过检测与分析舍曲林对副溶血弧菌毒力基因转录的影响,探究舍曲林对副溶血弧菌的减毒作用。结果显示,舍曲林对副溶血弧菌的MIC为32μg/mL,MBC为64μg/mL,能够损伤其细胞膜和细胞壁,MIC下导致其干瘪皱缩,MBC下引起其涨裂、胞内物质外泄;亚抑制浓度的舍曲林能显著抑制副溶血弧菌的泳动和群集运动,抑制率分别为88.6%和71.5%;舍曲林呈浓度依赖性地抑制副溶血弧菌的生物被膜形成,当舍曲林质量浓度分别为8、16、32和64μg/mL时,对副溶血弧菌生物被膜形成的抑制率分别为66.9%、79.5%、88.3%和89.3%;亚抑制浓度的舍曲林能显著抑制副溶血弧菌的毒力基因fliA、ompW和a...     

乐东黄芩的化学成分及抗菌活性

采用重结晶、正相硅胶柱色谱、反相硅胶柱色谱、高效液相色谱法和Sephadex LH-20凝胶柱色谱等方法进行分离纯化,根据理化性质和波谱数据鉴定乐东黄芩化合物结构,分别为苯基-O-β-D-呋喃芹糖基-(1→2)-β-D-葡萄吡喃糖苷(1)、citroside A(2)、darendoside B(3)、baicalein-7-O-β-glucuronopyranosidemethylester(4)、对苯二甲酸二(2-乙基己)酯(5)、β-谷甾醇(6).采用微量稀释法测定了化合物对枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、大肠杆菌、副溶血性弧菌、溶藻弧菌的抗菌活性.其中化合物5和6对副溶血性弧菌的MIC值是12.5μg/m L.     

潮间带菌株CZⅣ-1068的鉴定及抑菌活性研究

CZⅣ-1068是从舟山长峙岛潮间带海泥中分离到的一株细菌,最适NaCl浓度范围为1%～3.5%,经琼脂扩散法抗菌模型筛选表明对大肠杆菌、副溶血性弧菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、藤黄微球菌和白假丝酵母有拮抗作用。利用形态学观察、生理生化反应对菌株进行了初步研究,并利用PCR的方法扩增了CZⅣ-1068的16S rDNA,然后进行核苷酸序列测定分析,结果表明CZⅣ-1068与Bacillus sp.82344(AF227848)相似性高达100%,初步确定为腊状芽孢杆菌的一种。     

1株副干酪乳酸菌S-4对致病弧菌的抑制特性研究

针对弧菌病害的防治,选取了一株副干酪乳酸菌(Lactobacillus paracasei)S-4对4种致病弧菌进行体外拮抗实验,并在此基础上比较了不同发酵时长及稀释倍数的上清液对弧菌的抑制作用,同时探究了抑菌物质特性及进行共培养拮抗实验.结果显示:副干酪乳酸菌S-4对4株致病弧菌均具有显著的抑制作用.副干酪乳酸菌S-4生长过程中,0~16 h的上清液无抑菌活性,20 h后开始表现出对4株弧菌的抑制作用;36 h时的上清液对创伤弧菌、哈维氏弧菌、副溶血弧菌的抑制率大于95.42%,且该上清液3倍稀释后的抑菌活性无显著降低,为最佳收获时间;72 h时的上清液对溶藻弧菌的抑制率达到95.72%,6倍稀释后的抑菌活性无显著降低,为抑制溶藻弧菌的最佳收获时间.进一步探究菌株间的相互拮抗表明:副干酪乳酸菌S-4在共培养4~6 h就表现出明显的抑菌活性,比上清液提前12 h产生抑制效果,在培养初期就能有效抑制弧菌的生长.生化分析表明:抑菌物质对过氧化氢酶、蜗牛酶、胃蛋白酶不敏感,与多肽类物质无关,酸碱中和后抑菌活性完全消失,推测为有机酸.本研究表明:副干酪乳酸菌S-4对4株常见致病弧菌具有较强抑制作用,在水产养殖中具有潜在应用价值.     

紫外线和消毒剂协同杀菌作用的研究

采用紫外线和二氧化氮的协同杀菌作用对冻虾仁中的副溶血性弧菌进行控制,微生物学检验表明,紫外线和二氧化氯的协同作用比单独的紫外线和二氧化氯杀菌效果好,在协作作用中,消毒剂是主体,消毒剂的浓度和作用时间起主导作用,紫外线起协同作用。     

大黄鱼弧菌病的荧光抗体快速诊断研究

用0.05%福尔马林灭活大黄鱼的病原菌－－副溶血弧菌制成菌苗,再用该菌苗注射免疫实验兔获得抗血清,进而建立起副溶血弧菌的间接荧光抗体检测技术。应用该技术在福建省连江县厦宫乡大黄鱼养殖渔排进行副溶血弧菌检测。在患病大黄鱼肝脏中均能检测到副溶血弧菌,10尾外观正常的大黄鱼中,有4尾检出副溶血弧菌,而在养殖海水中没有检出副溶血弧菌,以上结果表明,间接荧光抗体检测法不仅可以用于诊断感染发病的大黄鱼,而且也能用于检测带菌尚未发病的大黄鱼。     

10种植物内生真菌抗菌活性研究

采用组织块分离法从白木香(Aquilaria sinensis(Lour.)Gilg.)茎秆和叶片中分离得到10株植物内生真菌,并采用滤纸片法检测10种植物内生真菌液体培养粗提物对13种常见致病细菌的抑菌活性.经形态与分子鉴定,白木香中获得的10株内生真菌名称分别为Colletotrichum gloeosporioides、Arthrinium rasikravindrii、Xylaria adscendens、Cladosporium perangustum、Fusarium tricinctum、Cladosporium sphaerospermum、Diaporthe sp.、Phomopsis amygdali、Phomopsis sp.、Periconia macrospinosa.A.rasikravindrii、Diaporthe sp.、P. amygdali、Phomopsis sp.、P. macrospinosa 5株内生菌为首次从白木香中分离得到.活性筛选结果显示有5株内生菌(C. gloeosporioides、C. perangustum、Diaporthe sp.、F. tricinctum、P. macrospinosa)液体培养粗提物具有抗菌活性.其中,Diaporthe sp.对副溶血性弧菌的抑菌圈能达到(17.1±0.04)mm;F. tricinctum粗提物对蜡样芽孢杆菌、无乳链球菌、短小芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、藤黄微球菌、副溶血性弧菌的最低抑菌质量浓度均为3.125 mg·mL~(-1).     

溶藻弧菌HY9901鞭毛蛋白flaC基因的克隆和序列分析及真核表达质粒的构建

参照GenBank上登录的副溶血弧菌鞭毛蛋白flaC基因序列设计引物,PCR扩增溶藻弧菌HY9901株的flaC全长基因,序列分析结果显示该基因为1 155 bp,编码384个氨基酸.与GenBank中其他弧菌的同源基因序列比对显示,溶藻弧菌flaC基因与副溶血弧菌flaC基因的同源性最高(87%).将该基因定向克隆到真核表达质粒pcDNA3.1(+)中,获得带溶藻弧菌鞭毛蛋白flaC基因的真核表达重组质粒pcDNA-flaC,为其DNA疫苗的进一步研究奠定了基础.     

中国对虾血淋巴抗菌活力的测定

采用溶藻胶弧菌、副溶血弧菌、哈维氏维菌、嗜水气单胞菌对中国对虾血浆样品、血细胞溶解物（ＨＬＳ）样品的抗菌活力进行了测定。表明中国对虾血浆样品对四种细菌均表现出一定的抗菌活力。其中,三种弧菌活细胞数在孵育１ｈ时呈现最低;嗜水气单胞菌活细胞数在孵育４ｈ时最少,在三种弧菌中,血浆样品对哈维氏弧菌表现出的抗菌活力最强,而对副溶血弧菌表现出的抗菌活力最弱。血细胞溶解物样品对三种弧菌几乎没有表现出抗菌活力;嗜     

磁珠提取技术在副溶血弧菌检测中的应用

副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)是一种常见的食源性致病菌,为解决副溶血弧菌检测步骤复杂且周期长的问题,研究开发了一种磁珠提取与PCR联用技术快速检测食品中的副溶血弧菌。首先通过碱性共沉淀法完成Fe₃O₄磁珠的制备,随后在室温条件下通过水解正硅酸乙酯完成Fe₃O₄@SiO₂磁珠制备。探讨了正硅酸乙酯添加量对Fe₃O₄@SiO₂磁珠粒径和磁性的影响。以DNA提取能力为目标,已知浓度DNA为提取对象,分析了Fe₃O₄@SiO₂磁珠粒径和提取体系pH值对Fe₃O₄@SiO₂磁珠与DNA结合能力的影响。结果表明,Fe₃O₄@SiO₂磁珠结合副溶血弧菌DNA的较佳粒径为105.89nm、Fe₃O₄@SiO₂磁珠的SiO₂层为25nm,此条件下Fe₃O₄@SiO₂磁珠表面光滑、分散性良好、饱和磁化强度高,在磁场的作用下10s即可完成副溶血弧菌DNA与杂质的分离,副溶血弧菌DNA的提取率高达80%(提取体系pH值为5.0)。采用优化后的Fe₃O₄@SiO₂磁珠进行DNA提取,结合PCR联用技术,对92份市售水产样品(32份对虾、25份牡蛎、35份贻贝)进行副溶血弧菌筛查。结果表明,Fe₃O₄@SiO₂磁珠提取的DNA均可直接用于PCR检测,被测水产样品中有17份样本的副溶血弧菌检测结果为阳性。此技术与国标检测方法(GB 4789.7—2013)相比,检测时间由一周缩短至4h,提高了副溶血弧菌的检测效率。磁珠提取结合PCR联用技术可检测不同食品中的多种微生物菌种,此研究为食品中的微生物快速检测提供了一种实用新方法。     

海芦笋黄酮化合物抑菌效果研究

研究海芦笋黄酮化合物对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、沙门氏菌、副溶血弧菌的体外抑制效果。结果表明,海芦笋黄酮化合物对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、沙门氏菌、副溶血弧菌的抑制效果良好,而抑菌效果为:大肠杆菌<沙门氏菌<枯草芽孢杆菌<副溶血弧菌<金黄色葡萄球菌。     

杂色蛤中副溶血弧菌的定量风险评估

基于国际食品法典委员会关于微生物定量风险评估的理论框架,研究了从水产品批发市场到各零售点(主要为超市)杂色蛤中副溶血弧菌的动态变化情况,对因食用杂色蛤感染副溶血弧菌而引发疾病的风险进行预测,预测出每年、每人因消费生杂色蛤而导致由副溶血弧菌引发的食源性疾病的可能平均值被估计为1.65×10-8.同时对杂色蛤的另一种食用模式——烧烤,也进行了分析研究,确定因其所导致的风险十分小,可以不作为评估的对象.最后根据研究的结果提出针对政府监管部门的管理以及商业运营者和消费者的建议,这些风险管理措施、控制程序和安全食用规范的实施,均可大大降低因食用杂色蛤而感染副溶血弧菌并引发疾病的风险.     

竹荪等4种植物提取物的抑菌效果及复配研究

用乙醇对竹荪、地肤子、鱼腥草和藜蒿4种植物进行浸提,以在提取液作用下的大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌和副溶血性弧菌的抑菌圈直径为指标,用牛津杯双层平板法检验4种植物醇提物的抑菌效果;采用L9(3+)正交试验方法以大肠杆菌的抑菌圈直径为指标优化4种提取液复配比.结果表明,竹荪、地肤子、鱼腥草和藜蒿对5种供试菌均具有较好的抑菌效果;竹荪、地肤子、鱼腥草和藜蒿提取液对大肠杆菌的最佳复配比为4:3:6:3,此时抑菌圈达25.36mm.