冷冻保存对人类附睾精子功能的影响

目的：了解人类附睾精子经历冷冻保存后的精子功能变化。方法：应用精子功能检测方法。结果：１１ 例先天性双侧输精管缺如患者附睾精子标本冷冻保存后,每例冷冻标本均见活动精子,但精子活动率显著降低,精子活动能力减弱。精子膜完整率显著下降,头膜损伤－ 尾膜完整的精子率（ Ⅲ型精子） 显著升高,精子体外存活时间显著缩短。精子顶体蛋白酶活性降低。去透明带地鼠卵穿透试验检验精子体外授精能力失败的标本,采用显微注射技术可使精子辅助授精。结论：（１） 冷冻保存对附睾精子功能有显著的影响,造成精子功能减弱;（２） 冷冻精子仅用单一尾膜肿胀试验筛选,有可能拾取到的是尾膜完整,但头膜损伤的精子;（３） 建立显微授精技术可有效地对冷冻附睾精子辅助受精。     

冷冻保存对人类精子顶体蛋白酶的影响

探讨了冷冻保存对人类精子顶体蛋白酶的影响,应用明胶薄层法检测,冷冻保存后精子顶体蛋白酶反应率和成环直径显著减少（ｎ＝３０,Ｐ＜０．０１）．透射电镜观察到冷冻保存后精子（ｎ＝３）头部结构完整性显著降低,提示浆膜、顶体膜超微结构的冷冻损伤与冷冻精子顶体蛋白酶活性丢失和降低有关．冷冻精子穿卵率与顶体蛋白酶反应率不呈相关性（ｎ＝２１,ｒ＝０．３４,Ｐ＞０．０５）,提示两项检测反映的是精子功能的不同方面．     

人体精子顶体蛋白酶的研究

用硫酸胺盐析、Sephadex G-100柱层析等方法,从人体精子中提纯得到电泳单点纯的顶体蛋白酶。用SDS-聚丙烯酰铵凝胶电泳法测定了人体精子顶体蛋白酶的相对分子质量(约为10470)。用N-末端分析和氨基酸组成分析等方法研究了这种酶的一些化学特征。实验结果表明,人体精子顶体蛋白酶由85个氨基酸残基组成,它是以亮氨酸为N-末端的单一多肽链。     

精子核DNA和赖氨酸定量测定及有关分析

用显微分光光度计测定了人及大鼠附睾精子核ＤＮＡ和赖氨酸含量，发现不育者精子核ＤＮＡ含量高于正常者，附睾头部精子核赖氨酸含量为１左右，而尾部精子核赖氨酸含量接近于零。提示精子核蛋白异常可能是某些男性不育的原因之一。     

入卵过程中太平洋牡蛎精子超微结构的变化

本文研究了精子入卵过程中太平洋牡蛎精子超微结构的变化规律。研究表明，精子入卵过程分为4个时期：顶体反应期、穿卵前期、穿卵期和融合期。顶体反应期，精子顶体物质释放，顶体致密部分向外延伸，形成1层保护膜，亚顶体腔开始向顶端突起；穿卵前期，亚顶体腔前突形成顶体锥，并向卵膜释放亚顶体物质，精子外膜后移；穿卵期，精子核及线粒体进入卵膜形成的受精锥，线粒体数量减少，顶体突消失，精子外膜和尾部脱落；融合期，精子核进入卵内与质膜融合，核解体。     

驴精子顶体蛋白酶的提纯及其一些性质的研究

顶体蛋白酶acrosin(EC3、4、21、10)是存在于哺乳动物精子顶体中的一种丝氨酸蛋白酶,生化性质上属于水溶性碱性糖蛋白,专一水解精氨酰键,最适pH为8.0—8.5。首先在兔精子中提取了顶体蛋白酶,发现此酶能分解兔卵透明带,并且被胰蛋白酶抑制剂所抑     

超低温保存存前后太平洋牡蛎精子（Crassostrea gigas（Thunberg）超微结构观察

应用扫描电镜和透射电镜技术，研究超低温冷冻前后太平洋牡蛎精子形态与超微结构。结果发现，受伤精子被膜肿胀、皱褶、破裂；顶体变形、囊泡化、顶体膜肿胀，局部断裂；核膜肿胀，破裂，核空泡化；线粒体嵴变形、消失，基质电子密度降低，结构模糊；精子鞭毛被膜膨胀，鞭毛自精子基部或主、末段断裂。结果表明，超低浊冷冻和升温解冻，对牡蛎精子的膜结构损伤严重，导致精子活力和受精能力下降。     

中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis)精子的形态和顶体反应的研究

研究了利用离子载体A23187诱导中华绒螯蟹（Eriocheir sinensis）精子产生顶体反应的最佳条件．结果表明：从雌性中华绒螫蟹纳精囊中获得的精子，在pH值为6．0，CaCl2浓度为0．2％的人工海水中，用离子载体A23187（40μg／mL）诱导70min，可以得到最大的精子顶体反应率（72％）．在此基础上用光镜观察了顶体反应过程中精子显微结构的变化，并采用天然海水配制的台盼蓝染色液和曙红B染色液对中华绒螯蟹精子的形态进行观察，确定中华绒螫蟹精子的顶体反应过程大致可分为4个阶段：第一阶段为辐射臂收缩，头帽鼓起；第二阶段为顶体囊外翻；第三阶段为顶体管前伸；第四阶段为顶体丝形成．     

小鼠附睾精子的显微受精

目的：建立显微受精的方法,并探讨小鼠附睾精子在显微注射进入卵母细胞后的受精能力。方法：用显微注射法把小鼠附睾头和附睾尾精子注入卵母细胞的胞质内或卵周隙进行显微受精。结果：把单个附睾尾精子注入卵细胞质中,培养后１４个存活的卵细胞中,有５个卵裂为２－细胞期胚胎;将单个附睾头精子注入卵母细胞中,有２５个存活,其中９个受精发育为２－细胞期胚胎;将附睾尾精子注入卵周隙进行带下受精,３０个存活的卵细胞中有４个     

锈斑蝇（Charybdis feriatus）精子超微结构的研究

利用透射电镜研究了锈斑蟳成熟精子的超微结构，结果表明这类精子呈不规则的扁球形，无鞭毛，精子由球形的顶体、核杯及辐射臂组成、顶体结构复杂，包括头帽、顶体管与顶体囊，顶体囊包绕在顶体管的中央管周围。顶体被杯状的核包裹，仅头帽露于精子表面。中心粒、线粒体及少量的其它细胞器出现在核杯中。精子的表面有由核外突形成的辐射臂约2条。     

18-碳酸-3,4-呋喃二酯对小鼠精子超微结构的影响

研究了18-碳酸-3,4-呋喃二酯对昆明小鼠精子超微结构的影响.处死10只健康有生育力的雄性小鼠,取睾丸组织,获取具有高活力的精子悬浮液,测定18-碳酸-3,4-呋喃二酯的瞬间杀精活性;然后将经过处理的精子团块固定在2.5%的戊二醛溶液中,电镜观察.结果表明,18-碳酸-3,4-呋喃二酯的瞬间杀精浓度为4 g·L^-1.在电镜下,精子头部顶体与核膜被破坏,在核质膜周边形成大小不一的虫蚀状缺痕,严重者,细胞核膜破裂/缺损,核染色质不均匀,呈颗粒样改变,有空泡形成.由此可见,18-碳酸-3,4-呋喃二酯有很强的体外杀精作用.     

维生素B_(12)对牛冷冻精液精子质量的影响

牛精液冷冻前于精液稀释液中添加ＶＢ１２为试验组，不添加ＶＢ１２的为对照组。冷冻结果表明：试验组冻精解冻后精子活力、顶体完整率分别比对照组提高１６．１１％（Ｐ＜０．０１），１５．９％（Ｐ＜０．０１）；精子畸形率与ＧＯＴ活性均明显下降；精子存活时间延长。说明ＶＢ１２在牛精液冷冻中对牛精子形态结构具有保护作用。     

黑眉锦蛇（Elaphetaeniura）精子的超微结构

用透射电镜观察了黑眉锦蛇的精子结构。精子总长度约６９－７５μｍ，头部弯曲呈镰刀头，长约１１μｍ，有以下几个特点（１）复杂的顶体复合体，包括项体帽、顶体下杆、顶体下颗粒、顶体下核帽、顶体下间隙及中央管六个部分；（２）连接段形成连接裙，裙底边膨大成锤状；（３）中段无远端中心粒，具有厚的纤维鞘，第３号与第８号双联微管外侧有直径为５０ｎｍ粗的外致密纤维，其他双联微管外侧有直径２５ｎｍ细的外致密纤维。     

无蹼壁虎（Gekko swinhonis）精子的超微结构

本文用透射电镜观察了无蹼壁虎的精子，精子总长度约５８－６５μｍ，头部弯曲长约２３－２５μｍ，其特点：（１）顶体复合体由以下四个部分组成：顶体帽，顶体下间隙，顶体下核帽及中央管；（２）中段的轴丝复合体与线粒体鞘之间有一圈纵行的微管，称为微管鞘，另外具有终环后隐窝（３）主段具有厚的圆筒状纤维鞘。     

四川（沼泽型）公水牛及其与摩拉水牛杂交F1公牛性成熟的研究

观察了８７头１．５－６０．５月龄四川水牛及其与摩拉水牛杂交Ｆ１公牛睾丸切片，发现四川水牛睾丸曲细精管内，最先形成精子的为１４．２月龄；Ｆ１为１３月龄，四川水牛附睾尾部出现精子是１６月龄，Ｆ１为１５月龄。     

人输卵管液和输卵管上皮细胞培养液诱发精子的顶体反应

目的：探讨人输卵管液和上皮细胞培养液对人精子顶体反应的诱发作用。方法：用Ｈａｍ′ｓＦ１０作对照组，输卵管液和上皮细胞培养液为实验组，分别与生育力组（ｎ＝２０）和不育组（ｎ＝２０）的精子进行共孵育，用精子顶体三色染色法对顶体状态进行评价。结果：共孵育３ｈ时与Ｈａｍ′ｓＦ１０对照组相比较，两种输卵管液均可显著提高生育力组和不育组的精子顶反应率（Ｐ〈０．０５），但这两种输卵管液处理的生育力组与不育组之间     

锈斑(虫寻)(Charybdis feriatus)精子超微结构的研究

利用透射电镜研究了锈斑虫寻成熟精子的超微结构,结果表明这类精子呈不规则的扁球形,无鞭毛,精子由球形的顶体、核杯及辐射臂组成。顶体结构复杂,包括头帽、顶体管与顶体囊,顶体囊包绕在顶体管的中央管周围。顶体被杯状的核包裹,仅头帽露于精子表面。中心粒、线粒体及少量的其它细胞器出现在核杯中。精子的表面有由核外突形成的辐射臂约2条。     

高压电脉冲处理对小鼠精子超微结构及体外受精的影响

用电脉冲法处理小鼠精子后进行体外受业有、体外受精贸的卵裂率和桑椹胚发育率都有所降低,以1．0kv/cm,30μs的最佳处理条件处理过的组其卵裂和桑椹胚发育率分别为63．5％和50．9％,与对照组的84．1％和80．0％相比,有显差异（P＜0．01）,说明电脉冲处理对精子受精率和胚胎的体外早期发育有影响。将1．0kv/cm,30μs和4．8kv/cm,90μs电脉冲处理后的精子与正常对照组（离心后重悬于电脉冲缓冲液）的精子分别离心固定后制作电镜切片,观察结果发现,电脉冲处理组的顶体外细胞膜膨胀了膨胀,覆盖顶体的细胞膜隐入,在顶体后区有细胞膜的断裂现象,其变化率分别是：1．0kv/cm,30μs处理组为36．3％;4．8kv/cm,90μs处理组为46．7％,较低电压脉冲处理组精子顶体部分发生了类似顶体反应的变化恩赐 高压电脉冲处理组的线粒体发现了空泡化和线粒体的大小不均一性变化。     

细针睾丸抽吸精子加卵胞浆内单精子显微注射的临床研究

目的 :探讨细针睾丸抽吸精子加卵胞浆内单精子显精注射(ICSI)的临床价值。方法 :本中心采用控制性超排卵方案并使用改良的显微操作系统 ,对6例(6个周期)梗阻性无精子症患者经细针睾丸抽吸精子加ICSI术治疗。结果 :其受精率、优质胚胎率和临床妊娠率分别为(60/76)、(38/60)、(4/6)。结论 :经细针睾丸抽吸精子加ICSI是治疗梗阻性无精子不育症的有效方法。     

蝶豆花提取物的抗氧化活性及其对酮康唑诱导大鼠睾丸损伤的保护作用

研究目的：研究蝶豆花提取物的抗氧化活性及其对酮康唑（KET）诱导雄性大鼠睾丸损伤的保护作用。创新要点：对蝶豆花提取物保护酮康唑引起的雄性动物睾丸损伤进行研究，为减轻抗真菌药物酮康唑的生殖毒性提供理论依据和解决途径。研究方法：采用2,2-二苯基-1-苦肼基自由基（DPPH）分析法和亚铁还原能力实验法（FRAP）来测定蝶豆花提取物的抗氧化活性。在为期28天的动物试验中，前21天为预防期，第21至28天为KET诱导期。整个试验期中，对雄性大鼠进行蝶豆花提取物（0、50、100mg／kgBW）灌胃饲养；在诱导期，同时腹腔注射KET（100mg/kg BW）。试验结束后，测定睾丸、附睾和输精管以及精囊的重量、血清睾酮水平、精子浓度、组织结构、睾丸的直径和睾丸酪氨酸磷酸化水平。重要结论：蝶豆花提取物具有清除DPPH自由基能力和较高的还原能力，其在100mg／kg BW下对雄性大鼠生殖系统无毒。50、100mg/kg BW蝶豆花提取物能改善KET引起的生殖器官重量下降、血清睾酮水平和精子浓度，降低KET引起的睾丸损伤。与其他组相比，100mg／kg BW蝶豆花提取物能显著提高睾丸中50-kDa的酪氨酸磷酸化蛋白的表达。由此可见，具有抗氧化活性的蝶豆花提取物不会损伤雄性生殖系统，而且具有保护KET诱导大鼠睾丸损伤的作用。