大肠杆菌的培养及L-天冬酰胺酶活力的测定

讨论了大肠杆菌L-天冬酰胺酶发酵液酶活力的影响因素，筛选了大肠杆菌产酶的优化条件。发现了发酵液酶活力的最适pH随缓冲介质的变化而变化；甘氨酸介质中，pH6．50～9．50均适于酶活测定，且pH8．00时酶活最高；硼酸、Tris、磷酸介质中，在pH8．50时，酶活力依次下降；酶反应的适宜温度40～50℃．对菌株培养的研究表明，葡萄糖对产酶有抑制作用，适当提高摇床转速可使发酵液酶活力由原来的136U／mL增至145U／mL，在确定的最优培养条件37℃，pH7．00，250r／min下，产酶稳定期可持续12h。     

土壤中产a-淀粉酶菌株的分离和筛选

目的：从土壤中筛选产a-淀粉酶活力较强的菌株并对其酶学性质进行初步研究。方法：结合选择性分离培养,碘液检测法,酶活力测定和形态学检测等方法从土壤中分离出产酶活力较强的菌株,并对其所产仅一淀粉酶的最适反应温度和pH值进行研究。结果：共分离到4株能产a-淀粉酶的菌株,其中菌株4产酶活力最高。该菌株所产仅一淀粉酶最适反应温度为50～60℃,最适pH值为6．2。结论：分离到1株产a-淀粉酶酶活力较强的芽孢杆菌,所产仪一淀粉酶属于中温淀粉酶,最适pH值为6．2。     

高产耐热3''''-磷酸二酯酶菌种的选育及酶性质的研究

以粘红酵母(Rhodotorula glutinis)Q0402为出发菌株,经紫外谤变,得到一株粘红酵母QX0402.5 L发酵罐的发酵液中3'-磷酸二酯酶酶活力可达250 U/mL,为文献报道过的最高酶活力的2.5倍.所产生的3'-磷酸二酯酶在70℃下保温1 h,酶活力仍有50%以上.该酶最适反应pH为5.4,最适反应温度为60℃,反应3 h的反应转化率为56.37%,底物浓度可以提高到3%,生产效率为文献报道的3倍.     

产单宁酶真菌的筛选及产酶条件

从铁冬青等4种植物的新鲜茎、叶组织中分离得到52株真菌,经平板透明圈法初筛得到18株产单宁酶菌株。初筛所得菌株经液体发酵,显示1株木霉属真菌(Trichoderma viride)(No.MYP07)酶活力最高,达0.248 μmol/(min·mL)。采用单因素结合正交实验,得到菌株MYP07的最佳发酵条件为：单宁100 g/L,蔗糖10 g/L,(NH4)2SO4 3 g/L,装液量为30 mL(250 mL锥形瓶),起始pH为5.0,温度30 ℃,转速140 r/min。在此条件下,菌株MY-P-07发酵48 h酶活力达到0392 μmol/(min·mL)。     

非水相酶促酯交换反应生产类可可脂

对利用固定化脂肪酶催化乌桕脂与硬脂甲酯进行酯交换生产类可可脂作研究了。考察了无机、水活度、温度以及有要溶剂等因素对酯交换反应的影响,进行了产物分离和性能检测以及固定化脂肪酶的稳定性实验。结果显示：ＣａＳＯ４显著促进脂肪酶酯交换活力;最适水活度为０．３５－０．４５;在正己烷溶剂中的酯交换反应最佳温度为６０℃,乌桕脂：硬脂酸甲酯（ＣＶＴ：ＳＭＥ）＝１：３（ｍ／ｍ）,每克底物加入正己烷１．０ｍＬ,固定化     

高产耐热3′-磷酸二酯酶菌种的选育及酶性质的研究

以粘红酵母(Rhodotoru la g lutin is)Q 0402为出发菌株,经紫外诱变,得到一株粘红酵母QX 0402。5 L发酵罐的发酵液中3′-磷酸二酯酶酶活力可达250 U/mL,为文献报道过的最高酶活力的2.5倍。所产生的3′-磷酸二酯酶在70°C下保温1 h,酶活力仍有50%以上。该酶最适反应pH为5.4,最适反应温度为60°C,反应3 h的反应转化率为56.37%,底物浓度可以提高到3%,生产效率为文献报道的3倍。     

纤维素酶产生菌的筛选及产酶条件的研究

目的：从三峡地区丘陵地带采集样品中分离以稻草秸秆粉为碳源的产纤维素酶菌株．方法：以刚果红为显色剂,采用CMC—Na固体培养基初步筛选产酶的微生物,然后将透明圈直径与菌落直径比值较大的菌株分离纯化后,进行摇瓶复筛,最后经过单因素实验和正交实验优化该茵珠的产酶条件．结果：分离得到一株产纤维素酶活力较高的菌株（X3）,经初步鉴定其为曲霉属,该菌株产纤维素酶的最佳条件为：培养温度28℃、培养时间72h、初始pH值6、装量为15mL／250mL三角瓶．在此条件下FPA酶活为2．413IU／mL、CMC酶活为2．406IU／mI—J3一葡萄糖苷酶活为10．633IU／mL,分别是菌株X3初始酶活的l_04倍、2．20倍和1．19倍．结论：通过产酶条件优化后,菌株X3各酶活分别提高．     

枯草芽孢杆菌寡聚-1,6-葡萄糖苷酶基因在毕赤酵母中的表达研究

根据枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）寡聚-1,6-葡萄糖苷酶基因序列设计引物,以pHBM003为模板,扩增得到寡聚-1,6-葡萄糖苷酶基因,克隆至毕氏酵母（Pichia pastoris）表达载体pHBM905上,获得重组毕氏酵母表达载体pHBM9053．将此质粒分别转化毕氏酵母GS115、KM71和SMD1168菌株,筛选获得重组毕赤酵母GS115（pHBM9053）、KM71（pHBM9053）和SMD1168（pHBM9053）;然后进行摇瓶诱导培养,这3株毕氏酵母分别在诱导培养60h、48h和24h后,酶活力达到最高,对应为2．233u／mL、0．34u／mL和1．235u／mL;GS115（pHBM9053）所产寡聚-1,6-葡萄糖苷酶的最适反应温度为75℃,最适反应pH值为6,在30～75℃、pH8～9范围内较稳定．     

枯草杆菌蛋白酶水解大豆胰蛋白酶抑制剂的研究

采用改进的BAPNA法探讨了枯草杆菌蛋白酶对大豆胰蛋白酶抑制的水解作用,通过实验了最适反应条件为：反应温度40－60,PH值7．5－8．5,酶活力大于等于40000units/mL以及40min的反应时间。     

利用牛蒡菊糖筛选产菊糖酶菌株的研究

筛选出一株能分解牛蒡菊糖并产生低聚糖的菌株，经鉴定为黑曲霉AC1．正交设计法优化摇瓶发酵产菊糖酶的条件，实验结果表明：最佳发酵条件为基质菊糖质量浓度为0．03g／mL，pH为6．0，磷酸氢二钾质量浓度为0．006g／mL，酶活力可达26．41U／mL．利用高效液相色谱检测AC1产生的菊糖酶粗酶液分解牛蒡菊糖后的产物，结果表明：经分解后检测出低聚糖的存在．对AC1产生的菊糖酶粗酶液的酶学性质分析，结果表明：pH5．5，50℃反应温度下表现出最大且稳定的酶活力．     

椰子油为原料酶法制备脂肪酸甲酯

以椰子油为原料利用固定化Candida antarctica sp.99-125脂肪酶转酯化制备了脂肪酸甲酯。分析了椰子油的脂肪酸组成,并测定了椰子油平均分子量,考查了关键因素对反应的影响及反应历程。实验结果表明:椰子油平均分子量为655.27;最优反应条件为:酶最小加入量为20%,水加入量为15%,正己烷加入量为4mL/2 g椰子油。此反应条件下原料油转化率达到90%。     

固体碱MgO/ZrO2催化大豆油制备生物柴油

采用共沉淀法制备固体碱催化剂MgO/ZrO2,并以此催化大豆油与甲醇酯交换反应制备生物柴油。考察MgO含量和催化剂焙烧温度对催化剂活性的影响,以及优化酯交换反应的工艺条件,结果表明:在MgO质量分数为15%、焙烧温度700℃、反应时间3 h、反应温度60℃,醇油物质的量比12∶1和催化剂用量为大豆油质量的3%的条件下,生物柴油的产率可以达到82%以上。该催化剂对酯交换反应具有较高的催化活性和较好的稳定性。     

Zr-0．5-550固体碱催化大豆油制备生物柴油的研究

利用浸渍法,以ZrO2为载体,Na2CO3为负载物,制备了Zr-0．5-550固体碱纳米催化剂,考察催化剂制备条件对催化活性的影响,结果表明：nZs/nNs（物质的量比）为0．5,煅烧温度为550℃时,制备的催化剂的活性最佳．同时研究利用该催化剂催化大豆油制备生物柴油的工艺条件,结果表明：醇油物质的量比12：1、催化剂用量5．0％、反应时间4h和反应温度60℃,生物柴油的产率可达97．96％．该催化剂具有催化活性高和良好的重复使用性．     

离子液体中6-O-(11-十二烯酸)葡萄糖酯的脂肪酶催化合成及其表征

为了探索脂肪酶在离子液体中选择性地催化葡萄糖与11-十二烯酸乙酯的转酯化反应,通过不同脂肪酶在不同离子液体中进行转酯化反应,并用单因素法研究离子液体种类、温度、底物的比例、体系含水量和脂肪酶含量对反应产率的影响,优化反应条件。反应产物的结构通过红外光谱、高效液相色谱、质谱和核磁共振等表征。结果表明:脂肪酶Novozym-435在离子液体1-正丁基-3-甲基咪唑氟硼酸盐[BMIM][BF4]中,当反应温度为55℃、酶浓度20mg/mL、葡萄糖/11-十二烯酸乙酯的摩尔比1∶2、体系的水含量为2%时,获得糖酯的产率最高,Novozym-435可以重复使用7次。脂肪酶Novozym-435在离子液体[BMIM][BF4]中选择性转酯化反应的产物为6-O-(11-十二烯酸)葡萄糖单酯。     

KOH/Al_2O_3固体碱催化酯交换合成生物柴油的研究

采用等体积浸渍法制备了KOH/Al_2O_3负载型固体碱催化剂,并将其用于菜籽油与甲醇酯交换法合成生物柴油的研究;分别考察了催化剂附载量、煅烧温度、醇油摩尔比、反应温度、反应时间等条件对生物柴油产率的影响;结果表明:用等体积浸渍法,在400℃煅烧5 h,制得负载量为20%(w)的KOH/Al_2O_3催化剂.当催化剂用量为5%(w),醇油摩尔比为12:1,在60℃下反应2 h后,生物柴油产率高达92.3%(w).运用X-射线衍射、比表面积测定等手段对催化剂结构进行了表征,结果表明催化剂的活性与其晶相和比表面积密切相关.     

超声作用下的酶促废油脂转酯反应

探讨了超声对无溶剂体系中固定化脂肪酶Novozym435催化废油脂转酯反应的促进作用，研究了超声功率、超声处理方式等对酶反应速度及酶操作稳定性的影响．结果表明：对酶进行适宜的超声预处理（20kHz，80W，30min）能显著提高Novozym435催化废油脂转酯反应的速度；经超声预处理的Novozym435有良好的操作稳定性，反应10批次后．酶活下降甚微．     

氢氧化钡催化蓖麻油酯交换制备生物柴油

以蓖麻油为原料,用氢氧化钡作为非均相碱催化剂,酯交换反应制备生物柴油.比较了氢氧化钡与其他典型催化剂催化的产率,研究了反应醇油摩尔比、催化剂用量和反应时间对生物柴油收率的影响.结果表明,蓖麻油在以氢氧化钡为催化剂的酯交换反应中适宜条件为:醇油摩尔比为6∶1,蓖麻油与催化剂摩尔比为10∶1,反应时间20min,在此条件下生物柴油收率达98.35%.     

氢氧化钠/聚丙烯酸钠固体碱的合成及其催化酯交换反应性能

采用原位聚合担载的方法制备了聚丙烯酸钠担载 NaOH 的氢氧化钠/聚丙烯酸钠(NaOH/NaPAA)固体碱催化剂,研究了固体碱催化剂的吸水性、保水性和碱性,并考察了其催化橄榄油与甲醇的酯交换反应催化活性和耐水性。结果表明,NaOH 担载量对 NaOH/NaPAA 固体碱催化剂的吸水倍率影响明显,随着 NaOH 担载量增加,吸水倍率呈先上升后降低的趋势;担载量为7.5 mmol时,吸水倍率呈现最大值,且具有良好的保水性能;碱量随 NaOH 担载量的增加而增大,碱强度达15.0 - < 18.4;催化橄榄油与甲醇酯交换反应,NaOH/NaPAA 固体碱催化剂显示了高酯交换活性和耐水性;在反应温度为 60 ℃、醇油物质的量比为 6:1、催化剂质量分数为 3 %、反应时间为 2h 的条件下,对于不含水的原料油,甲酯产率达到 96.10 %,原料油含水量增大到2% 时,甲酯产率仍可达到 87.26%。     

固体酸催化小桐子油制备生物柴油

采用新型固体酸SO4^2-/TiO2-Al2O3替代传统的液体酸、碱催化剂,催化较高酸值小桐子油与甲醇进行酯交换反应制备生物柴油.考察了搅拌速度、固体酸催化剂用量、醇油摩尔比、反应温度和助溶剂等因素对产物中甲酯含量的影响.研究结果表明,固体酸催化剂对小桐子油酯交换反应具有较好的催化活性和稳定性,产物与催化剂易于分离.在反应温度为130℃、醇油摩尔比为15∶1、固体酸催化剂用量为油质量的4%、搅拌速度为480 r/min和助溶剂正己烷与小桐子油质量比为1∶4的条件下,反应4 h产物中小桐子油甲酯含量达到97.6%,反应10次甲酯含量维持在90%左右.制备得到的生物柴油质量达到国家柴油机燃料调合用生物柴油（BD100）标准.     

膨润土负载磷钨酸催化制备生物柴油

将膨润土经过酸化处理,采用浸渍法制得膨润土负载磷钨酸催化剂,并以此催化餐饮废油与甲醇反应制备生物柴油.考察了磷钨酸负载量和酯交换反应条件对餐饮废油转化率的影响.结果表明:磷钨酸负载量为35%,在反应温度80℃、醇油物质的量比12:1、催化剂用量为原料油质量的5%时,反应6 h,转化率可以达到90%以上.膨润土负载型催化剂活性高,稳定性好,可重复使用.