尿激酶粗制品的提取技术

本文在叙述尿激酶的药用价值及发现历程的同时,结合生产实践,提供了以硅胶-G及celitet—545这两种不同吸附剂提取尿激酶粗品的方法。     

尿激酶(人尿)的分离与精制——(Ⅰ)尿激酶的分离

本文提供了一个以724离子交换树脂为吸附剂,从人尿中分离尿激酶粗品的有效方法。此法是:将1吨新鲜的男性尿调到pH9.O,除去沉淀,滤液调到pH 5.8—6.O,然后在滤液中加入1.5％(W/V)724树脂(H~+型),搅拌1.5时,被吸附的尿激酶以2％的NH_4OH(含1M NaCl)溶液洗脱,在洗脱液中加入(NH_4)_2SO_4使达O.6饱和度,收集沉淀,收率为60—70％,比活为1000CTA单位/mg·pr。     

等密度梯度离心法分离人红细胞影泡

应用葡聚糖等密度梯度离心法可将低渗溶血法制备的人红细胞影泡制剂分离成二条密度明显不同的区带。上层区带的浮力密度范围为1.018(克/毫升)左右,下层区带的浮力密度范围为1.069(克/毫升)左右。根据浮力密度和形态观察并和Steck的结果相比较,上下二条区带分别相当于封闭和不封闭影泡。我们认为本文初步提供了一个对红细胞影泡制剂进一步分离和鉴定的方法,为红细胞膜性质和功能的研究进一步创造了条件。此外,在等密度梯度离心中我们采用了进口和国产二种葡聚糖作介质,二者所得结果完全相同,效果同样良好。     

黑曲霉(UV—11)葡葡糖淀粉酶的分离纯化和酶的多型性性质的初步研究

以黑曲霉UV—11的工业酶制剂为材料,分离纯化葡萄糖淀粉酶。蒸馏水抽提,硫酸铵盐析,凝胶过滤脱盐和DEAE一纤维素DE_(52)柱层析,得到4个部分(峰Ⅰ—Ⅳ),4个部份提纯0.92—1.84倍,酶活收率为26.6％。黑曲霉UV—11葡萄糖淀粉酶具有多型性,经聚丙烯酰胺凝胶水平板电泳共分出5条区带。粗酶和纯化的酶经电泳染色结果表明黑曲霉UV—11葡萄糖淀粉酶为一种糖蛋白。     

高速逆流色谱结合硅胶柱色谱法分离制备干姜中的6-姜酚、8-姜酚、6-姜烯酚

通过实验建立了高速逆流色谱(HSCCC)结合硅胶柱色谱法分离制备干姜中6 姜酚、8 姜酚和6 姜烯酚的方法。干姜样品采用乙酸乙酯超声提取,提取物经过硅胶柱色谱粗分,选取其中A3和A4两个馏分进行高速逆流色谱分离,所得单一成分采用高效液相色谱(HPLC)检测纯度,并采用电喷雾质谱(ESI-MS)、核磁共振氢谱(¹H NMR)对所得化合物的结构进行鉴定。研究结果表明,该方法简便快捷,所得产物纯度高、制备量大、分离效率好。     

高比活大分子尿激酶的纯化

本文总结了作者多年从事尿激酶研究的实践经验,设计出一条由D_(160)国产树脂、CM-纤维素和苯甲胨—Sepharose 6B亲和柱制备高比活大分子尿激酶的工艺路线。该法有快速、经济、有效的特点。尿激酶比活高达100000IU/mg·pr。大分子尿激酶占90％以上,纯化系数为218,活力回收按原尿计为12％。该法前期工艺可供设计生产路线时参考。若在此基础上再经SephadexG-100分子筛过滤或经羟基磷灰石分离,纯度可达150000IU/mg·pr,适合于对尿激酶的进一步研究用。     

豆豉姜中生物碱的pH区带逆流色谱分离研究

建立pH区带逆流色谱分离制备豆豉姜中生物碱的方法。运用pH区带逆流色谱对豆豉姜中的生物碱进行分离,以氯仿-甲醇-水(4:3:2,V/V)作为溶剂系统,在上相溶液中加入70 mmol/L盐酸作为固定相,在下相溶液中加入10 mmol/L三乙胺作为流动相,仪器转速为800 r/min,流速为2 m L/min,检测波长为254 nm,固定相保留率为65%。经一次pH区带逆流色谱分离,从1.5 g豆豉姜粗提物中得到波尔定246 mg,六驳碱524 mg和异波尔定317 mg。经HPLC分析,其纯度分别为97.35%,95.48%,97.54%。研究结果表明,pH区带逆流色谱能对豆豉姜中的主要活性成分(阿朴啡型生物碱)进行有效的分离制备。     

毛细管区带电泳直接分离与测定抗坏血酸对映体的研究(英文)

报告了用毛细管区带电泳法直接分离与测定抗坏血酸对映体的方法。考察了电泳电压,缓冲液酸度、浓度对分离的影响,样品由电进样方式(5kV/10s)引入未经处理的弹性熔硅毛细管(49cm×50μm i.d.,有效分离长度为37.5cm),并以40mmol/L硼砂(pH9.0)为电泳介质,在25kV下电泳,紫外280nm检测。D.L-抗坏血酸分别在75～1100μs/mL和25～120μs/mL范围内可进行定量分析,日间-RSD值分别为3.2％和7.2％(n=6)。     

(Ⅱ)尿激酶的精制

粗制尿激酶经DEAE-纤维素在pH6.4排它层析之后,再经DEAE-纤维素(事先以pH9.2,电导0.6mΩ~((?)1)的甘氨酸缓冲液平衡)柱层析分离,以pH8.8,电导6—7mΩ~(?(1))的上述缓冲液洗脱,比活为～5000CTA单位/mg·pr的尿激酶溶液通过724树脂层析柱(以O.01M Na_2HPO_4平衡),以同一缓冲液洗涤后,以0.01MNa_2HPO_4含有O.5M NaCI的无热源溶液洗脱尿激酶,产品收率～40％,比活40,000—50,000CTA单位/mg·pr。     

废弃烟叶中茄尼醇对照品的制备

建立从废弃烟叶中分离高纯度茄尼醇对照品的方法。首先采用石油醚萃取烟叶,动态皂化法皂化,硅胶柱层析进行粗分。制备型高效液相色谱采用甲醇∶乙醇=60∶40进行精制纯化。通过以上方法所得产物经ESI-MS、¹H-NMR和¹³C-NMR鉴定结构,高效液相色谱法测得纯度为99.7%,满足对照品的要求。本方法简便快捷,重现性好,所得产物纯度高,适合茄尼醇对照品的制备。     

耐碱凝胶体系的研制与应用

研究了一种新型耐碱凝胶体系,开展了聚合物浓度、体系pH值、温度、稳定性等因素对耐碱调堵剂性能的影响实验。实验结果表明:凝胶体系在30℃-80℃条件下,成胶时间在2d-15d可控,pH值范围在7-14之间,成胶黏度(0.3-2.3)×104mPa.s,突破压力梯度4MPa/m。该技术在大庆采油一厂三元试验区进行了两口井现场试验,见到了较好的增油降水效果。     

长效复合耐碱凝胶微球颗粒调剖技术

摘要：长效复合凝胶微球颗粒调剖技术是将微球颗粒调剖剂和凝胶组合以段塞组合方式注入地层,形成以颗粒调剖为支撑体,通过有一定粘度的凝胶调剖剂将其黏附于底层孔壁上,增加了段塞的封堵能力,提高了段塞封堵有效期和后驱注入液的波及系数。实验结果表明：凝胶体系在30－80℃条件下,成胶时间在2－15d可控,pH值范围在7－14之间,成胶粘度0.3－2.3?04mPa.s,突破压力梯度﹥4MPa/m。2008年在采油一厂进行了2口井的现场试验,3口见效井日产油由11.6t上升至20.2t,日增油8.6t;平均单井综合含水由93.1%下降至88.1%,下降了5.0个百分点。油井累计增油3299t,投入产出比 1：6.28。     

凝胶萃取浓缩分离大分子物质

用四种不同交联度的交联聚丙烯酰胺凝胶,研究了它们在去离子水及牛血清白蛋白、牛血红蛋白、精氨酸酶、聚乙二醇等大分子溶液中的溶胀速率和平衡溶胀比的变化规律。发现其平衡溶胀比越大,溶胀速率也越快;凝胶在大分子溶液中的平衡溶胀比总是小于它在水中的值,且随大分子溶液浓度增大,平衡溶胀比的减小程度增大;温度升高,溶胀速率和平衡溶胀比均增大。凝胶交联度越大,对大分子物质的分离效率越高,浓缩精氨酸酶时的最大值为53.4%。凝胶的再生可用加少量盐或丙酮或调节pH值等方法。     

大豆聚丙烯酰胺凝胶电泳制胶浓度选择

本文提出在聚丙烯酰胺凝胶电泳中,对未知样品宜先在C％=4.8％,T％=2～5％或C％=2.6％ T％=5～10％的系列浓度分离胶及C％=20％,T％=3.2％的浓缩胶中作圆盘电泳,选择该样品的最适分离胶浓度。然后再按此浓度作垂直平板电泳,并作加样量梯度实验,找出加样最适量,以达到样品在聚丙烯酰胺凝胶垂直平板电泳中的最佳分辨率。     

特种凝胶ZND成胶强度影响因素研究

针对油井恶性漏失的特种凝胶ZND在部分油田处理井漏问题上已经得到应用.通过室内实验研究了受ZND质量分数、交联剂质量分数、交联温度、交联时间及pH值等因素对特种凝胶ZND的成胶强度的影响.实验表明:质量分数1.5%ZND+0.04%间苯二酚+1.0%苯酚+1.0%六次甲基四胺+0.1%硫脲,经125℃高温交联16h形成的凝胶体系具有最佳成胶强度,并能在高矿化度和弱碱性环境中保持稳定性能,但当pH小于4时,凝胶将被破坏.研究结果对现场应用工艺的优化具有一定指导作用.     

中国黑白花优良种公牛精子透明质酸酶的分离纯化及部分性质研究

中国黑白花优良种公牛精子透明质酸酶经硫酸铵分级沉淀和 Sephadex 柱层析分离纯化,得到一个电泳纯品,活力纯化40倍.用 sephadexG-150凝胶过滤和 SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳测得分子量为65000.该酶的最适 pH 为3.5～4.5,最适温度为37℃～45℃,在室温下较稳定,用 Limeweaver-Burk 作图法求得 Km 值为6.06×10~(-4)mol/L.     

硫化氢对冻胶型堵剂的影响

研究了H2S对常规冻胶型堵剂成冻时间和冻胶强度的影响,这些冻胶型堵剂包括交联聚丙烯酰胺形成的铬冻胶和酚醛树脂冻胶.探讨了H2S对冻胶型堵剂影响的作用机理.结果表明:H2S对无机铬交联体系的影响较大,而对有机铬交联体系和酚醛树脂交联体系的影响相对较小;对于无机铬交联体系,H2S能迅速将Cr6+还原为Cr3+,提高交联HPAM的速度,而当H2S含量偏高时,被还原出的Cr3+会与过量的H2S生成Cr2S3沉淀,不能形成整体冻胶;对有机铬和酚醛树脂交联体系的影响主要体现在pH值的变化上.当选择冻胶型堵剂应用于含H2S的油气藏时,最好选用酚醛树脂冻胶.     

聚合物凝胶调剖剂配方优选及性能评价

 聚合物凝胶调剖技术是油田改善后期注水开发效果、保持稳产的有效手段。本文通过一系列单因素变量实验研究了多个因素对聚合物凝胶调剖剂的影响,从而确定了适合石南4井区头屯河组油藏的调剖剂配方并进行了性能评价。结果表明：在单因素变化情况下,聚合物凝胶调剖剂成胶强度随着聚合物、交联剂、稳定剂的浓度的增大而增大,随着水质矿化度的浓度增大而减小;成胶时间随着聚合物、交联剂、水质矿化度的浓度增大而减小,随着稳定剂浓度的增大而基本无变化。成胶强度随着老化时间、温度、剪切强度的增大而减小。随着调剖剂注入量的增大,阻力系数和残余阻力系数而逐渐增大,而且二者差距幅度加大;封堵率先缓慢上升,后快速上升,最后趋于平缓。针对石南4井区头屯河组油藏,建议采用的调剖剂配方为：聚合物（2500万相对分子量）浓度1500 mg/L、交联剂0.3%、稳定剂0.1%、水质矿化度26 g/L;注入方式为：前置段塞0.15 PV（孔隙体积）+主体段塞0.25 PV+保护段塞0.1 PV。     

中性笔出墨量与笔头结构匹配

为解决优质进口墨水与笔头匹配问题并保证中性笔的书写性能,基于有限元分析法,考虑中性墨水流变特性、笔头结构参数及加工误差等对出墨量的影响,建立中性墨水与笔头匹配的出墨量仿真模型并进行修正。结果表明,该出墨量模型的仿真结果与实际测试结果相近。该模型为中性墨水与笔头结构匹配出墨量的有效仿真提供了一种新方法,有助于提高出墨量仿真结果的准确性。