不同条件对金黄色葡萄球菌耐热核酸酶活性影响的研究

耐热核酸酶作为产肠毒素型金黄色葡萄球菌的生长标志，对其研究具有重要的意义．本实验通过比较不同pH值、生长时间、Na^＋浓度、加热时间等因素对金黄色葡萄球菌耐热核酸酶分泌及活性的影响．反映了耐热核酸酶是一种性质十分稳定的蛋白质，耐热核酸酶活性检测应用于加工处理食品的金黄色葡萄球菌污染方面具有重要意义．     

针对不同来源金黄色葡萄球菌分离菌株的agr Ⅰ-Ⅳ分型初探

目的:金黄色葡萄球菌附属基因调节子(agr)位点是一个全面的群集感应系统并且控制着毒力因子的产生,本研究旨在针对不同来源的金黄色葡萄球菌分离菌株进行agr Ⅰ-Ⅳ基因分型研究.方法:根据金黄色葡萄球菌agrⅠ-Ⅳ基因组别类型的引物,对五种不同来源的169株金黄色葡萄球菌DNA模板进行多重PCR扩增,获得目的基因,以判断agr基因型.结果:169株分离菌株中,agrⅡ型的检出率为19%(32/169),agrⅢ型检出率为12%(20/169),agrⅣ型检出率为8%(14/169),五种不同来源的金黄色葡萄球菌均有检出agrⅡ型,均未检出agrⅠ型,并且都含有未能分型的agr阴性菌株.研究结果表明不同来源金黄色葡萄球菌分离菌株中agr Ⅰ-Ⅳ基因型的流行情况.该方法对于金黄色葡萄球菌菌株分子分型有一定的借鉴意义,也为金黄色葡萄球菌菌株分子流行病学调查奠定一定的基础.     

针对不同来源金黄色葡萄球菌分离菌株的agr I-IV分型初探

目的: 金黄色葡萄球菌附属基因调节子(agr)位点是一个全面的群集感应系统并且控制着毒力因子的产生, 本研究旨在针对不同来源的金黄色葡萄球菌分离菌株进行agr I-IV基因分型研究. 方法: 根据金黄色葡萄球菌agrI-IV基因组别类型的引物, 对五种不同来源的169株金黄色葡萄球菌DNA模板进行多重PCR扩增, 获得目的基因, 以判断agr基因型. 结果:169株分离菌株中, agrⅡ型的检出率为19%(32/169), agrⅢ型检出率为12%(20/169), agrⅣ型检出率为8%(14/169), 五种不同来源的金黄色葡萄球菌均有检出agrⅡ型, 均未检出agrⅠ型, 并且都含有未能分型的agr阴性菌株. 研究结果表明不同来源金黄色葡萄球菌分离菌株中agr I-IV基因型的流行情况, 该方法对于金黄色葡萄球菌菌株分子分型有一定的借鉴意义, 也为金黄色葡萄球菌菌株分子流行病学调查奠定一定的基础.     

21日龄鸡胚中金黄色葡萄球菌的PCR检测

为检测某鸡场21日龄鸡胚金黄色葡萄球菌感染情况, 针对其特有的耐热核酸酶基因(Nuc)设计并合成1对引物进行PCR扩增, 建立特异性检测金黄色葡萄球菌的PCR方法. 对18个21日龄鸡胚培养、分离, 获得18株疑似金黄色葡萄球菌菌落. 用建立的PCR方法对18份疑似样品进行扩增获得4份金黄色葡萄球菌的阳性扩增, 证实该鸡群21日龄鸡胚中金黄色葡萄球菌的感染率为22%(4/18). 本文中基于Nuc基因建立的PCR检测方法是检测鸡胚中金黄色葡萄球菌快速、特异的分子生物学方法.     

用生物素标记核酸探针检测鼠金黄色葡萄球菌的研究

利用聚合酶链反应技术从金黄色葡萄球菌基因组DNA中扩增出 6 78bp耐热核酸酶nuc基因特异性片段 ,经生物素标记后作为核酸斑点杂交试验的探针 ,对实验动物的金黄色葡萄球菌及其临床样品进行了检测。结果显示 ,标记探针与金黄色葡萄球菌DNA呈杂交阳性 ,而与链球菌、大肠埃希氏菌和巴氏杆菌DNA呈杂交阴性 ,斑点杂交的检测灵敏度为 1pg基因组DNA。用斑点杂交试验和PCR对 2 4 0份临床样品进行了检测 ,检出率为 2 9% (7 2 4 0 ) ,符合率为 10 0 %。这些试验结果表明 ,研究制备的核酸探针及建立的斑点杂交试验具有较高的特异性和敏感性 ,可用于实验动物金黄色葡萄球菌的快速检测     

成都地区骨科患者伤口金黄色葡萄球菌感染的分子流行病学及耐药性分析

目的:分析四川成都地区骨科伤口感染金黄色葡萄球菌的分子流行病学特征与耐药现状.方法:收集2016年9月至2019年9月成都地区西部战区总医院骨科分离自伤口分泌物的金黄色葡萄球菌,进行耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)鉴定及其SCCmec分型、各菌株MLST分型和spa分型.聚合酶链式反应(PCR)检测20种金黄色葡萄球菌常见毒力因子,并对12种常用抗菌药物进行药敏分析.所有结果同时进行MRSA与甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌(MSSA)菌株间的比较.结果:195株细菌MRSA检出率为21.0%,MRSA以SCCmecⅠ(41.5%)、Ⅳ(36.6%)型为主, MLST型别主要为ST59 (58.5%)和ST630 (17.1%),spa型别主要为t437 (43.9%);MSSA的MLST主要型别为ST188 (22.1%)和ST6 (13.6%),spa型别主要为t189 (19.5%)和t701 (10.4%).MRSA菌株hlb(P0.01)和seb(P0.01)基因携带率较高,而cna(P0.01)和ebpS(P0.05)基因携带率较低,且这一结果与分子分型相关.耐药分析提示某些抗生素可在经验性抗金黄色葡萄球菌中优先选择.结论:成都地区骨科伤口感染金黄色葡萄球菌主要为ST59/ST630-t437-MRSA-SCCmecⅠ/Ⅳ和ST188-t189-MSSA.分子分型结果与毒力因子携带情况密切相关,本研究结果对本地区抗菌策略的制定有一定参考作用.     

猪链球菌2型毒力相关因子研究进展

猪链球菌2型是在世界范围内影响养猪业和人类健康的一种重要的人兽共患传染病。猪链球菌2型毒力因子在致病过程中发挥了重要的作用。但是对猪链球菌2型的致病机制和关键毒力因子仍然不确定,使有效的防治该病成为一个难题。本研究对猪链球菌2型已发现的毒力因子和新发现的毒力因子进行综述,为防治该病提供科学依据和参考。     

科学研究首次揭示细菌抗生素耐药化学机制

早在数年前,遗传研究证实松鼠葡萄球菌进化生成了一种称为Cfr的新基因。Cfr基因编码蛋白在细菌形成抗生素耐药性中发挥了关键性的作用。随后,研究人员又在金黄色葡萄球菌中发现了相同的基因。金黄色葡萄球菌是寄居在人类鼻部和皮肤上的一种最常见的细菌类型,是目前多种抗生素耐药性感染的主要原因。由于Cfr基因通常定位于移动的DNA元件中,所以它能够轻易地从非人类病原体进入到其他种类感染人类的细菌中。     

溶藻弧菌对水产动物致病性及其防治的研究进展

溶藻弧菌是一种常见的海洋伺机性病原体,是引起人类、水生动物细菌性疾病的重要病原之一。与其它病原微生物一样,弧菌的致病性与其产生的多种毒力因子息息相关,毒力基因是产生各种毒力因子的物质基础。本文对溶藻弧菌的病原学、致病机理及其防治等方面的最新研究成果进行了综述。     

熊果酸衍生物的合成与表征及其抑菌活性研究

熊果酸属于五环三萜类配合物,在自然界中分布广泛,并显示出多种生物活性,如保肝、抗炎、抗病毒、抗癌等多种药理作用.为寻找高效、低毒的熊果酸衍生物,以具有一定生物活性的熊果酸为先导配合物,通过对其C-28位进行结构修饰及C-3位引入氨基酸,共设计合成了10种未见报道的熊果酸衍生物.目标配合物的结构经1 H NMR、IR和HRMS表征确证,并以其对培养于高铁血红蛋白的金黄色葡萄球菌、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌、耐喹诺酮金黄色葡萄球菌和培养于脑心浸液培养基中的大肠杆菌进行抑菌活性测试.结果表明,经修饰后的熊果酸衍生物对金黄色葡萄球菌、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌、耐喹诺酮金黄色葡萄球菌的抗菌活性较母体配合物有不同程度的提升.     

我国市售食用菌中金黄色葡萄球菌污染调查、耐药性及其肠毒素基因检测

调查了2011—2016年我国市售食用菌中金黄色葡萄球菌的污染情况,并对分离到的相关菌株进行了肠毒素基因的检测和耐药性分析。收集全国39个城市699份市售食用菌,利用定性和定量检测方法,检出金黄色葡萄球菌阳性样品33份,平均污染率4.72%,污染水平9.75MPN/g。24种抗生素的药敏结果显示,分离株耐药情况严重,对利奈唑胺、利福平敏感,对氨苄西林等22种抗生素都产生不同程度的耐药。7株分离株经表型和分子鉴定确定为耐甲氧西林金黄色葡萄球菌。运用聚合酶链式反应法对分离的39株金黄色葡萄球菌进行了18种肠毒素基因检测,约60%分离株携带4~6种肠毒素基因,携带率最高的肠毒素基因是sei,其次是sem、seg、seq、sec、seb、sen。本研究反映了我国市售食用菌金黄色葡萄球菌污染的潜在风险,相关分离株具毒性潜力,且耐药性严重,应引起重视。     

Sae2, Exo1 and Sgs1 collaborate in DNA double-strand break processing

DNA ends exposed after introduction of double-strand breaks (DSBs) undergo 5'-3' nucleolytic degradation to generate single-stranded DNA, the substrate for binding by the Rad51 protein to initiate homologous recombination. This process is poorly understood in eukaryotes, but several factors have been implicated, including the Mre11 complex (Mre11-Rad50-Xrs2/NBS1), Sae2/CtIP/Ctp1 and Exo1. Here we demonstrate that yeast Exo1 nuclease and Sgs1 helicase function in alternative pathways for DSB processing. Novel, partially resected intermediates accumulate in a double mutant lacking Exo1 and Sgs1, which are poor substrates for homologous recombination. The early processing step that generates partly resected intermediates is dependent on Sae2. When Sae2 is absent, in addition to Exo1 and Sgs1, unprocessed DSBs accumulate and homology-dependent repair fails. These results suggest a two-step mechanism for DSB processing during homologous recombination. First, the Mre11 complex and Sae2 remove a small oligonucleotide(s) from the DNA ends to form an early intermediate. Second, Exo1 and/or Sgs1 rapidly process this intermediate to generate extensive tracts of single-stranded DNA that serve as substrate for Rad51.     

康宁木霉（Trichoderma koningii）SMF2分泌的peptaibols类抗菌肽Trichokonins抑菌活性研究

Peptaibols是一类来源于土壤微生物，由非核糖体合成酶（nonribosomal peptide synthetase， NRPS）合成的富含α 氨基异丁酸（α aminoisobutyric acid, Aib）的抗菌肽的总称. Trichokonins属于长链peptaibols第一亚家族，其对普通金黄色葡萄球菌和1株临床分离的多抗金黄色葡萄球菌的最低抑菌浓度（minimum inhibitory concentration, MIC）均为50?μg/mL，但时间杀菌曲线表明后者对MIC浓度的Trichokonins耐受性明显大于前者. 在含50?μg/mL浓度Trichokonins的培养基中连续转接20次后普通金黄色葡萄球菌和多抗金黄色葡萄球菌对Trichokonins的敏感性都明显降低，MIC值均提高到200?μg/mL以上, 表明金黄色葡萄球菌对Trichokonins产生了明显的抗性. 这与目前普遍认为的抗菌肽不易产生抗性的观点不一致, 其抗性产生的具体机制有待于进一步的研究.     

灰玫瑰青霉产生的抗菌物质AF1的分离与活性研究

从灰玫瑰青霉Penicillium griseoroseum发酵液中提取到1种具有抗菌活性的物质AF1,对其性质进行初步研究。发酵液经纱布过滤,离心后经5?ku超滤膜超滤,经Sephadex LH 20和HPLC分离纯化得到纯净物质AF1,并对其生物学活性进行研究。结果证明:AF1对β 内酰胺酶和酸碱稳定,对热有较好的耐受性,不是青霉素类抗菌物质;相对分子质量约为1?465,结构中含有糖和氨基特征,对金黄色葡萄球菌的MIC为80?μg／mL,对抗药金黄色葡萄球菌有效且不容易诱导细菌抗药性产生。     

Bioinformatics analysis of two-component regulatory systems in Staphylococcus epidermidis

Sixteen pairs of two-component regulatory systems are identified in the genome of Staphylococcus epidermidis ATCC12228 strain, which is newly sequenced by our laboratory for Medical Molecular Virology and Chinese National Human Genome Center at Shanghai, by using bioinformatics analysis. Comparative analysis of the twocomponent regulatory systems in S. epidermidis and that of S.aureus and Bacillus sublilis shows that these systems may regulate some important biological functions, e.g. growth,biofilm formation, and expression of virulence factors in S.epidermidis. Two conserved domains, i.e. HATPase_c and REC domains, are found in all 16 pairs of two-component proteins.Homologous modelling analysis indicates that there are 4 similar HATPase_c domain structures of histidine kinases and 13 similar REC domain structures of response regulators,and there is one AMP-PNP binding pocket in the HATPase_c domain and three active aspartate residues in the REC domain. Preliminary experiment reveals that the bioinformatics analysis of the conserved domain structures in the two-component regulatory systems in S. epidermidis may provide useful information for discovery of potential drug target.     

贻贝的细菌污染研究

在模拟生态条件下,以贻贝为材料,用大肠埃希氏菌,粪链球菌和金黄色葡萄球菌对其污染,在5d内,分析细菌污染过程及其变化规律,研究表明,贻贝的细菌污染非常迅速,最大的污染程度在其接触受污染海水后60min就出现,并维持这一水平至4h之久,随后,贻贝的污染则依不同细菌以不同速度下降,贻贝对不同细菌的捕获,富集也表现出明显的差异性,粪链球菌的平均富集系数为33.2,大肠埃希氏菌为15.6,金黄色葡萄球菌为66.1。     

一种蛋白A的Z结构域衍生物的构建及对IgG亲和力的研究

蛋白A是金葡菌中一种重要的致病因子,有较强结合多种哺乳动物的IgG的能力,因此降低机体产生特异性SPA抗体的水平,使金葡菌具免疫逃逸功能.研究一种与IgG亲和力较弱的蛋白A衍生物,对金葡菌疫苗的开发具重要意义.研究表明,蛋白A的Z结构域中位于第13、14位的Phe,Tyr是两个与IgG结合的关键位点.本文首次通过PCR突变技术,将这两个关键氨基酸均改造为Gly,构建突变体ZFY.Discovery Studio3.5受体-配体相互作用力模块分析显示,突变体ZFY与IgG结合力降低到-61.68kcal/mol,仅为原相互作用力的10.69%;构建得到ZFY蛋白,经ITC测定,ZFY与兔IgG的亲和常数降低到1.2×104 M-1,仅为原亲和常数的0.39%,证明了ZFY是一种与IgG亲和力较弱的蛋白A衍生物,为实现新型蛋白A疫苗治疗金葡菌感染奠定基础.     

金黄色葡萄球菌快速检测技术的研究进展

金黄色葡萄球菌是食品、医院内感染以及化妆品领域重要致病菌之一,建立和发展快速检测方法对于预防和控制该菌引起的疾病具有重要意义.对金黄色葡萄球菌的生物学特性、流行病学特征进行了简单介绍,并重点综述了近些年建立的常用金黄色葡萄球菌快速检测方法,分析比较了各检测方法的优缺点.