人工分子伴侣介导液相体系中肌球蛋白热稳定性的研究

为了进一步提高鱼蛋白的热稳定性,扩大水产蛋白的应用范围,本研究以罗非鱼鱼肉为原料来提取肌球蛋白,并对其进行了热处理,同时以浊度、溶解度、总巯基含量和表面疏水性为指标,试验了十二烷基硫酸钠(SDS)和β-环糊精(β-CD)的添加对肌球蛋白热变性聚集的抑制效果,探讨人工分子伴侣(SDS-β-CD)介导液相体系中肌球蛋白热稳定性的改善.单因素影响的分析表明,在试验范围内,在p H 6.0,SDS添加量为5 mmol·L-1和蛋白质量浓度2 g·L-1的条件下,于50℃热处理30 min后添加β-CD(SDS与β-CD的比例为1∶2),可以有效抑制肌球蛋白的热变性聚集;热变性抑制机理的分析显示,添加SDS和SDS-β-CD均能有效地抑制热升温处理(升温速率1℃·min-1,30~80℃)对肌球蛋白溶解度和浊度的影响(p≥0.05),抑制热处理对蛋白分子巯基的破坏作用,降低蛋白质分子间的相互作用,由此抑制肌球蛋白热处理过程中的变性聚集,从而改善体系的热稳定性.     

绿豆抗性淀粉的制备及特性

以绿豆淀粉为原料,通过压热处理、压热协同酶法处理制备高含量抗性淀粉,研究了淀粉乳含量、加酶量、脱支时间、凝沉温度和时间对抗性淀粉形成的影响,并利用扫描电子显微镜、X射线衍射仪和差示扫描量热仪分别对淀粉颗粒形貌、结晶结构和热特性进行表征.结果表明:原淀粉在121℃下压热处理20min后得到的糊化淀粉,在55℃、普鲁兰酶用...     

伸展态β-乳球蛋白重折叠过程的动力学特性

从蛋白质变性的渐变模型及构象态渐变的观点出发 ,对伸展态 β -乳球蛋白的重折叠过程进行了分析 ,发现蛋白质分子从伸展态到最终折叠态历经一系列中间稳定态 .尿素浓度梯度电泳实验结果显示 ,存在两条不同的折叠途径 .在不同的尿素浓度范围内 ,蛋白质分子的折叠过程具有不同的动力学特性     

高压对朊蛋白构象和动力学的影响

蛋白质在溶液中是多种构象并存的一个热力学系统,不同的构象以一定的概率在不同的态之间互相转变。作为一个热力学体系,不同构象存在的概率受到热力学变量的影响,压强作为一个基本的热力学变量,其变化将影响到蛋白质的构象分布和动力学行为。压强的增大通常会减小蛋白质的体积,从而可以通过增大压强开展对常压下难以观察的构象进行研究,这些构象对于揭示蛋白质的生物学功能具有重要意义。以朊蛋白为研究对象,通过分子动力学模拟方法研究高压诱导下蛋白质的构象变化。研究结果表明:水分子在高压下的排列趋向于有序,水分子的有序排列直接影响到与水分子有密切接触残基的动力学行为;高压下水分子能够渗入二级结构的疏水核心,破坏β片层的二级结构。揭示高压诱导下朊蛋白构象转化的分子机制,为蛋白质的高压变性研究提供理论依据。     

蛋白质变性的渐变模型

通过对典型蛋白质变性实验的分析 ,证明了在目前蛋白质变性研究领域中普遍使用的二态模型与实际变性过程不符 .在分析已有实验结果的基础上 ,给出了反映蛋白质变性过程特征的新模型———渐变模型 ,该模型显示出蛋白质分子变性是一个构象渐变的连续稳态过程 .     

热处理对乳蛋白质的影响

牛乳中的蛋白质是人体吸收和利用的营养物质之一,对乳制品的品质有着重要影响。牛乳的热处理是乳品工业中不可缺少的一个环节,其目的在于抑制牛乳中微生物的繁殖,延长产品的货架期并提高产品质量,但加热处理会对牛乳中的乳清蛋白、酪蛋白的内部作用力、酪蛋白各单体、酪蛋白胶束、乳蛋白之间的相互作用,蛋白质氨基酸组分以及美拉德反应等产生不同影响,促使乳中蛋白质的一些物化性质发生变化,造成牛乳营养成分的损失,甚至产生有害的新物质。通过对牛乳热处理过程中蛋白质的变化进行详细论述,以期对乳制品的生产提供一定的参考。     

蛋白质构象与折叠行为的研究

蛋白质结构预测与蛋白质折叠是生命科学研究的核心问题之一,也是后基因时代推动生物学朝着定量化发展的重要方向之一,它是分子生物学中心法则还没有解决的一个重大生物学问题.简单介绍了蛋白质分子的结构特点,讨论了蛋白质分子构象研究的重点,即蛋白质结构预测与蛋白质折叠.重点介绍了拥挤环境对蛋白质构象的影响和蛋白质分子的力学性质,这是蛋白质分子构象研究的深入.这些介绍可以帮助我们更清楚地认识蛋白质分子.     

热历史和剪切历史对含蜡原油流变性的影响

热历史和剪切历史对含蜡原油的非牛顿低温流变性影响显著。以具有代表性的番禺原油为例,通过一系列的热处理和剪切处理试验,对含蜡原油进行了流变性能试验。试验结果表明:热处理温度、加热次数、剪切速率、降温速率等对于含蜡原油的低温流变性均具有一定的影响。当热处理温度为65℃时,原油的低温流变性最好,其凝点降幅高达13℃左右;当热处理温度为55℃时,含蜡原油低温流变性严重恶化;在0.5~1.5℃/min的降温区间内,剪切速率越大,降温速率越小,对含蜡原油流变性影响程度越大,最大降黏幅度达73%左右。     

利用光谱技术定量研究蛋清溶菌酶结构与功能关系

通过对蛋清溶菌酶(hen egg white lysozyme,HEWL)热处理过程中圆二色谱(CD)和紫外差谱(UV diff.)信号测定,利用蛋白质去折叠二态转变模型,对CD和UV diff.信号进行最小二乘法非线性拟合,定量获取蛋白质稳定性热力学数据.实验结果表明:随pH下降,蛋白质构象稳定性降低.功能性质分析发现:随pH下降,HEWL的酶活性降低,但表面活性(乳化性和乳化稳定性)升高.进一步,将蛋白质构象稳定性(ΔG_(25℃,water))数据和酶活性、乳化性和乳化稳定性数据进行相关性分析发现:蛋白构象稳定性与酶活性、乳化活性和乳化稳定性呈较好的相关性.这些结果说明:蛋白质构象稳定性降低引起蛋白质柔性增加,使其铺展到油水两相界面能力提高.该研究为从分子水平定量研究食品蛋白结构和功能关系奠定了基础.     

热处理对高强变形锌合金ZAT10组织与性能的影响

以高强变形锌合金ZAT10为研究对象,通过热分析仪(DSC)、X线衍射(XRD)、扫描电镜(SEM)和能谱仪(EDS)、力学性能测试以及模拟海水腐蚀实验,研究高强变形锌合金的相组成以及热处理对高强变形锌合金的相组织、力学性能和抗腐蚀性能的影响.研究结果表明:高强变形锌合金ZAT10是由η锌相和(α+η)相的层片状共析体组织组成;280～300℃热处理1h使ZAT10锌合金层片状共析体组织转化为粒状组织,350～360℃热处理1h则层片状组织消失;热处理温度从250℃升到350℃,ZAT10合金的抗拉强度由391 MPa增加到498MPa,伸长率由20％下降至5％;随着热处理温度的提高,合金的抗腐蚀性能提高.     

用电泳和高效液相色谱法检测水牛乳中掺入的普通牛乳

本研究的目的是建立检测水牛乳中掺入普通牛乳的方法．在德昌水牛乳中添加不同比例的普通牛乳,用电泳或高效液相色谱分析乳清蛋白组成,根据乳中β-乳球蛋白在水牛与普通牛之间的差异,可准确鉴定水牛乳中掺入的普通牛乳．聚丙烯酰胺凝胶电泳方法能检测到掺入的1％的普通牛乳;反相高效液相色谱法能在30min内检测到掺入的10％的普通牛奶．本研究为水牛乳的质量监控提供了可行的技术手段．     

牛小肠碱性磷酸酶部分性质研究

摘要：用正丁醇抽提、硫酸铵分级沉淀、EAE-32柱层析和Sephadex G-150 凝胶过滤,从牛小肠中分离纯化出牛小肠碱性磷酸酶（BIAP）.提纯倍数为50.69,比活力为48.87U/mg蛋白.酶液经SDS-PAGE呈现单一条带,且不含DNA核酸酶.该酶催化对硝基苯磷酸二钠（p-NPP）水解反应的最适pH值为9.7,pH小于6.5大于11.5均不稳定;最适温度为45℃,高于50℃不稳定.Km值为0.29mmol/L.45℃,pH9.7时最大反应速度（Vmax）为4.6μmol/(L•min).利用SDS-PAGE测定酶亚基的分子量为66KD. Mg2+、Mn2+和Ca2+对酶有不同程度的激活作用,Zn2+和EDTA对酶有抑制作用。随着Mg2+、Zn2+和EDTA浓度增加,270nm处紫外吸收值增加.     

绿豆几丁质酶的纯化和酶学性质分析

利用亲和色谱Affi-gel和离子交换色谱SP-Toyopearl从绿豆种子中分离纯化出几丁质酶.纯化的蛋白通过SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定达到电泳纯,分子质量为30.8kDa.还原和非还原状态下的几丁质酶蛋白均显示单一区带,说明该几丁质酶为单倍体蛋白.通过等点聚焦法测得pI为6.3.该酶的最适pH为5.4,最适反应温度为40～50℃.     

天冬氨酸酶的分离提纯及其变性复性的研究

以E.Coli J-3为原料,经菌体破碎、链霉素处理、热处理、硫铵分级、磷酸钙胶处理、DEAESephadex A-50柱层析、羟基磷灰石柱层析、Ultrogel AcA 34凝胶过滤、HPLC层析九个步骤,得到聚丙烯酰胺梯度凝胶电泳纯的天冬氨酸酶。并探讨了各种环境因素对变性复性程度的影响。结果表明,不同的变性、复性条件会诱导不同构象的产生。诱导酶的性质与天然酶不同。     

双孢蘑菇子实体超氧化物歧化酶(SOD)的分离纯化及部分性质

采用硫酸铵分级盐析、DEAE-Cellulose-52离子交换柱层析、Sephadex G-150分子筛柱层析分离纯化了双孢蘑菇(Agaricus bisporus)子实体超氧化物歧化酶.纯化了31倍,回收率为10.51%,纯酶比活力为5 512.6 u/mg,酶的最适作用温度为25 ℃,最适pH值为8.0,酶在25 ℃以下比较稳定,亚基分子质量为21 kD,全酶分子质量为43 kD, 该酶由2个相同的亚基组成.     

脂蛋白酯酶的分离纯化及其部分性质研究

将Candida rugosa用橄榄油诱导培养,所得上清液依次经过截留分子量10 000中空纤维柱浓缩,85%硫酸铵沉淀,然后经过DEAE-Sepharose F.F.离子柱和Phenyl Sepharose CL-4B柱进行交换层析和疏水层析,得到了活力达6.04 U/mg的脂蛋白酯酶,纯化倍数和回收率分别为13.8倍6.6%。所得纯化酶经还原和非还原SDS-PAGE分析为单一蛋白染色带,HPLC显示纯度为95%以上。该酶的最适温度为40℃～50℃之间,最适pH为7.5,具有较强的热稳定性和酸碱稳定性,在最适温度和pH条件下该酶Km值为3.4×10-4mol/L。     

绵羊β—乳球蛋白基因5′端及上游调控序列的PCR扩增的方法学研究

本对绵羊β-乳球蛋白基因5′端及上游调控序列的PCR扩增的方法扩增进行了研究。经比较分析,将从羊血中提取的绵羊基因组DNA的模板用量定为4μl(0.4μg/μl）,TaqDNA聚合酶用量为0．83μl(3u/μl）,变性为94℃1min,退火为64℃1min72℃延伸2min,循环次数为32次,获得的PCR产物经电泳检测,条带明亮,特异性高,大小为898bp。经序列分析发现,与已知基因组序列一致性达99％以上,可用于指导外源基因在转基因动物乳腺中表达。     

铜绿微囊藻气囊结构蛋白GvpC的表达纯化与晶体生长研究

对GvpC进行了初步晶体学研究。首先对GvpC进行分子克隆,利用原核表达系统在体外进行异源表达;结合变复性和凝胶过滤层析的方法纯化GvpC;通过圆二色谱的方法鉴定GvpC的复性效果;运用坐滴蒸汽扩散法进行晶体初筛。结果表明：GvpC在大肠杆菌表达系统中表达为包涵体;通过变复性和凝胶过滤层析能纯化出纯度较高的蛋白;圆二色谱证实复性后的GvpC形成了正确的二级结构,复性效果较佳;通过晶体初筛获得了GvpC的晶体,后续即可通过解析GvpC的晶体结构而获得其三维结构。     

洋葱细胞骨架制备条件优化及影响因素研究

以洋葱为材料,研究1％TritonX-100抽提非骨架蛋白时间、细胞环境温度和紫外线照射活细胞对洋葱细胞骨架形态观察效果的影响。结果表明：1％TritonX-100抽提非骨架蛋白25min观察效果较好,细胞处在20℃和4℃环境下骨架清晰完整,呈网络状分布;-18℃、50℃及紫外线照射60min处理均会造成细胞骨架不同程度的解聚,影响细胞骨架的观察。