犬瘟热病毒RT-PCR检测方法的建立与应用

根据Barrett发表的犬瘟热病毒 (CDV)Onderstepoort弱毒株融合蛋白 (F)基因序列 ,设计合成了一对寡聚核苷酸引物 ,并以南京农业大学惠赠的Onderstepoort标准株反转录产物为模板 ,建立了CDV的RT PCR方法 ,并应用于CDV的诊断。结果表明 ,以该对引物 ,只能从CDV ONP标准株反转录产物中扩增出大小为 32 4bp的核苷酸片段 ,与理论设计值大小一致 ,而正常Vero细胞和同为副粘病毒科的新城疫病毒 (NDV)作为对照 ,病毒扩增结果为阴性。RT PCR可检出 1μl作 10 6倍稀释的CDV ONP标准株反转录产物 ,说明其具有很高的敏感性。应用试验结果 ,可从感染CDV犬的组织病料中提取RNA ,反转录产物中也扩增出 32 4bp的核苷酸片段。通过本研究不仅建立了敏感性、特异性好的CDV的RT PCR检测方法 ,也为F基因的克隆和序列测定及表达奠定了基础。     

ENU诱变获得4种白斑小鼠及对突变基因的染色体定位

“表型驱动法”是通过诱变、定位及克隆突变基因来研究基因功能的一种手段. 以ENU处理C57BL/6J(B6)雄鼠150只, 繁殖后代小鼠3860只, 筛查到有突变表型的小鼠210只, 经传代实验得到能够遗传的突变鼠10余种, 其中4种为呈显性遗传的白斑突变, 它们是Wbct, W^−1Bao, W^−2Bao和W^−3Bao, 共同表现为腹部、四肢末端及尾部的局部白化. 为定位这些突变基因, 选择平均分布于小鼠基因组且在B6与DBA/2J(D2)间有差异的微卫星标记39个, 区分(B6×D2)×D2的F₂代有无白斑表型后, 用39个微卫星进行基因组扫描. 结果表明, W^−1Bao突变基因与D5Mit168的LOD值为0.56, 与D5Mit352的LOD值为4.47. 在此基础上, 逐步选择接近突变基因的微卫星D5Mit290, D5Mit312, D5Mit356及D5Mit308, 扩大F₂的数量至537只, 将W^−1Bao突变基因定位在第5号染色体D5Mit356及D5Mit308之间, 距着丝粒约42.19 cM; 同理, 将W^−2Bao及W^−3Bao突变基因也定位在与W^−1Bao相近的区域, Wbct突变基因定位于第1号染色体距着丝粒约41.6 cM处. 经过检索小鼠基因组数据库和对染色体局部基因的逐个分析, 认为kit基因为W^−1Bao, W^−2Bao及W^−3Bao白斑突变的候选基因.     

聚合酶链反应检测石蜡切片中金黄色葡萄球菌DNA的研究

目的 探讨聚合酶链反应技术(PCR)在检测行蜡包埋组织中金黄色葡萄球菌DNA的应用及价值。方法 利用PCR技术，对55例福尔马林固定、石蜡包埋小鼠组织中SA-DNA进行了检测。结果 55例石蜡包埋的小鼠组织中均检测到SA-DNA，这与临床病理诊断为金黄色葡萄球菌(S．aureus)感染相一致。结论 PCR技术可用于检测石蜡包埋组织中的SA-DNA片段，为鼠S．aureus感染的回顾性分析提供了有效手段。     

影响小鼠1细胞期胚胎移植成功率有关因素的探讨

小鼠的胚胎移植对于实验动物研究及生命科学研究具有重要应用价值。影响小鼠的胚胎移植成功有许多因素。根据我们对Lats基因敲除小鼠 1细胞期胚胎移植工作 ,着重探讨影响小鼠移植成功的受精卵质、量和移植技术三大关键因素。     

基因打靶技术在实验动物中的研究进展

简要阐述了基因打靶的概念和基本环节 ,系统介绍了筛选方法和基因打靶的策略。基因打靶在基因功能研究、人类疾病动物模型的建立和基因治疗等方面有着广阔的应用前景     

用生物素标记核酸探针检测鼠金黄色葡萄球菌的研究

利用聚合酶链反应技术从金黄色葡萄球菌基因组DNA中扩增出678bp耐热核酸酶nuc基因特异性片段，经生物素标记后作为核酸斑点杂交试验的探针，对实验动物的金黄色葡萄球菌及其临床样品进行了检测。结果显示，标记探针与金黄色葡萄球菌DNA呈杂交阳性，而与链球菌、大肠埃希氏菌和巴氏杆菌DNA呈杂交阳性，斑点杂交的检测灵敏度为1pg基因组DNA。用斑点杂交试验和PCR对240份临床样品进行了检测，检出率为2.9％（7/240），符合率为100％。这些试验结果表明，研究制备的核酸探针及建立的斑点杂交试验具有较高的特异性和敏感性，可用于实验动物金黄色葡萄球菌的快速检测。     

Lats基因敲除小鼠胚胎玻璃化冷冻的研究

用冷冻麦管、细胞冷冻管分别采用一步法和二步法对Lats基因敲除小鼠胚胎进行玻璃化冷冻，胚胎解冻后，囊胚发育率分别为90％、90．1％、89．2％和91．4％；移植后着床率分别为：50．0％、47．1％、43．4％和46．5％，差异不显著；并且与对照组相比差异也不显著。因此，玻璃化冷冻可以作为Lats鼠保种方法之一。     

遗传性角膜基质变性小鼠及其突变基因的定位

以ENU诱导C57BL/6小鼠获得的角膜浑浊突变系小鼠(B6-Cd)为研究对象,遗传试验及病理切片证实为单基因显性遗传的角膜基质变性;采用连锁分析法,用39个微卫星对角膜基质变性小鼠的150只F2代个体[(B6×D2)F1×D2]进行基因组扫描,发现突变基因与D13M it262(距着丝粒42.6 cM)的LOD值为40.54,与D13M it76(距着丝粒47 cM)的LOD值为38.77,突变基因初步定位于13号染色体距着丝粒45.24 cM处.本研究提供了一种人类遗传性角膜基质变性的极好模型,为该病发生机制、药物开发及突变基因的克隆提供了新型材料.