新型前交叉韧带支架材料的构建及其生物相容性的实验研究

探讨以聚羟基丁酸己酯/聚左旋乳酸(PHB/PLLA1∶1)胶原杂化支架作为前交叉韧带组织工程载体材料的可行性。制备"三明治"样结构PHB/PLLA共聚物并测量其孔隙率等指标。以I型胶原对制备的PHB/PLLA支架进行杂化,获得PHB/PLLA胶原杂化支架。扫描电镜观察其表面结构。将兔皮肤成纤维细胞(SF)接种于PHB/PLLA胶原杂化支架,共培养5d后,扫描电镜下观察其在材料上生长情况。PHB/PLLA支架杂化后胶原填充于纤维空隙,分布比较均匀。体外培养的皮肤成纤维细胞成功种植在支架材料上,在材料上粘附、生长良好。说明构建的支架材料具有良好的三维构型和生物相容性,有望为前交叉韧带损伤的修复提供了一种新型的支架材料。     

“去细胞”羊膜基质与人脐静脉内皮细胞相容性的实验研究

测定“去细胞”羊膜基质（human acellular amniotic membrane，HAAM）与人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endotholica lcell，HUVEC）的相容性，为提高内皮细胞在血管支架上的粘附率提供新的途径。     

可降解聚醚酯弹性体PTCG的合成及初步生物学评价

用熔融缩聚法合成聚对苯二甲酸丁二醇酯-co-聚对苯二甲酸环己烷二甲醇酯-b-聚乙二醇(PTCG)聚醚酯弹性体.按照ISO 10993标准,采用L929小鼠成纤细胞对其进行体外细胞毒性测试;以狗的血管平滑肌细胞 (SMCs)为模板细胞,测试细胞在材料表面的贴附性能.采用旋转成型/粒子洗出法制备三维血管支架,接种SMCs后在生物反应器上进行动态培养,探索PTCG作为组织工程血管支架材料的可行性.结果表明,合成的PTCG聚醚酯弹性体无细胞毒性;SMCs在PTCG薄膜表面贴附生长良好;所制备支架的孔径、孔隙率和力学性能等满足组织工程血管支架的要求;体外培养3 d后,大量SMCs长入血管支架并开始分化.     

高链玉米淀粉对聚己内酯组织工程支架材料结构与性质的影响

采用高链玉米淀粉改性聚己内酯（PCL）,通过溶剂浇铸/粒子沥滤法制备聚己内酯/淀粉（SPCL）组织工程支架;考察了改性后支架材料的化学结构、结晶性、亲水性和细胞相容性.结果表明,适量淀粉的引入能够降低支架材料的结晶性、改善材料的亲水性和细胞相容性,70％PCL/30％淀粉支架材料的细胞粘附率、增殖率和细胞活性为最佳,有望应用在骨组织工程中.     

加热对血管平滑肌细胞的影响实验研究

 为支架磁感应热疗预防和治疗PTCA术后血管再狭窄提供基础研究数据,对临床常用的316L型不锈钢冠脉支架进行磁感应诱导升温,探讨加热对兔血管平滑肌细胞（VSMCs）的增殖、迁移、凋亡及周期的影响。将平滑肌细胞置于恒温水浴槽中,待其达到预定温度（43、47℃）后持续10min,观察细胞形态变化,采用MTT法检测加热对血管平滑肌细胞增殖活性的影响,流式细胞术检测VSMC细胞周期和细胞凋亡,划痕实验检测加热对细胞迁移能力的影响,免疫细胞化学法检测不同温度作用后血管平滑肌细胞中增殖细胞核抗原（PCNA）的表达。结果发现,支架在交变磁场下可以升温至热疗所需温度,加热后细胞增殖受到了显著抑制,43℃组细胞存活率为（83.23±2.87）%,47℃组细胞存活率仅为（37.58±0.78）%。细胞的凋亡率显著增加,47℃组细胞凋亡率为（87.37±2.95）%,与对照组相比具有极显著差异,而43℃组的凋亡率为（6.00±0.26）%,与对照组相比无统计学差异。细胞周期也受到抑制,被阻滞在S期。加热后随着时间的推移,47℃组细胞的迁移能力受到显著抑制,而加热对43℃组细胞的迁移能力无显著影响。免疫细胞化学检测显示,随着温度的升高,PCNA的表达受到明显抑制。研究表明,临床常用冠脉支架在交变磁场下升温可行。加热显著抑制了细胞的增殖并促进了细胞凋亡,使细胞周期阻滞在S期,且抑制了细胞的迁移。加热能显著抑制细胞PCNA的表达,这些可能是加热抑制细胞增殖和迁移、促进凋亡的机制之一。     

兔骨髓间充质干细胞复合脱细胞牛松质骨体外相容性研究

探讨脱细胞牛松质骨（Acellular Bovince Cancellous Bone，ABcB）生物衍生材料与骨髓间充质干细胞（bone marrow mesenchymal stem cells，BMSCs）的生物相容性，为组织工程方法修复骨缺损提供依据。将兔骨髓间充质干细胞与ABCB复合并体外培养，然后进行形态学、细胞增殖、蛋白质含量测定。骨髓间充质干细胞能够贴附在ABCB孔隙内生长，细胞生长及蛋白合成功能不受ABCB的影响。ABCB生物相容性良好，可作为组织工程的支架材料应用于骨缺损的修复；BMSCs可以作为骨组织工程种子细胞。     

聚羟基丁酸酯/氟磷灰石电纺丝膜的体外降解

首次研究了氟含量不同的聚羟基丁酸酯/氟磷灰石电纺丝膜(PHB/FHAP)的体外降解行为,考察了PHB和PHB/FHAP电纺丝膜的失重率、降解液浑浊度及表面微观形貌,结果表明FHAP的加入增大了PHB电纺丝膜的降解速率。随着氟含量的增加,PHB/FHAP降解速率减小。在降解介质磷酸缓冲溶液（PBS）中,PHB和PHB/FHAP电纺丝膜都出现了羟基磷灰石（HAP）前驱体,表明该材料具有较好的生物相容性,这对其在骨组织工程上的应用具有重要意义。     

白介素-10对TNF-α介导血管平滑肌细胞增殖的影响

观察重组人白介素 10 (rhIL_10 )对肿瘤坏死因子 (TNF_α)刺激的离体大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞增殖的影响。体外培养SD大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞 ,采用MTS PES法确定血管平滑肌细胞的增殖状态。结果显示 ,TNF_α对血管平滑肌细胞增殖具有明显的刺激作用。rhIL_10单独应用对血管平滑肌细胞生长没有影响。在TNF_α刺激下 ,低至 10ng mL的rhIL_10可明显抑制血管平滑肌细胞的生长 (P <0 0 5 )。     

胶原修饰快速成形PLGA/TCP人工骨支架体外生物相容性研究

探讨经Ⅰ型胶原修饰的快速成型(RP)聚乳酸-羟基乙酸/磷酸三钙(PLGA/TCP)支架的生物相容性,为进一步体内实验提供研究基础.以经Ⅰ型胶原修饰改性的PLGA/TCP支架作为实验组,未经胶原修饰的原始支架作为对照组,检测两组支架材料的亲水性.BMSCs接种两组支架,分别测定细胞黏附率、细胞增殖率.扫描电镜(SEM)观察细胞黏附形态,以检验支架材料的细胞相容性.结果表明胶原改性支架具有较高的亲水性,实验组细胞黏附率在接种4、8和12 h者,明显优于对照组(P<0.05).实验组在培养2、4、6和8 d的细胞增殖率也明显高于对照组(P<0.05).扫描电镜可见骨髓基质细胞在实验组支架上的增殖数量多于对照组.说明Ⅰ型胶原改性的PLGA/TCP支架具有良好的细胞生物相容性,可作为骨组织工程支架应用于骨缺损的修复研究.     

羟基喜树碱联合丝裂霉素诱导人白血病K562细胞凋亡

观察羟基喜树碱与丝裂霉索联合应用对人白血病细胞K562的作用效果,并探讨其机制。不同浓度羟基喜树碱与丝裂霉素单独及联合作用于人白血病细胞K562后,应用台盼蓝拒染法检测细胞生长抑制率,计算合用指数（CI）,流式细胞仪（FCM）检测K562细胞凋亡率,吖啶橙（AO）荧光染色和透射电镜观察凋亡形态学变化。结果表明：单独应用时羟基喜树碱和丝裂霉素的IC50分别是8μ/mL和12．5μg/mL,联合应用时IC50下降为4μg/mL（HCPT）和3．6μg/mL（MMC）,CI=0．78,为协同效应。羟基喜树碱与丝裂霉素单独及联合应用均可诱导K562细胞凋亡。2种药物联合应用时的凋亡率高于各自单独用药。羟基喜树碱与丝裂霉素联合应用可以通过共同诱导细胞凋亡。协同抑制人白血病细胞生长。     

基于基因表达谱芯片杂交分析Lamprey-PHB2转染前后Chang liver细胞的基因表达差异

选取了10个物种与本课题组前期克隆得到的东北七鳃鳗抗增殖蛋白2(Lm-PHB2)进行氨基酸序列相似性对比,检测PHB2基因进化水平,结果表明各物种的PHB2氨基酸序列在PHB结构域处高度保守,但在N-端和C-端氨基酸序列保守性较低.将重组质粒pEGFP-N1-Lm-PHB2瞬时转染入张氏肝(CHL)细胞后,利用基因表达谱芯片技术分析基因的表达差异.结果显示CHL细胞中共有270条显著差异表达基因,其中显著上调基因共141条,显著下调基因共129条,涉及细胞信号转导、细胞周期调节、细胞增殖、细胞代谢和细胞凋亡等多个方面.通过实时荧光定量聚合酶链式反应(PCR)对基因表达谱芯片分析结果进行验证,结果显示转染pEGFP-N1-Lm-PHB2质粒后,细胞周期基因CDC25C、氧化应激相关基因(CAT,SOD,GST)和抗细胞凋亡基因HAX1均有显著性差异.     

NTN/PGLA导管修复兔面神经缺损与自体神经移植修复的比较

目的研究面神经低位切断伤后,应用重组NTN(Neurtuin)神经营养因子/PGLA(polygly co-lacticacid,聚乙交酯-丙交酯)导管修复术后,面神经核内神经元的变化,并与自体神经移植修复相比较。方法制作新西兰兔左侧面神经低位切断伤 自体神经修复模型,右侧低位切断伤 NTN/PGLA导管修复模型,运用辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase,HRP)逆行追踪标记,对标记神经元的分布和数量进行定性,定量观察。结果(1)HRP逆行追踪NTN/PGLA导管侧于术后10周成功标记到FMN,提示可恢复神经缺损段的轴浆流逆行运输,且两侧标记的细胞数无显著性差异(P>0.05)。(2)术后14周自体神经移植侧标记细胞均出现分布异位,而NTN/PGLA导管侧仅1例出现,标记细胞发生异位分布的概率明显少于自体神经移植侧(P<0.01)。结论应用NTN/PGLA导管的修复能够和自体神经移植修复一样恢复神经缺损的连续性和逆行轴浆运输功能,后期效果相当;应用NTN/PGLA导管修复后神经元分布异位明显少于自体神经移植修复,提示较少发生轴突误向再生,减少面肌联带运动的发生。     

聚乙交酯及聚乙丙交酯的结晶行为研究

本文用DSC法对聚乙交酯(PGA)和乙交酯-丙交酯共聚物(PGLA)熔体的冷却结晶和等温结晶过程作了研究,揭示了结晶行为随聚合物组成变化的规律。在熔体冷却结晶过程中,结晶温度、结晶速率和结晶热随着PGLA中LA含量的增加而降低。在熔体等温结晶过程中,PGLA2(GA∶LA=90∶10)和PGLA3(GA∶LA=95∶5)的Avrami指数分别为1.92和2.16。PGLA2在168℃的结晶速率为0.050min~(-1),PGLA3在171℃的结晶速率为0.033min~(-1)。用x-射线衍射法测出了它们的结晶度和微晶尺寸,PGA和PGLA2的结晶度分别为39.6％和34.6％。研究结果为PGA及PGLA的纺丝及后加工工艺的选择提供了依据。     

Overexpressions of Lambda Phage Lysis Genes and Biosynthetic Genes of Poly-β-hydroxybutyrate in Recombinant E.coli

A plasmid (pTU9) containing the lambda (λ) phage lysis genes S(-)RRz and the biosynthetic genes phbCAB of poly-β-hydroxybutyrate (PHB) was constructed and transformed into E.coli JM109. Cultured in Luria-Bertani (LB) medium with 20 g/L glucose, E.coli JM109 (pTU9) could accumulate PHB in cells up to 40% (g PHB per g dry cells). A chelating agent EDTA was applied to induce a complete cell lysis and PHB granules were released. This method has a potential application in PHB separation.     

A role for VEGF as a negative regulator of pericyte function and vessel maturation

Angiogenesis does not only depend on endothelial cell invasion and proliferation: it also requires pericyte coverage of vascular sprouts for vessel stabilization. These processes are coordinated by vascular endothelial growth factor (VEGF) and platelet-derived growth factor (PDGF) through their cognate receptors on endothelial cells and vascular smooth muscle cells (VSMCs), respectively. PDGF induces neovascularization by priming VSMCs/pericytes to release pro-angiogenic mediators. Although VEGF directly stimulates endothelial cell proliferation and migration, its role in pericyte biology is less clear. Here we define a role for VEGF as an inhibitor of neovascularization on the basis of its capacity to disrupt VSMC function. Specifically, under conditions of PDGF-mediated angiogenesis, VEGF ablates pericyte coverage of nascent vascular sprouts, leading to vessel destabilization. At the molecular level, VEGF-mediated activation of VEGF-R2 suppresses PDGF-Rbeta signalling in VSMCs through the assembly of a previously undescribed receptor complex consisting of PDGF-Rbeta and VEGF-R2. Inhibition of VEGF-R2 not only prevents assembly of this receptor complex but also restores angiogenesis in tissues exposed to both VEGF and PDGF. Finally, genetic deletion of tumour cell VEGF disrupts PDGF-Rbeta/VEGF-R2 complex formation and increases tumour vessel maturation. These findings underscore the importance of VSMCs/pericytes in neovascularization and reveal a dichotomous role for VEGF and VEGF-R2 signalling as both a promoter of endothelial cell function and a negative regulator of VSMCs and vessel maturation.     

Inhibition Mechanism of Emodin on Rabbit Vascular Smooth Muscle Cells Proliferation

ＩｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎＥｍｏｄｉｎｉｓｏｎｅｏｆｔｈｅａｎｔｈｒａｑｕｉｎｏｎｅｃｏｍｐｏｕｎｄｓ[1] ,ｗｈｉｃｈｅｘｉｓｔｓｉｎｍａｎｙｍｅｄｉｃａｌｐｌａｎｔｓｓｕｃｈａｓｒａｄｉｘ ｐｏｌｙｇｏｎｉｍｕｌｔｉｆｌｏｒｉ,ｒｈｉｚｏｍａｐｏｌｙｇｏｎｉ,ｅｔｃ .Ｅｍｏｄｉｎｉｓａｎｉｍｐｏｒｔａｎｔｃｏｍｐｏｕｎｄｉｎｍｅｄｉｃｉｎｅ .Ｉｔｈａｓｍａｎｙｂｉｏｌｏｇｉｃａｌａｃｔｉｖｉｔｉｅｓｓｕｃｈａｓａｎｔｉ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ,ｄｅｃｒｅａｓｉｎｇｂｌｏｏｄｌｉｐｉｄｓｃｏｎｔｅｎｔ ,ｅ…     

细胞凋亡的三种形态学检测法的应用比较

文章比较分析了光学显微镜、荧光显微镜和扫描电子显微镜检测细胞凋亡的差异,探讨三种形态学检测法在尼古丁诱导的血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)凋亡中的应用。用终浓度为100μM的尼古丁作用于体外培养的大鼠血管平滑肌细胞24 h,不加尼古丁的细胞作为对照组,应用普通光学显微镜、荧光显微镜和扫描电子显微镜分别观察各组细胞的形态,确定尼古丁对血管平滑肌细胞凋亡的影响。三种形态学检测方法均可检测到尼古丁明显诱导血管平滑肌细胞的凋亡。荧光显微镜检测法因操作简便、灵敏度较高、价格适中,更适用于本实验。     

Sodium Acetate Stimulates PHB Biosynthesis in Synechocystis sp. PCC 6803

IntroductionA large variety of bacteria are able to synthesizepolyhydroxyalkanoic acids (PHAs) and to depositlarge amounts of these polyesters as insolubleinclusions in cytoplasm[1 ] . PHAs have attractedthe interest of the chemical industry because oftheir biodegradable properties for applications invarious technical,medical,and pharmaceuticalapplications[2 ] .Poly-β-hydroxybutyrate(PHB) isatypical PHA that is produced by heterotrophicbacteria,such as Alcaligenes eutrophus andEscherichi…     

QKI对血管平滑肌细胞增殖的抑制功能

观察QKI蛋白对血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖的影响,进一步完善血管平滑肌细胞增殖的相关机制.以大鼠的原代主动脉平滑肌细胞为研究对象,观察分别过表达QKI5、QKI6对血清促增殖作用的影响.细胞增殖采用MTT法和Western blot测定.结果血清可促进大鼠的原代主动脉平滑肌细胞增殖,过表达QKI可抑制血清刺激的血管平滑肌细胞的增殖.说明过表达QKI对血清刺激的血管平滑肌细胞增殖具有抑制作用,该作用有可能在一定程度上能够抑制高血压等病伴发的血管平滑肌增殖.