尿激酶短肽抑制剂的初步研究

以尿激酶为目标蛋白, 在噬菌体表面展示六肽库中对尿激酶的短肽类抑制剂进行了三轮特异性筛选. 提高噬菌体与尿激酶的比例及缩短作用时间从而提高筛选压力后, 与尿激酶亲和结合的噬菌体得到富集. 通过对第三轮筛选到的重组噬菌体的DNA序列分析, 获得一组相对保守的肽序列. 相应的合成短肽 NEPKAN 和VSPKVL 对尿激酶的抑制常数分别为32.5 μmol/L和88.6 μmol/L.     

尿激酶的提取与应用

尿激酶可用来治疗多种疾病，同时还可用来生产饮料及化妆品，本文介绍了尿激酶的提取工艺及应用领域。     

静脉与局部使用尿激酶治疗视网膜中央静脉阻塞疗效观察

对 2 0例视网膜中央静脉阻塞患者分别在静脉和局部使用尿激酶 ,静脉组 :(4～ 8)× 1 0 4 u尿激酶静脉点滴 ,每日一次 ;局部组 :5 0 0 0 u尿激酶球后或球旁注射 ,每日或隔日一次 .结果表明 :静脉组治疗效果及治疗时间均优于局部组     

不同剂量尿激酶在治疗胸腔积液的疗效比较

目的:比较观察不同剂量尿激酶在治疗渗出性胸腔积液的疗效.方法:将86例渗出性胸腔积液患者随机分为三组,三组均有用深静脉置管行胸腔闭式引流治疗;尿激酶1组为向胸腔内多次注入尿激酶10万单位;尿激酶2组为向胸腔内多次注入不同剂量尿激酶20～50万单位.结果:尿激酶2组的胸腔积液引流量较明显增加,且胸膜粘连、胸膜肥厚发生率较低.结论:胸腔内注入大剂量尿激酶可以更加明显减少渗出性胸腔积液的胸膜粘连、胸膜肥厚发生率,且无明显副作用.     

尿激酶B链的制备及性质研究

本文将巯基乙醇还原法与苯甲脒-Sepharose 4B亲和层析法相结合,于亲和柱上裂解了尿激酶蛋白的A、B链,制备出高纯度的尿激酶B链,活力回收达89.3％。样品经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测为均一单带,测得分子量为32KD,比活为214×10~3iu/mg蛋白,活性的最适pH为8.0。在体外测活系统中,尿激酶B链有类似于尿激酶的性质。若以纤维蛋白溶酶原为底物,测得B链的Km值为尿激酶的3.2倍。由此推测,天然形成的尿激酶结构更有利于纤溶反应。     

高分子量尿激酶的放射免疫测定

本文介绍了高分子量尿激酶放射免疫分析方法的具体程序以及人尿中高分子量尿激酶的测量结果。标记采用Hunter等改进的氯胺T氧化法。碘化前,高分子量尿激酶用二异丙基氟磷酸失活,以避免生物机体中干扰物质带来的不良影响。失活的高分子量尿激酶与lmci~(125)Ⅰ反应2分钟,反应液全部上Sephadex G—50柱层析,经鉴定,标记率为35—40％。高分子量尿激酶放射免疫测量程序为:反应管中加入一定体积的缓冲液,30μl~(125)Ⅰ标记的高分子量尿激酶(约2×10~4cpm),标准品或待测样品,反应抗体。总体积0.3ml,摇匀,4℃保温24小时,然后力口入20μlSPA菌体试剂,混匀后于37℃保温0.5小时,3500rpm离心10分钟,测量沉淀放射性。用本法测定5例正常成人尿中高分子量尿激酶值为14.6±6.1iu/ml,灵敏度为0.8iu/ml尿。     

高比活大分子尿激酶的纯化

本文总结了作者多年从事尿激酶研究的实践经验,设计出一条由D_(160)国产树脂、CM-纤维素和苯甲胨—Sepharose 6B亲和柱制备高比活大分子尿激酶的工艺路线。该法有快速、经济、有效的特点。尿激酶比活高达100000IU/mg·pr。大分子尿激酶占90％以上,纯化系数为218,活力回收按原尿计为12％。该法前期工艺可供设计生产路线时参考。若在此基础上再经SephadexG-100分子筛过滤或经羟基磷灰石分离,纯度可达150000IU/mg·pr,适合于对尿激酶的进一步研究用。     

瑞替普酶与尿激酶治疗急性心肌梗死的疗效比较

目的：观察瑞替普酶与国产尿激酶治疗急性心肌梗死（AMI）的临床疗效和副作用。方法：将172例AMI病人随机分两组。瑞替普酶组94例,给予瑞替普酶20mU,分2次,每次10mU,间隔30min静脉推注;尿激酶组78例,先予尿激酶100×10^4U静脉推注,后予100×10^4U溶于5％GS150ml内,30min内静脉滴注。两组均用注射用低分子肝素皮下注射,其余治疗也相同。结果：瑞替普酶组与尿激酶组的血管开通率、开通时间分别为85％与63％;（0．80±0．52）h与（1．36±0．55）h（P〈0．05）;CK和CK-MB峰值及峰值时间：两组差异无显著性（P〉0．05）;副作用：轻度出血率在瑞替普酶组与尿激酶组分别为4％与9％（P〈0．05）。结论：瑞替普酶治疗AMI的疗效优于尿激酶,且副作用小。     

小剂量尿激酶加低分子肝素治疗不稳定型心绞痛34例临床分析

笔者选择高危UAP34例给予小剂量尿激酶加低分子肝素及常规治疗。     

用脾内免疫法制备抗人尿激酶单克隆抗体

用常规免疫法制备抗人尿激酶单克隆抗体费时、费样品。本文采用脾内直接注射的免疫方法,利用杂交瘤技术制备了3C_6抗尿激酶单克隆抗体,3C_6单克隆抗体属IgM亚类,主要识别MW 54,000的高分子量尿激酶和MW 33,000的低分子量尿激酶。3C_6单克隆抗体与结构类似的胰蛋白酶和纤溶酶原无交叉反应,与胰凝乳蛋白酶原和胰凝乳蛋白酶有一定程度的交叉反应。     

抗人尿激酶单克隆抗体的制备

采用常规免疫和脾内免疫相结合的方法，利用杂交瘤技术得到两个能分泌抗人尿激酶单克隆抗体的杂交瘤细胞株１０Ｈ１０，１０Ｄ１２。它们分泌的单克隆抗体主要识别Ｍｒ．５４，０００的高分子量尿激酶和Ｍｒ．１８，０００的尿激酶Ａ链。两种单克隆抗体与胰蛋白酶，胰蛋白酶原，胰凝乳蛋白酶和胰凝乳蛋白酶原等丝氨酸蛋白酶和酶原无交叉反应。     

颈内动脉注射尿激酶治疗急性脑梗死的疗效观察

应用颈内动脉注射尿激酶治疗30例急性脑梗死患者,并与对照组（静脉滴注尿激酶）30例比较。结果显示治疗组疗效明显优于对照组（P＜0．01）,且无1例发生颅内出血。提示颈内动脉注射尿激酶治疗急性脑梗死,疗效显著而安全。     

尿激酶原活性测定方法研究

以双链尿激酶国际标准品（IS）为对照，用显色底物法和凝块溶解法测定糖基化和非糖基化的尿激酶原的酶活性，结果表明与凝块法相比，显色底物法测定两种形式的尿激酶原的酶活力相近，测量误差小，重复性好，更适于产品的质量控制。     

重组人尿激酶原的工业化制备与性质研究

将含有 pET2 9a prouk重组质粒的人尿激酶原工程菌经 10L种子罐培养及 10 0L发酵 ,IPTG诱导表达 ,其表达量为占菌体总蛋白的 2 0 % ,表达产物经体外变复性 ,CM 纤维素离子交换层析 ,Superdex 75分子筛层析及Affi preppolymyxinsupport亲和层析去热源 ,每 10 0L发酵液得重组人尿激酶原纯品 6g ,纯度达 95 %以上 ,比活大于 1.2× 10 4 IU /mg ,双链含量低于0 .5 % ,内毒素及热源含量、宿主蛋白残留量、宿主DNA残留量等均达到临床使用标准 .其分子量 (质谱测定 )、氨基酸组成、N、C 端氨基酸序列分析等均与理论值相符 .进行了等电点及肽图等性质研究     

原发性髂股静脉血栓形成诊断诊治探讨

三年来收治发病后三天内的急性原发性左髂股静脉血栓形成3例。第1例术后给肝素抗凝治疗,同时给低分子右旋醣酐、阿斯匹林、潘生丁等祛聚辅助治疗。出院后遗留下肢静脉功能不全。第2例术后除应用抗凝、祛聚等治疗外,还给尿激酶溶栓治疗,伤口两个多月才愈合,出院后下肢静脉功能良好。第3例单纯应用尿激酶溶栓,辅以祛聚药物,出院后下肢静脉功能良好。     

胸腔闭式引流联合尿激酶灌注治疗结核性胸膜炎的临床观察

目的观察胸腔闭式引流联合尿激酶灌注对结核性渗出性胸膜炎的治疗效果。方法75例初治结核性胸膜炎患者．在规范抗结核药物治疗基础上,随机分为常规治疗组（对照组）及闭式引流联合尿激酶灌注组（治疗组）,对照组反复胸腔穿刺抽液,每周2-3次;治疗组行胸穿留置中心静脉导管引流胸水,并每日尿激酶胸腔冲洗。比较两组病人胸水消失时间、住院治疗时间、胸膜粘连（包裹性胸腔积液）出现机会及治疗3个月后胸膜厚度。结果治疗组胸水消失时间（6．5±213）d,住院时间（11．8±5．2）d,没有病例出现胸膜粘连,3个月后胸膜厚度（1．8±0．7）mm;对照组胸水消失时间（11．4±5．1）d,住院时间（15．2±6．9）d,8例出现胸膜粘连,3个月后胸膜厚度（4．2±1．2）mm。结论胸腔闭式引流联合尿激酶冲洗治疗初治结核性胸膜炎患者可以加快胸水消失,缩短住院治疗时间,预防胸膜增厚粘连,改善患者预后。     

尿激酶原激活是其催化纤溶酶原激活的限速步骤

尿激酶原催化纤溶酶原的激活包括3个反应：（1）尿激酶原内在酶活性催化纤溶酶原转化为纤溶酶；（2）纤溶酶激活尿激酶原变成尿激酶；（3）尿激酶激活纤溶酶原，所以一直以来人们对尿激酶原激活纤溶酶原的过程知之甚少．研究发现EACA可以抑制尿激酶原催化的纤溶酶原激活。通过EACA对上述3个反应的影响进行逐个分析，观察到在EACA浓度为2．0mmol／L时，尿激酶原内在酶活性催化纤溶酶原激活的反应速度提高了4．5倍，尿激酶激活纤溶酶原的反应速度提高了6倍．相反地，纤溶酶激活尿激酶原变成尿激酶的反直被抑制了50％，此反应决定了EACA对尿激酶原催化纤溶酶原激活反应的抑制作用．该结果提示尿激酶原催化纤溶酶原激活反应的限速步骤是纤溶酶激活尿激酶原变成尿激酶，缘于纤溶酶和尿激酶原的赖氨酸结合位点的相互作用．