克氏原螯虾原肌球蛋白的纯化及过敏原性分析

以13份甲壳类动物过敏患者血清的Western—blotting分析,确定克氏原螯虾主要过敏原为36ku蛋白质．通过盐析、等电点沉淀及热处理等方法纯化该蛋白质,以兔抗拟穴青蟹原肌球蛋白（Tropo-myosin,TM）多克隆抗体的Western—blotting分析,确定该蛋白质为TM．同源性分析表明,克氏原螯虾TM与南美白对虾TM、拟穴青蟹的氨基酸序列相似性较高（〉90％）．酶切位点预测显示,它分别有49个胰蛋白酶和6个胰凝乳蛋白酶的酶切位点．模拟胃肠液消化实验结果显示,纯化TM不易被胃蛋白酶降解,易于被胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶降解,进一步的Western—blotting和抑制性ELISA分析结果显示,其消化产物仍具有一定的免疫活性．采用蒸煮处理可降低TM的消化稳定性及免疫活性,且蒸煮处理时间越长,效果越显著．说明。TM为克氏原螯虾主要过敏原．与其他甲壳娄动物TM的序列相似件较高．     

铬胁迫对拟穴青蟹体内磷酸酶活性的影响

采用生态毒理学方法,研究了水体中Cr6+(0.5,1.0,2.0,4.0,8.0 mg/L)胁迫1,3,5,7,9 d后对拟穴青蟹鳃、肌肉和肝胰腺中磷酸酶活性的影响,以未添加Cr6+的自然海水组为对照组.结果表明,Cr6+胁迫1 d后拟穴青蟹鳃中酸性磷酸酶(ACP)活性显著升高(p0.05),肝胰腺、肌肉中ACP活性升高不显著(p0.05),Cr6+胁迫9 d后,2.0,4.0,8.0mg/L Cr6+浓度组拟穴青蟹肝胰腺中ACP活性显著降低(p0.05).5 d后不同Cr6+浓度组拟穴青蟹鳃中碱性磷酸酶(AKP)活性一直显著升高(p0.05),胁迫9 d后,0.5,1.0,2.0 mg/L Cr6+浓度组与对照组差异不显著(p0.05),4.0,8.0 mg/L Cr6+浓度组鳃中AKP活性仍显著高于对照组(p0.05).2.0,4.0,8.0 mg/L Cr6+浓度组肝胰腺、肌肉中AKP活性在Cr6+胁迫1 d后显著升高(p0.05).Cr6+胁迫显著影响拟穴青蟹生理生化效应.     

pH胁迫下拟穴青蟹体内腺苷三磷酸酶和磷酸酶活性的响应

采用酶学分析的方法研究pH（4．5、6．0、7．5、9．0、10．5）胁迫下拟穴青蟹鳃、肌肉和肝胰腺中ATPase、AKP和ACP活性的响应,以pH6．76±0．3的海水组为对照组．结果表明,随pH胁迫强度加大,拟穴青蟹鳃Na^＋,K^＋-ATPase活性显著增强（p〈0．05）,Ca^2＋,Mg^2＋-ATPase活性变化不显著（p〉0．05）;随pH胁迫时间延长,各组拟穴青蟹鳃Na^＋,K^＋-ATPase和Caz＋,Mg^2＋-ATPase活性均在胁迫第3天出现峰值．肌肉AKP活性对照组显著高于各处理组（P〈0．05）,pH4．5组肝胰腺AKP活性低于对照组,其余各组均略高于对照组（p〉0．05）;pH6．0组和pH10．5组肌肉ACP活性显著低于对照组（p〈0．05）;肝胰腺ACP活性,pH9．0组和pH10．5组显著高于对照组（p〈0．05）,pH7．5组显著低于对照组（p〈0．05）,pH4．5组、pH6．0组与对照组差异不显著（p〉0．05）．随着pH胁迫时间延长,拟穴青蟹肌肉和肝胰腺AKP和ACP活性在相同pH处理组变化规律不明显,但表现出时间效应性．由此可见,pH胁迫显著影响拟穴青蟹的生理生化效应．     

拟穴青蟹PDI保守区域的克隆与序列分析

蛋白二硫键异构酶(PDI)是真核生物重要的多功能蛋白,其基因结构在虾蟹类尚未报道.从拟穴青蟹Scylla pa-ramamosain(Estampador,1949)脑组织中分离纯化总RNA,经逆转录得到cDNA第一条链,并以之为模板利用RACE(rapid-amplification of cDNA ends)技术,扩增出一条950 bp的cDNA.将所得cDNA克隆到质粒载体pTZ57R/T,转化大肠杆菌DH5α细胞并对筛选的阳性克隆测序.通过与目前数据库中序列的比较,在此cDNA编码蛋白中发现其中101个氨基酸与其他物种已知蛋白二硫键异构酶(PDI)中的PDI_a_PDI_a'_C保守区域相似率在64%～79%之间.确定此cDNA编码拟穴青蟹PDI_a_PDI_a'_C保守区域.     

拟穴青蟹视神经节孕酮受体的免疫识别

研究表明,在甲壳类中可能存在类固醇的调控系统,然而核受体在进化的过程中是否依赖配体作用一直存在着争论.应用免疫印迹和免疫组织化学方法对拟穴青蟹(Scylla paramamosain)视神经节孕酮受体(PR)进行免疫识别.结果发现,拟穴青蟹视神经节中存在PR免疫阳性反应;其分子量约为70 ku,该物质广泛分布于视神经节的神经细胞核内.PR在拟穴青蟹视神经节的发现暗示着其类似于脊椎动物调节机制的存在;PR在神经细胞核中的定位表明其为核受体,很有可能在基因水平上参与拟穴青蟹视神经节的生理活动调节.     

甲壳类水产品过敏原及其致敏性消减技术研究进展

甲壳类水产品味道鲜美,营养丰富,广受消费者喜爱,但可诱发机体产生严重过敏反应,甚至危及生命,已成为全球范围内日益严重的食品安全问题。概述了目前已鉴定的甲壳类水产品过敏原的结构和免疫性质,及其致敏性消减技术原理和研究进展；已报道的甲壳类水产品过敏原有原肌球蛋白、精氨酸激酶、肌质钙结合蛋白、肌球蛋白轻链、磷酸丙糖异构酶和血蓝蛋白等,其中原肌球蛋白为甲壳类水产品的主要过敏原,可与72%~98%的甲壳类食品过敏患者血清产生特异性IgE反应。利用物理加工消减甲壳类水产品过敏原致敏性,主要通过传统热处理、微波、超高压、低温等离子体和辐照等物理作用力诱导蛋白质变性,进而破坏蛋白质的致敏性表位；酸处理和糖基化等化学修饰消减技术可以通过改变过敏原结构、形成新化学键等方式掩盖或直接破坏致敏性表位；酶处理和发酵处理等生物修饰消减技术则直接降解过敏原致敏性表位。未来仍需要通过过敏表位的靶向消减、多种消减技术协同、动物与人体试验开展,探究过敏原结构和表位修饰的影响机制,推进过敏原消减技术的实际应用,为低敏甚至脱敏甲壳类食品的研发提供参考。     

pH胁迫对拟穴青蟹体内几种免疫因子的影响

采用酶学分析方法研究pH(分别为4.5、6.0、7.5、9.0、10.5)胁迫下拟穴青蟹血清酚氧化酶(phenoloxidase,PO)以及血清、肌肉和肝胰腺超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD),溶菌酶(lysozyme,UL)活性和抗菌力(antibacterial activity,Ua)等免疫因子的变化.结果表明,pH胁迫对拟穴青蟹血清PO和总SOD活性及Ua影响显著(p<0.05),而对UL活性影响不显著(p>0.05),对肌肉和肝胰腺总SDO活性影响显著(p<0.05);相同pH下肝胰腺总SOD活性差异显著(p<0.05),肌肉和血清总SOD活性差异不显著(p>0.05).综上所述,pH胁迫对拟穴青蟹的免疫反应影响显著,在pH 7.5～9.0范围内,其免疫力强.     

蟹类水产品过敏原及其致敏性消减技术研究进展

蟹类是我国重要的经济水产品,也是诱发过敏反应的主要食物之一。因此,了解蟹类水产品过敏原种类及抗原表位,探究有效的蟹类致敏性消减技术等极为迫切。阐明蟹类水产品过敏原及其抗原表位是消减其致敏性的重要前提,概述了国内外分离鉴定的蟹类水产品过敏原,包括原肌球蛋白、精氨酸激酶、肌质钙结合蛋白、磷酸丙糖异构酶、细丝蛋白c等;总结了利用生物信息学技术、噬菌体展示技术、一珠一化合物技术等定位分析蟹类水产品过敏原的线性表位和构象表位概况。比较了辐照技术、超声技术、美拉德反应技术、酶法交联技术、微生物发酵技术等现代加工处理方法,或修饰过敏原抗原表位或破坏过敏原蛋白质结构,从而消减蟹类水产品过敏原致敏性。着重分析了蟹类水产品过敏原的未来研究趋势,提出蟹类水产品过敏原结构与致敏性的构效关系解析是该领域的研究难点;对比了物理法、化学法、生物法在蟹类水产品致敏性消减方面的优缺点,提出未来重点发展复合加工处理方式,以便更大程度地降低过敏原致敏性,从而为低致敏性的蟹类食品或生物制品的开发提供技术依据。     

拟穴青蟹(Scylla paramamosain)NOS蛋白结构分析及同源建模

为了进一步认识拟穴青蟹一氧化氮合成酶(S.paramamosain nitric oxide synthetase,SpNOS)蛋白的结构和功能,深入研究该蛋白的生物学特性,本研究采用生物信息学方法,对SpNOS蛋白质的理化性质、二级结构及三级结构等进行生物信息学分析,并在获得三级结构的基础上进行同源建模.分析结果表明,拟穴青蟹NOS蛋白与眼斑龙虾NOS蛋白组成较为接近.二级结构以α螺旋和随机卷曲为主.NOS全长1214个氨基酸,其空间结构分别以2G60、3HR4、1QGY的A链为模板,分三段进行建模,得到合理的空间结构.实验数据为深入研究一氧化氮合成酶的蛋白结构和免疫功能的关系奠定了基础.     

中华绒螯蟹Na+-K+-Cl-协同转运蛋白基因的克隆和功能分析

为研究Na~+-K~+-Cl~-协同转运蛋白(NKCC)基因在中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis)应对高盐胁迫过程中的作用,采用RACE技术首次克隆到中华绒螯蟹NKCC基因全长序列,运用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)对中华绒螯蟹NKCC基因进行组织定量,并进行生物学信息分析.结果表明:该基因的cDNA全长为4 127bp,其中5非编码区(UTR)长度为18bp,3非编码区(UTR)长度为944bp,开放阅读框(ORF)长度为3 165bp,编码1 054个氨基酸.理化分析预测其分子量为51.066kDa,理论等电点为4.65.预测中华绒螯蟹NKCC二级结构由12个跨膜结构域组成.同源对比结果显示:中华绒螯蟹NKCC的氨基酸序列与拟穴青蟹(Scylla paramamosain)NKCC相似度最高,为86.17%.系统进化分析表明中华绒螯蟹NKCC与拟穴青蟹、三疣梭子蟹(Portunus trituberculatus)、可口美青蟹(Callinectes sapidus)、蓝蟹(Callinectes sapidus)聚为一支.不同组织的荧光定量结果显示:NKCC基因在中华绒螯蟹的肠、脑神经节、胸神经节、鳃、胃、肝胰腺、肌肉、眼、心脏和血清中均有表达且在中华绒螯蟹肠的表达量最高.在盐度为25‰的急性胁迫下,NKCC基因在中华绒螯蟹肠中的表达量随着胁迫时间延长变化显著(P0.05),并在胁迫72h后恢复稳定.以上结果显示,NKCC基因参与了中华绒螯蟹渗透压调节,并在其渗透压平衡中发挥重要作用.     

传染性非典型肺炎病毒核蛋白的表达与活性检测

用PCR方法，人工合成传染性非典型肺炎病毒(SARS-CoV)核蛋白(N)全编码基因，并构建原核表达载体．在大肠杆菌中进行表达．结果重组N蛋白表达产量占菌体总蛋白的40％以上，主要以可溶形式存在．用SARS患者急性期血清进行蛋白印迹检测，表明可溶形式和包含体形式均有明显活性．包含体形式的重组蛋白经纯化后纯度可达90％以上，活性与纯化前相当，可作为SARS抗体诊断试剂盒的抗原原料．     

能量和动量淀积深度分布的输运理论研究

作者对于离子束轰击无限大非晶或多晶靶，基于材料的平移不变性(TIM)，证明了能量和动量淀积深度分布函数的勒让德多项式展开系数必定为无限可微函数，并假定这些分布函数存在．作者揭示了TIM与线性输运理论(LTE)之间的本质区别：当总散射截面为无限大时，TIM仍然正确，但LTE就不再正确了．对于m=0．5的幂散射截面，运用Pade逼近，由作者所构造的能量和动量淀积深度分布函数以及它们的勒让德多项式展开系数的深度分布函数，并没有发现所谓“奇点”和“不连续”．在某些情况下，靶表面动量淀积垂直分量并不发生符号变化．     

Structures of the cloned chitinase and its truncant from A.caviae

Aeromonas caviae can secrete several chintinases with different molecular weights. One chitinase gene chi 1 has been cloned and sequenced. It encodes a protein of 865 amino acids with a signal peptide at the N-terminus, a polycystic kidney disease(PKD)-like domain, a triosephosphate isomerase(TIM) catalytic region, a receptor for egg jelly(REJ)-like domain and two tandem chitin binding domains (ChBDs). The entire chitinase degrades colloid chitin both endolytically and exolytically into N-acetylglucosamine, chitobiose and chitotriose. When removing the 302 amino acids at C-teminus its activity remains but the degraded products are chitobiose, chitotriose and chitotetraose. The study shows that for the full-length chitinase, its substrate with the shortest length is chitotriose while in its truncated form, it is chitotetraose.     

四氮杂大环四烯镍(Ⅱ)参与的连续振荡化学反应

本文报道了一种新型振荡化学反应体系BrO_3~-—没食子酸—H_2SO_4—四氮杂大环四烯镍(Ⅱ)配合物连续振荡化学反应体系,四氮杂大环为2,3,9,10—四甲基—1,4,8,11—四氮杂环十四—1,3,8,10—四烯,研究了可出现连续振荡(间歇式振荡)现象的浓度范围,并提出了简要的振荡机理。     

消除音频功率放大器瞬变互调失真的设计准则

描述音频功率放大器的瞬变互调失真(TIM)总是在时间域中方便，但要消除TIM，在时间域对放大器中的那些环节进行设计就出现困难。将瞬变互调失真产生的机理用频率法来描述，进而找到一个功率放大器动态设计的准则。依照这个准则，运用频率法可以得心应手地处理各参数之间的关系，同时保证消除瞬变互调失真。     

Characterization of the Antigenicity and Immunogenicity of the Escherichia Coli Produced RNase Domain of the Classical Swine Fever Virus Glycoprotein E~(rns)

Erns is a highly glycosylated envelope protein of classical swine fever virus (CSFV) with RNase activity. Erns can induce neutralizing antibodies and provide immune protection against CSFV infection. In this study, the RNase domain of the Erns was produced in Escherichia coli. Its reactivity with CSFV-positive sera and its ability to induce antibodies and to provide protective immunity were then investigated. The serological tests showed that the prokaryotically expressed RNase domain of the Erns retained i...     

2—D与3—D横向各向同性介质中地震波动方程的解耦

在2-D横向各向同性介质中,似P波与似SV波耦合;3-D介质中,似P波与似SV波及似SH波均耦合于偏微分波动方程组中,为便于2-D与3-D横向各向同性介质中震波激发以及地震记录合成研究,本文首先对波动方程组本身进行了讨论,进而分别研究了二维与三维横向各向同性介质中波动方程组的解耦问题,得到了解耦后的关于位移分量偏微分方程。     

MFRG-DPIR FOR THE DISORDERED TRANSVERSE ISING MODEL

A new approximate scheme which is combined by the mean-field renormalization group theory (MFRG) with the discretized path-integral renormalization (DPIR) is employed in the study of the disordered tranverse Ising model (TIM). The critical properties of random-bonds Ising systems on a d-dimensional lattice are calculated with this new approximate scheme.     

1株产细菌素乳杆菌的鉴定及其所产抑菌物质的特性

从分离自内蒙古传统乳制品的67株乳杆菌中筛选得到1株产细菌素的乳杆菌KLDS 1.0355。通过API 50生化反应实验和16S rDNA序列同源性分析,鉴定该菌株为短乳杆菌。应用琼脂扩散法研究了KLDS 1.0355无细胞发酵上清液的部分特性,KLDS 1.0355的无细胞发酵上清液对热（121℃,30min）和pH值（pH 2.0～10.0）稳定,可被多种蛋白酶如胃蛋白酶、胰蛋白酶、木瓜蛋白酶、α-糜蛋白酶和蛋白酶K失活,不能被过氧化氢酶失活,说明该抑菌物质为1种蛋白质。进一步证明了该抑菌物质的作用方式是杀菌,且抑菌谱广,可抑制多种革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌。