溶藻弧菌HY9901鞭毛蛋白flaC基因的克隆和序列分析及真核表达质粒的构建

参照GenBank上登录的副溶血弧菌鞭毛蛋白flaC基因序列设计引物,PCR扩增溶藻弧菌HY9901株的flaC全长基因,序列分析结果显示该基因为1 155 bp,编码384个氨基酸.与GenBank中其他弧菌的同源基因序列比对显示,溶藻弧菌flaC基因与副溶血弧菌flaC基因的同源性最高(87%).将该基因定向克隆到真核表达质粒pcDNA3.1(+)中,获得带溶藻弧菌鞭毛蛋白flaC基因的真核表达重组质粒pcDNA-flaC,为其DNA疫苗的进一步研究奠定了基础.     

原癌基因bcl-2在类风湿关节炎滑膜衬里细胞中mRNA高表达

类风湿关节炎(Rheumatoid arthritis,RA)是一种进行性、系统性、以侵犯骨关节为主的自身免疫性疾病,分布广泛,是最常见的风湿病之一.持续严重的慢性滑膜炎最终可导致关节软骨和骨的破坏,肌腱韧带的断裂,使病人致残.类风湿慢性滑膜炎的重要特征之一是,滑膜衬里层明显增厚,滑膜衬里细胞数目显著增多.现已证实,滑膜衬里细胞是多种细胞因子、炎性介质和蛋白酶的主要分泌细胞,而这些分子均直接或间接地参与关节软骨、骨的破坏.但滑膜衬里细胞在类风湿关节炎发病中的作用不十分清楚.本实验旨在采用原位杂交技术,通过测定细胞凋亡相关基因bcl-2在滑膜衬里细胞中的表达,以探讨滑膜衬里细胞凋亡与滑膜衬里层增厚间的关系.     

虎纹镇痛肽(HWAP-1)的过敏性

采用全身过敏试验和皮肤局部过敏试验研究虎纹镇痛肽的过敏性，并作空白对照和阳性对照实验.结果表明，虎纹镇痛肽不会引起全身过敏反应和皮肤局部过敏反应.     

2种弧菌鞭毛蛋白的分离纯化与鉴定

尝试分离提取2种弧菌的鞭毛蛋白,采用垂直板聚丙烯酰胺凝胶电泳对所提蛋白进行分离纯化,Western免疫印迹检测,电镜鉴定。结果显示：实验已经成功分离提纯了哈维氏弧菌的鞭毛蛋白,获得了溶藻弧菌鞭毛蛋白的初提液。提纯的哈维氏弧菌鞭毛蛋白经SDS-PAGE显示3条清晰蛋白带（相对分子量分别为39.7,41.9和42.7KDa）,透射电镜观察表明该蛋白呈经典的丝状,可以认为哈维氏弧菌的鞭毛丝是由相对分子量分别为39.7,41.9和42.7KDa的3种鞭毛蛋白亚基构成。溶藻弧菌鞭毛蛋白的初提液经SDS-PAGE后显示5-9条蛋白带,其中36.8KDa的蛋白带有强的免疫原性。     

细角螺几种组织的同工酶分析

采用聚丙烯酰胺垂直板梯度凝胶电泳技术,对细角螺7种组织(外套膜、肌肉、肝脏、心脏、生殖腺和缠卵腺)的7种同工酶(EST,SOD,ME,MDH,LDH,ADH,GDH)进行了分析,结果表明：所测组织中未检出ADH和 GDH,LDH除了在肝脏中呈现较浓的条带外,在其他组织均呈现微弱条带,无组织差异性;ME,EST,SOD,MDH在组织间具有显著的差异.     

RNA干扰技术抑制SGIV ICP18绿色荧光融合蛋白表达的研究

 将含有新加坡石斑鱼虹彩病毒（Singapore grouper iridovirus,SGIV）ICP18基因的真核表达载体pEGFP-ICP18转染到胖头鲤细胞（Fathead minnow cells,FHM）中进行融合表达,用荧光显微镜观察到ICP18 GFP融合蛋白呈点状分布于FHM细胞的细胞质中。根据SGIV ICP18的序列,设计并体外化学合成了特异性干扰SGIV ICP18的siRNA（siRNA ICP18）,与pEGFP ICP18共转染到FHM细胞中,通过荧光显微镜观察不同时间点的荧光强度变化。与序列非特异性siRNA（siRNA negative）阴性对照相比,转染后24~48 h,共转染siRNA ICP18和pEGFP ICP18的实验细胞中发荧光的细胞数量较阴性对照少60%~80%左右,说明体外化学合成的siRNA-ICP18可有效抑制FHM细胞中外源导入SGIV ICP18基因的表达。