翘嘴鳜髓过氧化物酶基因克隆及重链序列的原核表达

利用RT PCR和RACE PCR方法,从翘嘴鳜中克隆出髓过氧化物酶（myeloperoxidase, MPO）cDNA全长。其开放阅读框有2?292个核苷酸,编码763个氨基酸的蛋白。虽然序列相似性分析发现该蛋白与哺乳动物MPO相似性为64%～65%,但分子质量大小相近。翘嘴鳜含有1个与人MPO相似的血红素基,1个保守的Ca2+结合位点,6个分子内二硫键,以及6个糖基化位点。由此推测翘嘴鳜MPO蛋白的空间结构及催化机制可能与哺乳动物的相似。将翘嘴鳜MPO的部分DNA序列连接到pET 32a c(+)载体上,成功构建了1个重组表达质粒pET MPO,该质粒在大肠杆菌（DE3）中获得了高效表达。另外,利用重组蛋白N末端带有的6×His标签,通过Ni2 NTA柱纯化获得了翘嘴鳜MPO重组蛋白。     

翘嘴鳜的人工繁殖与胚胎发育观察

采用不同配伍外源激素对性成熟翘嘴鳜催情,发现:20～24°C下,催产素PG+LRH-A+HCG的效应时间更短;25～29°C下,则催产素PG+HCG效应时间更短。采用人工受精的方法获得受精卵,在水温18～22°C观察翘嘴鳜胚胎发育的时序和特点,从受精卵发育到破膜仔鱼经过了68h17min;翘嘴鳜胚胎发育可分为7个阶段26个时期。文章还详细记录了翘嘴鳜胚胎发育各个阶段的形态特征。     

应用RAPD鉴定红菇组织分离菌株的探索试验

用组织分离技术从野生红菇（Ｒｕｓｓｕｌａ ｓｐ．）子实体中中分离得３个菌株。用随机扩增多态性ＤＮＡ（ＲＡＰＤ）对红菇子实体和分离菌株的ＤＮＡ多样性进行分析,以确定３个分离菌株与子实体之间的亲缘关系。实验使用１６个随机引物检测４０多个位点,计算它们之间的相似性。实验结果表明３个分离菌株和红菇子实体之间的ＤＮＡ相似性非常高,红菇子实体和对照菌株「凤尾菇（Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓ ｓａｊｏｒ－ｃａｊｕ）和金针     

翘嘴鳜线粒体基因组全序列的克隆与特征分析

通过直接测序的方法获得翘嘴鳜线粒体DNA基因组全序列(GenBank:JF972568).翘嘴鳜线粒体基因组全长为16 496 bp,其包含13个编码蛋白基因、22个tRNA基因、2个rRNA基因和1个Control region区域.整个翘嘴鳜线粒体DNA利用率非常高,仅仅只有32 bp的基因间隔和35 bp的基因重...     

翘嘴鳜UCP3基因cDNA的克隆及其胚胎发育表达分析

本研究采用RT-PCR、3′-RACE和5′-RACE技术,从翘嘴鳜胚胎组织中克隆得到UCP3基因的全长cDNA序列(登录号:KP244309)为2 917bp。生物信息学分析表明:翘嘴鳜UCP3基因编码区为930bp,总共编码309个氨基酸;带负电荷的氨基酸残基数22个,带正电荷的氨基酸残基数35个。翘嘴鳜UCP3发育表达分析表明,UCP3在受精期、二细胞期、囊胚期、肌效期、心搏期、仔鱼期有低量表达,从囊胚期到神经胚期显著性增高并达最大值,神经胚期到肌效期显著性降低,肌效期、心搏期、仔鱼期都保持在低水平表达。     

翘嘴鳜USP7基因cDNA的克隆及饥饿对其表达影响分析

为探讨饥饿对翘嘴鳜肝脏USP7基因表达的影响,本文应用实时荧光定量PCR、3′-RACE和5′-RACE技术,从翘嘴鳜肝脏组织中克隆得到了USP7基因的全长cDNA序列(登录号:MF000683)为4 319bp。生物信息学分析表明:翘嘴鳜USP7基因编码区全长为3 336bp,共编码个1 111氨基酸,其中180个带负电荷,137个带正电荷。翘嘴鳜USP7在饥饿中的表达分析表明,肝脏USP7基因在不同饥饿时间的相对表达量呈现一个峰值变化,在饥饿4d时出现显著的上升且到达最高值;在饥饿7d时又逐渐下降,最终达到初始水平(P0.05)。本文结果发现饥饿后肝脏中USP7表达量的变化可能与翘嘴鳜的生长和健康状况密切相关,为鳜鱼的生产养殖提供一定的理论依据。     

鳖“内脏损害”病的初步研究

从“内脏损害”的病鳖（ＴｒｉｏｎｙｘｓｉｎｅｎＳｅ）中分离到２种具致病力菌株：嗜水产气单胞菌（Ａｅｒｏｍｏｎａｓｈｙｄｒｏｐｈｉｌａ）和雷极普罗威登斯菌（Ｐｒｏｖｔｄｅｎｃｉａｒｅｔｔｇｅｒｉ），２种菌株对丁胺卡那霉素、庆大霉素和氟哌酸均具有高度敏感性。     

鳜属3个物种的遗传多样性分析

本研究在实验室已有的转录组结果的基础上,从测序结果中随机选出部分微卫星位点进行多态性研究,并利用其中25个具有多态性的SSR(simple sequence repeat)位点,对3个鳜属物种斑鳜、翘嘴鳜和大眼鳜进行遗传多样性研究,分析其遗传结构和亲缘关系.实验结果显示,在3个野生物种中共检测到324个等位基因;每对引物检测到的等位基因数为3~23个;平均等位基因数为12.96个.其中共有21个位点属高度多态位点,其平均观测杂合度为0.523 4,平均期望杂合度是0.794 4,平均多态信息含量为0.701 0,这表明3个物种在各检测位点中具有较好的多态性.对数据进行F-检测,25个微卫星位点的Fst值为0.040 0~0.634 0,平均Fst值是0.200 0,说明3个鳜属群体间的分化程度存在差异,在部分位点处,分化程度较高.斑鳜和大眼鳜间Nei氏遗传距离最大,为1.773 4;翘嘴鳜和大眼鳜的遗传距离最小,为0.371 4.根据遗传距离进行的UPMEGA法聚类分析显示翘嘴鳜和大眼鳜聚为一支,斑鳜独自为一支.     

翘嘴鳜口服免疫效果的初步观察

将翘嘴鳜“肝肾坏死症”病原菌经福尔马林灭活的菌苗注射饵料鱼后,投喂翘嘴鳜,连续１４ｄ。于投喂结束２１ｄ后,通过检测受免鱼和对照鱼血清,体表和肠粘液中凝集抗体效价和血液中白细胞的吞噬活性,证实了口服免疫接种能使翘嘴鳜产生特异性免疫应答。     

翘嘴鳜EST-SSR标记的开发及3个群体遗传多态性分析

为保护野生翘嘴鳜(Siniperca chuatsi)的种质资源以及遗传育种,本研究从翘嘴鳜的EST文库中开发微卫星并筛选出22对具有多态性的微卫星标记,对来自陆水水库(赤壁)和沅江流域(常德、怀化)的3个野生群体进行了遗传多样性分析.实验结果显示,这些标记在3个群体中均表现出了丰富的多态性;共检测到134个等位基因;各基因座观测等位基因数4～8个;平均等位基因数为6.090 1;观测杂合度0.675 4;期望杂合度0.748 7;多态信息含量0.701 0,表明3个翘嘴鳜群体在各检测位点中具有较好多态性.对数据进行F-检测,平均Fst值为0.038 3,说明群体间的遗传分化程度低;而群体遗传相似度和遗传距离的计算结果显示:常德和怀化群体的遗传相似度最大,遗传距离最小;而常德与赤壁群体的遗传相似度最小,遗传距离最大.这恰恰与翘嘴鳜群体的流域分布一致.     

黄颡鱼败血症病原菌的分离鉴定与病理组织学观察

该研究对重庆市璧山县大路渔场大规模发生败血症的患病黄颡鱼的病原菌进行分离鉴定及组织病理学观察.首先把从患病黄颡鱼脾脏中分离获得的优势菌(命名为YC-1)人工感染健康黄颡鱼,该鱼患病症状表现与自然发病症状一致.再从人工感染鱼脾脏中分离病原菌,再次感染健康黄颡鱼,其症状仍然与自然发病症状一致.因此确认分离菌株YC-1为黄颡鱼"败血症"的致病菌.根据菌株形态学特点、生理生化指标和16SrDNA基因序列鉴定其为嗜水气单胞菌Aeromonas hydrophila.组织病理切片显示患病黄颡鱼肝组织严重坏死,肝细胞排列紊乱;脾脏细胞间界限不清,细胞核膨大;肾小管上皮细胞肿胀,肾小囊腔间隙增大.     

家兔源致病性维罗纳气单胞菌的分离鉴定及药敏试验

四川某兔场家兔爆发以咳嗽、打喷嚏和流鼻液等症状的疾病.为调查其病因,分别无菌采集5只病兔和临床健康兔肺脏分离细菌,对分离出的4株优势菌进行16S rDNA PCR扩增测序分析鉴定,并对分离的细菌进行药敏试验和小鼠致病性试验.结果从发病家兔肺脏分离到4株维罗纳气单胞菌,而从临床外表健康家兔肺脏未分离到该菌;本试验分离的4株维罗纳气单胞菌均对小鼠有致病性,能引起小鼠发病并部分死亡;分离菌对大多数氟喹诺酮类、β-内酰胺类、四环素类药物敏感,对大部分氨基糖苷类药物耐药.试验首次从家兔肺脏中分离到致病性维罗纳气单胞菌,并筛选出敏感药物,为家兔呼吸道疾病的防控提供了参考.     

甜菜上一种球状病毒分离物的特性研究

由田间自然感病和甜菜黑色焦枯病株，坏死黄脉型病株及无明显症 甜菜上分离到一种球状病毒，病毒呈二十面体，直径约25nm，有空心和实心2种粒子，具有分子量为24．7kd的外壳蛋白和长度分别为3．8kb,1.4kb,1.1kb的3个双链RNA组分，该病毒具有较强的稳定性和侵染性，蚜虫不能传毒，土壤诱发可传播，易通过汁液摩擦接种侵染多种植物；但回接甜菜只偶尔出现个别褪绿斑或不规则褪绿斑，并不表现田间症状，表明该病毒与甜菜黑色焦枯病等病害无直接关系。     

白草花叶病毒原的生物学鉴定

从甘肃省农业科学院植物研究所（甘谷）培养的表现花叶症状的白草上分离出一种线状病毒,经鉴别寄主,蚜传,酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）,免疫电镜（ＩＳＥＭ）和组织病理学等方面的研究,初步认为此分离物是高粱花叶病毒ＳＣＨ株系。     

Sequence of simian immunodeficiency virus from African green monkey, a new member of the HIV/SIV group

Some wild African green monkeys are known to be naturally infected with a retrovirus related to human immunodeficiency virus (HIV) without having any apparent symptoms of an AIDS-like disease. This simian immunodeficiency virus, designated SIVAGM, may be helpful in clarifying the evolution and pathogenicity of HIV. Some virus strains that were previously reported to be isolated from African green monkeys were shown to be laboratory contaminations of SIVMAC (SIV from a rhesus macaque) Here we report the complete DNA sequence of authentic SIVAGM, which was isolated from a naturally infected African green monkey of Kenyan origin. Comparison of the genome of SIVAGM with those of known HIV/SIVs indicates that the virus is a new simian lentivirus that is approximately equally distantly related to HIV-1 and HIV-2 in contrast to SIVMAC, which is much closer to HIV-2 than to HIV-1 (refs 5, 9).     

重庆地区玉米圆斑病菌(Bipolaris carbonum Wilson)的分离鉴定

试验对重庆地区玉米圆斑病病原菌进行了分离、纯化和鉴定，同时进行了病原菌的致病性测定．病原菌的致病性测定结果表明：病原菌可直接侵入玉米的叶片，并于1周后表现出玉米圆斑病的典型症状．病原菌的培养性状及其分生孢子和分生孢子梗等形态特征的观察结果表明：重庆地区玉米圆斑病菌属半知菌亚门平脐蠕孢属炭色长孺孢（Bipolaris carbonum Wilson）．     

The pathogenicity on legumes of Cucumber mosaic virus was determined by 243 nucleotides on 2a polymerase gene of viral RNA2

We had isolated and identified two Cucumber mosaic virus (CMV) isolates, the CMV red bean (CMV-RB) isolate and the CMV pea (CMV-P1) isolate. CMV-RB induces necrotic local lesions on inoculated leaves of broad bean, pea, cowpea and bean, and could not infect these hosts systemically. However, CMV-P1 was able to infect these legumes systemically. To study the difference of pathogenicity on the legumes induced by these two CMV isolates, the full-length infectious cDNA clones of CMV-Fny, which induced similar symptoms as CMV-RB in the four legumes, were used. The 243 nucleotides fragment, which encodes highly conserved GDD amino acid motif on 2a replicase gene of CMV-Fny RNA2, was replaced with that of CMV-P1. The constructed chimeric virus FP could infect these legumes systemically. The exchange of this region changes the virus symptoms on the legumes, indicating that this 243 nucleotides fragment has major effect on pathogenicity of CMV on the legumes.     

Effects of isolation after sexual experience on anxiety-like,depressive-like behaviors and affective states in male rats

Studies on social isolation have provided evidence for an enhanced anxiety-like phenotype, depressive-like symptoms and higher levels of 22-kHz ultrasonic vocalizations (USVs); whereas sexual experience could induce significant changes in affective states, decrease anxiety- and depressive-like responses. However, the behavioral and emotional alterations in male rats exposed to isolation after sexual experience remain poorly understood. Therefore, the present study examined anxiety- and depressive-like parameters, as well as USV emissions in male rats isolated for 1, 2, or 7 d following 1-week sexual (male-female paired housing) or social (male-male paired housing) interaction. Isolation for 1 d resulted in increased depressive-like symptoms, and 2-d isolation induced elevated anxiety-like behavior in sexually inexperienced rats, while rats with sexual experience exhibited comparable levels of emotionality at each isolation time. Moreover, isolated rats without sexual experience emitted less 22- and 50-kHz USVs, but sexually experienced rats exhibited similar affective states compared with control ones. These results suggested that prior sexual experience could have a modulatory effect on experimental rat emotional responses to isolation.     

柑桔黄龙病病原——类细菌(Bacterium—like organism,BLO)的培养与性质

采用体外培养的方法首次从患柑桔黄龙病的柑桔树叶中分离并培养出柑桔黄龙病的病原——类细菌(BLO),测定了BLO最适培养条件及形状、大小和壁膜厚度.将培养出的BLO回接到指示植物长春花,2个月后长春花表现症状,且能重新培养出该BLO。健康柑桔树叶片及长春花均未培养出BLO。     

"鸭传染性肿头症"病毒对雏鸭致病性和卵黄抗体研究

对从病鸭群中分离的鸭“传染性肿头症”病毒对雏鸭致病性进行研究,证明其对雏鸭致病力强,致死率为100％,人工感染的潜伏期为3－6d。人工感雏鸭的症状和病理变化与自然发病病例相类似。从感染途径看,注射、消化道、呼吸道均能感染发病。用商品蛋鸡生产的鸡抗“鸭传染性肿头症”高免卵黄抗体,有较好的预防效果,为本病的特异性防治提供了有效的手段。