海蜇胶原蛋白的制备及理化性质研究

以海蜇加工下脚料为原料,建立在中低温条件下,以柠檬酸为提取剂的胶原蛋白制备工艺,并对海蜇胶原蛋白的理化性质进行分析.结果表明,海蜇胶原蛋白的最佳酶法提取工艺条件为:提取温度15℃、柠檬酸浓度0.05 mol·L~(-1)、胃蛋白酶添加量1.5%、料液比1∶2.0(w∶V)和提取时间8 h,在该条件下胶原蛋白提取率为97.41%.SDS-PAGE分析结果表明,其可能结构为[α_1]_3;胶原蛋白中,甘氨酸、脯氨酸和羟脯氨酸分别占总氨基酸的25.16%、7.62%和9.32%;傅里叶红外光谱分析表明,其保留了完整的三螺旋结构;黏度及溶解性特征显示,其等电点pI值在6~9之间;在pH值≤1和≥10范围,结构趋于不稳定,热变性温度为22.7℃,在大于1.0 mg·mL~(-1)的NaCl溶液中基本析出.     

鲤鱼胶原蛋白的过敏原性研究

以鲤鱼鱼皮为研究对象,通过碱溶、酸溶、NaCl盐析等方法从鱼皮中分离纯化得到了胶原蛋白.SDS-PAGE分析显示,鲤鱼胶原蛋白由分子质量约为120 ku和115 ku的2条α链（α1与α2）、分子质量约为250 ku的β链以及大分子质量的γ链组成.分析比较鲤鱼胶原蛋白与鲢鱼小清蛋白的基本性质,结果显示：2种蛋白质的pH...     

罗非鱼鳞胶原蛋白提取工艺研究

研究用胃蛋白酶从罗非鱼鳞中提取胶原蛋白的工艺。根据测定水解液中羟脯氨酸(HYP)的含量计算胶原蛋白提取率,采用单因素和正交试验确定胃蛋白酶水解鱼鳞制备胶原蛋白的适宜酶解条件。结果表明,采用底物质量分数7%,胃蛋白酶酶解罗非鱼鳞制备胶原蛋白的适宜温度、pH、加酶量、时间分别为65℃、2.0、2%、2 h。在适宜工艺条件下,胶原蛋白提取率可达94.24%。     

鲤鱼肌肉Ⅴ型胶原蛋白的分离纯化及其抗体制备

通过酸溶、胃蛋白酶酶解和氯化钠盐析等方法,从鲤鱼肌肉中纯化得到了V型胶原蛋白.SDS-PAGE电泳图谱分析发现,其至少由2条α链(α_1和α_2)组成,其中α1分子质量约为135 ku,α_2分子质量约为120 ku.通过圆二色光谱仪分析其二级结构,发现其具有胶原蛋白三股螺旋结构的典型特征,其热变性温度为30.5℃.将V型胶原蛋白作为抗原免疫新西兰大白兔,成功制备了多克隆抗体.采用免疫印迹法对该多克隆抗体的特异性进行分析,证明其仅与鱼类V型胶原蛋白产生反应,特异性良好.     

鱼皮胶原蛋白的纯化及酶解性质的研究

分别对鲨鱼、鲢鱼、草鱼、罗非鱼鱼皮的胶原蛋白进行提取、纯化并进行SDS PAGE电泳分析,对它们的酶解性质进行研究.结果表明,提取的胶原蛋白有较高纯度,是典型的I型胶原蛋白.4种鱼皮胶原蛋白均能被胰蛋白酶和蛋白酶K水解,两种酶酶切位点有差异.不同鱼种鱼皮胶原蛋白的一级结构不同.本实验的酶解条件是适宜的.     

响应面法优化酶解提取鳊鱼鱼鳞胶原蛋白的工艺研究

采用响应面法对酶解提取鳊鱼鱼鳞胶原蛋白的工艺进行优化。在单因素实验的基础上,根据Box-Behnken实验设计的原理,以酶解温度、pH值、酶解时间为自变量,以胶原蛋白含量为响应值进行响应面优化分析。结果表明:设定的3个影响鱼鳞胶原蛋白提取效果的因素,其影响大小依次为pH值酶解温度酶解时间;优化分析获得鱼鳞胶原蛋白的最佳工艺条件为:酶解温度31.32℃、pH值4.24、酶解时间1.95 h、加酶量1.5%,胶原蛋白的含量为883.64 mg/g。为了方便实际操作,将鱼鳞胶原蛋白的最优工艺条件修正为:酶解温度31℃,pH值4.2,提取时间2 h、加酶量1.5%,实际得到胶原蛋白含量为881.78 mg/g,实验结果与理论值基本吻合,说明模型的可靠性较高。     

酶解法提取草鱼鱼鳞胶原蛋白的工艺研究

对酶解法提取草鱼鱼鳞胶原蛋白的工艺进行了研究,以胶原蛋白提取率作为评价指标,选择选择酶解温度、pH值、加酶量、酶解时间作为考察因素,进行了正交试验,确定最佳的提取工艺方案为A2B2C3D1,即酶解温度30℃,pH值4,加酶量2％,酶解时间1h.在该条件下草鱼鱼鳞胶原蛋白提取率为92.28％.     

水提法提取鱼鳞胶原蛋白的研究

以混合鱼鳞为材料,采用水提法提取鱼鳞胶原蛋白,用单因素试验与正交试验优化提取工艺.最优提取工艺为:温度70℃,提取时间20min.料液比为1:40,得率为30.06%.用对二甲氨基苯甲醛比色法确定提取物中羟脯氨酸含量,根据羟脯氨酸含量进一步确定提取物中胶原蛋白含量为84.29%.     

氨基酸及溶剂环境对牛骨胶原热稳定性的影响

以牛骨为原料提取酸溶胶原蛋白(acid soluble collagen,ASC)和酶溶胶原蛋白(pepsin soluble collagen,PSC),分别测定其热变性温度并分析其氨基酸组成与分布。再以牛骨PSC为对象,研究了胶原所处溶剂环境(含水量、离子强度和p H值)对胶原热稳定性的影响。研究结果表明:牛骨ASC和PSC的热变性温度分别为70.30℃和69.93℃,均接近标准品,且在氨基酸组成与分布上相似。胶原蛋白中的亚氨酸和碱性氨基酸质量分数越高,胶原的热稳定性越强。在一定范围内,随着胶原含水量的增加,其热稳定性降低。在离子强度较低的体系范围内,胶原的热变性温度随着离子强度的增加而降低。当溶剂体系p H值为6.0时,胶原热稳定性最强。随着p H值继续升高或降低,热稳定性均降低。当p H值过高或过低时,热变性峰呈变小甚至消失趋势,胶原发生变性。     

从猪胸腺提取胸腺素α1的工艺

为了提高猪胸腺的利用价值,探索猪胸腺素活性物质的提取工艺.选取猪胸腺为原料,采用匀浆、凝胶过滤、离子交换层析和丙酮分级沉淀的方法纯化胸腺素α1, 并用Bradford法检测蛋白含量,用SDS-PAGE电泳测定蛋白纯度.将猪胸腺组织匀浆、三次冻融和80 ℃热变性纯化后,上清采用Sephadex G-50柱填料凝胶过滤,然后进行阴离子交换树脂DEAE-C32离子交换层析和丙酮分级沉淀,通过真空冷冻干燥,最后得到胸腺素α1, 纯度为95%以上, 得率为3.84×10 -5.最终得到提取胸腺素α1的有效工艺.     

龟皮胶原蛋白的提取及结构表征(Ⅰ)

采用酶法从乌龟皮中提取胶原蛋白,用聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)方法检测龟皮胶原蛋白多肽产品分子量的分布,并将龟皮胶原蛋白和Ⅰ型胶原蛋白样品进行液相色谱分析(HPLC),比较其氨基酸成分和含量.SDS-PAGE电泳结果分析表明龟皮胶原为Ⅰ型胶原蛋白,分子量约为288ku.龟皮胶原蛋白中,甘氨酸的含量最高,占总量的24.69%;其次是谷氨酸、精氨酸和丙氨酸,分别为9.95%、8.08%和9.31%;天冬氨酸、赖氨酸、丝氨酸、苏氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、异亮氨酸、缬氨酸、酪氨酸等含量在5.58%～1.28%之间;组氨酸和蛋氨酸的含量最低,仅占0.79%和0.09%.由于龟皮胶原蛋白的含量高于Ⅰ型胶原蛋白,且与Ⅰ型胶原蛋白的氨基酸含量差异显著,因此,龟皮胶原蛋白可以作为一种重要的皮胶原进行开发和利用.     

丝状真菌发酵产油脂培养基及发酵条件的优化研究

实验以丝状真菌为出发菌株,采用玉米水解液为培养基质进行深层发酵培养,探索了不同糖度、氮源、温度、pH值和发酵时间等参数对丝状真菌产油脂的影响。实验确定最佳工艺参数为：玉米水解液13°Bx,2．4％NaNO3为氮源,3％玉米浆,pH值为5．5,26℃下发酵培养61h,油脂得率13．69％,菌体生物量19．45g／L。微生物油脂中主要含有16碳和18碳系脂肪酸,利用气相色谱法分析微生物油脂的脂肪酸组成如下：棕榈酸（17．16％）,棕榈油酸（1．63％）,硬脂酸（1．87％）,油酸（58．37％）,γ-亚麻酸（12．44％）,α-亚麻酸（6．22％）。     

产转糖基β-半乳糖苷酶菌株F3的鉴定、产酶条件及转糖基活性研究

菌株乃从土壤中筛选得到,具有产生转糖基β-半乳糖苷酶（β-galactosidase）的特性。根据形态观察及18S rDNA序列分析;菌株乃被鉴定为扩张青霉（Penicillumexpansum）。通过单因子试验和正交试验,对菌株乃产生转糖基阻半乳糖苷酶的培养基组成及发酵条件进行了优化。优化后的培养基组成为葡萄糖2％、酵母粉1％、蛋白胨1．5％、氯化钠0．3％。在初始pH6．0,28℃培养40h时,其产酶量为2245．2U／L,比优化前提高约3倍。菌株乃产生的转糖基肛半乳糖苷酶以pH4．5缓冲液配制的30％乳糖为底物,50℃反应24h,低聚半乳糖产量为30．6％,其中80％以上为三糖。     

新型含吡啶环芳香二胺及其聚酰亚胺的微波辐射合成

在微波辐射条件下,首先由改进的Chichibabin反应和水合肼催化还原合成了一种新型含吡啶环的芳香二胺(PBAP),然后由此经"两步法"分别制备了其均聚和共缩聚聚酰亚胺.利用FT-IR和1H NMR对PBAP和两种聚酰亚胺的结构进行测试分析,通过TGA和溶解性能测试对聚酰亚胺的性能进行分析.结果发现:通过共缩聚方法在聚酰亚胺分子链中引入柔性的醚键、大的苯环侧基和芳香杂环,使其在保持良好的热稳定性(在N2中的T10%为569.5℃)的同时,可进一步提高聚合物的溶解性能,使其具有一定的加工使用性能.     

胶原Ⅳα1链NC1结构域基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达

 胶原中多个成分如ⅩⅤ,ⅩⅤⅢ的NC结构域能抑制血管内皮细胞增殖和迁移,具有抑制肿瘤生长和转移的活性.从胎盘组织中提取总RNA,根据文献报道的胶原Ⅳα₁链cDNA序列,设计一对特异性引物,应用RT-PCR方法扩增出胶原Ⅳα₁链NC1结构域基因.DNA序列测定发现,扩增得到的基因与文献报道序列存在单个核苷酸变异(A132C),编码氨基酸(Gly)不变.将扩增得到的胶原Ⅳα₁链NC1结构域基因克隆到原核表达载体pPROEXHTb上,并在大肠杆菌BL21中进行体外表达.     

2-取代间苯二酚化合物的合成

采用改进工艺,以间苯二酚（DHB）和叔丁醇（TBA）为原料合成重要有机中间体2-取代间苯二酚．DHB经过二叔丁基化、异丙基化和脱二叔丁基化3步反应合成了PDHB．在65-70℃,以酸性阳离子交换树脂（商品名NKC-9）作为催化剂,DHB与TBA反应合成4,6-二叔丁基间苯二酚（BDHB）的收率和纯度分别为85．8％和98、77％．BDHB与溴代异丙烷在NaOH水溶液中,于70℃反应5-6h,生成2-异丙基-4,6-二叔丁基间苯二酚（PBDHB）,收率和纯度分别为61．6％和96．53％．PBDHB在浓硫酸催化下,以二氯甲苯作为溶剂,经脱叔丁基反应得到PDHB。收率和纯度分别为76．7％和96.14％．改进后工艺可以合成收率、纯度均较高的PDHB,同样可以合成2-乙基（丁基、苄基）间苯二酚．     

光辅助引发制备两性离子型P（AM-DAC-AANa）共聚物

采用光辅助引发技术,通过水溶液聚合法制备丙烯酰胺（AM）、丙烯酰氧乙基三甲基氯化铵（DAC）和丙烯酸钠（AANa）的共聚物P（AM-DAC-AANa）.考察了m（DAC＋AANa）∶m（AM）、引发温度、单体（AM＋DAC＋AA）质量分数、反应液pH值、硫脲质量分数、偶氮类引发剂质量分数等因素对聚合反应结果的影响,并与传统的引发剂引发聚合结果进行了对比.在m（DAC＋AANa）∶m（AM）=15∶85,引发温度20℃,单体质量分数32％,pH值6,硫脲质量分数1.0％,偶氮类引发剂质量分数0.010 0％的条件下,得到了溶解时间66 min,特性黏数为13.56 dL·g-1的聚合物,并用FT-IR对其结构进行了表征.     

牛乳乳铁蛋白的纯化及热处理对其分子特性的影响

乳铁蛋白是牛乳中一种重要的碱性蛋白,相关基础与应用研究已引起广泛关注.首先以鲜牛乳为原料,通过脱脂、除酪蛋白、SP Sepharose Big Bead阳离子交换层析及Superdex 200凝胶层析组合方法、超滤浓缩等过程,最终获得乳铁蛋白样品,纯度约为94.71%.进而,研究了热处理对乳铁蛋白的分子特性的影响.通过差示扫描量热法测定得到的乳铁蛋白热变性温度为73.1℃.通过圆二色谱研究了热处理(63℃30 min;72～75℃20 s;85℃10 min;95℃10 min)对乳铁蛋白二级结构的影响,结果表明,随着处理温度的增加,乳铁蛋白的α-螺旋构象逐步转变为β-折叠构象,蛋白质分子排列更为有序,分子的结构变得更加紧密,蛋白质分子发生变性趋势明显增加.