一支产纤维素酶菌株的鉴定及产酶特性初步研究

本文对从皖南地区采集的森林腐木样本中,筛选获得TZT-01菌株进行鉴定.通过培养,观察菌落和个体染色形态,对其进行16SrDNA序列同源性分析,鉴定为枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis sp.）.对添加诱导物产纤维素酶的特性进行初步研究.     

宁德产小鱼仙草挥发油化学成分及抑菌作用的研究

利用水蒸汽蒸馏法提取宁德产小鱼仙草（Mosla dianthera Maxim）挥发油，得油率为0．50％．应用色谱／质谱／数据系统联用方法分析了其挥发油的化学组成，检测到93个峰，共鉴定了62种化学成分并测定其相对含量，占总含量的98．114％．其中，香荆芥酚（27．229％）、香芹酮（12．326％）、百里香酚（11.027％）、β-石竹烯（7．246％）、柠檬烯（6．209％）、2-甲基-5-（1-异丙基）-乙酰苯酚（5．932％）、间伞花烃（4．982Vo）、葎草烯（4．496％）为主要成分．对7种供试细菌的体外抑菌实验表明，该挥发油对金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）、大肠杆菌（Escherichia coli）、藤黄八叠球菌（Sarcina lutea）、枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）、普通变形杆菌（Proteas vulgaris）、短小芽孢杆菌（Bacillus pumilus）、甘薯薯瘟病原细菌（Fasarium axyssporam）有一定的抑制作用．     

动物微生态制剂鸡肠源芽孢杆菌的分离与鉴定

试验菌种由宁夏固原山区完全自然生长的土种健康产蛋母鸡的盲肠和大肠中分离获得,共分离出8株革兰氏染色阳性杆菌株,对其进行茼落形态观察和描述,及革兰氏染色、芽孢染色和生理生化鉴定,确定4株为芽孢杆菌（Bacillus）,其中3株为枯草芽孢杆菌（B、subtilis）,1株为蜡状芽孢杆菌（B．cereus）,各项鉴定结果均符合相对应的芽孢杆菌属和种的菌落形态,及革兰氏染色、芽孢染色特征和生理生化鉴定标准;另4株初步确定为不产芽抱的革兰氏阳性杆菌．     

十种热带雨林植物光活化抗微生物活性的筛选

为从植物中寻找具有光调节生物活性的物质,通过滤纸片法和薄层色谱自显影技术,以金黄色葡菌球菌（Staphylococcus aureus）、枯草芽胞杆菌（Bacillus subtilis）、草分枝杆菌（Mycobacteium phlei）、环状芽胞杆菌（Bacillus circulans）为供试菌,对10种热带雨林植物进行光活化抗微生物活性的筛选和活性部位的确定.结果表明：0.1mg的狗花椒（Y10）氯仿提取物对枯草芽胞杆菌具有明显的光活化抗微生物活性,在紫外光照射后和黑暗中抑菌圈相差4mm,薄层色谱中0.5mg Y10氯仿提取物抗枯草芽胞杆菌的抑菌圈最大.本研究为进一步从该植物中寻找新型光敏剂奠定了基础.     

一株高温菌所产酶的功能分析与菌株分类鉴定

从长白山温泉中分离出一株可产生淀粉降解酶的高温菌(CW₂)， 用薄层层析法分析鉴定酶促淀粉降解的产物， 发现CW₂所产生的淀粉降解酶系胞外酶， 可催化淀粉降解产生异麦芽低聚糖(主要包括异麦芽糖、 异麦芽三糖和潘糖). 用PCR法扩增其16S rDNA， 测定其序列（873 bp）， 与GeneBank中已知菌的16S rDNA序列对 比， 该菌株与模式菌株Bacillus licheniformis ATCC 14580，Bacillus licheniformis  DSM 13,Bacillus subtilis strain JM4的16S rDNA序列同源性最高， 只分别相差9,9,13个碱基， 序列相似性分别为98.97％,98.97％,98.51％. 用Neighbor joining方法构建CW₂进化树， 并用Bootstraping法对其评估， 结果表明， CW₂与Bacillus licheniformis， Bacillus sonorensiss形成Bacillus属中的亲缘关系最近的一个进化种群.     

南海红树林内生真菌ZZF13次级代谢产物的研究

 红树林内生真菌ZZF13,为湛江红树林秋茄内生真菌,种属尚未鉴定。从该菌的培养液中分离得到5个化合物, 通过波谱解析以及文献对照, 分别鉴定为skyrin (1), lichenxanthone(2), griseoxanthone C(3), 1,3,6-三羟基-8-甲基-Xanthone （4）, 5,7-二羟基-2-甲基色原酮 (5), 初步的药理活性显示, 化合物1和5对Bacillus subtilis ATCC 6633的MIC分别为100和100 μg/mL。     

黄瓜灰霉病拮抗菌的筛选鉴定及其抑菌特性研究

从石家庄地区多个蔬菜大棚的根际土壤分离筛选到一株高效生防菌F1-2,对黄瓜灰霉病菌的抑菌圈直径高达33mm。根据菌株F1-2的形态特征、生理生化特性以及16SrDNA序列对其进行鉴定,初步确定为枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）。采用生长速率法对拮抗菌的抑菌谱进行测定,其对所选的16种病原菌均有很好的抑制作用。实验还对拮抗菌F1-2的抑菌特性进行了研究,菌株连续传代至10代抑菌性能保持不变,菌株的发酵液对热和酸碱都比较稳定。该菌株的代谢产物具有广谱抑菌活性和较强的稳定性,具有开发成为灰霉病生防制剂的潜力。     

一株产耐高温淀粉酶菌株DW027的鉴定

结合表型性状分析和16S rRNA序列及系统发育分析进行菌株的鉴定.结果显示,DW027菌体呈杆状,革兰氏染色阳性,产芽孢.在LB平板培养基上,菌落呈白色、圆形.16S rRNA基因序列分析表明,与枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)标准序列的同源性达99％,初步鉴定为枯草芽孢杆菌.     

凤梨内生菌筛选鉴定及拮抗效果评价

以凤梨叶片为筛选材料,通过平板对峙培养法筛选出3株对蔬菜软腐病菌菊迪基氏菌有拮抗效果的生防细菌,结合生理生化及分子生物学鉴定,以及拮抗效果评价试验,结果表明,这3株内生菌分别为:Bacillus amyloliquefaciens F-2,Bacillus megaterium F-3-1,Bacillus subtilis F-3-2,皆为革兰氏阳性菌。其中F-2对菊迪基氏菌和丁香假单胞菌的抑菌效果最好,抑菌圈分别为24. 67 mm和28. 83 mm; F-3-1对病原真菌燕麦镰孢菌、胶孢炭疽菌、互隔交链孢霉,抑菌率分别为70. 83%、91. 67%、65. 56%. F-3-2对丁香假单胞菌和黄单胞菌属的抑菌效果最好,抑菌圈分别为20. 75 mm和20. 00 mm。另外,通过生化鉴定研究发现,这3株优良内生菌还具有很好的解磷固氮和产纤维素酶能力,这对内生菌的筛选及内生菌对植物抗病促生作用的研究提供了一定的参考价值。     

α—淀粉酶基因在D—核糖生产菌中的表达

Bacillus subtilis HJ01不能有效地利用淀粉为碳源生产D-核糖,地衣芽孢杆菌（Bacillus licheniformis)携带的含α-淀粉酶基因的质粒pAmy413C通过原生质体转化导入HJ01中,构建成菌株B.subtilis HJ01(pAmy413C）。该菌株连续转接培养98h,质粒pAmy413C保持率为100%;在LBS培养基中,HJ01（pAmy413C)的α-淀粉酶活性比原菌株HJ01高3-4倍;发酵液中葡萄糖含量比HJ01高100倍以上;以淀粉为碳源HJ01（pAmy413C)的核糖产量比HJ01提高了一倍。结果表明,菌株B.subtilis HJ01(pAmy413C)能够有效地利用淀粉生产核糖。     

海洋生境枯草芽孢杆菌LHB02抗菌蛋白的分离纯化及部分特性分析

LHB02是一株分离自海滩污泥的海洋生境枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis),其发酵产物对海水养殖常见致病菌弧菌有很强拮抗能力.采用硫酸铵沉淀、Sephadex G-50凝胶层析等方法,进一步对LHB02发酵产物分离纯化,获得了分子质量为47 ku单一条带的糖蛋白.经抗菌活性分析及稳定性测试发现,纯化后的抗菌蛋白对哈维氏弧菌(Vibrioharveyi)、溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)和鳗弧菌(Vibrio anguillarum)有很强的抑制作用,对热稳定及酸的耐受性也比较强(pH 3.0~8.0),但对部分蛋白酶敏感.LHB02所产抗菌蛋白的强抑菌作用和高稳定性,预示着该菌可作为一种生防细菌开发,用于大黄鱼养殖中弧菌病的防治.     

枯草芽孢杆菌水剂对西瓜枯萎病的田间防效研究

本试验通过35亿活芽孢／ml枯草芽孢杆菌水剂以浸种、灌根并用的方式防治西瓜枯萎病，田间试验结果表明：枯草芽孢杆菌水剂250倍液、500倍液对西瓜枯萎病具有明显的防治效果，同时对黄瓜秧苗正常生长无任何不良影响。此外，枯草芽孢杆菌水剂还对西瓜植株具有一定的促进生长作用。     

产中性蛋白酶工程菌的构建及其发酵条件的初步优化

为构建1株产中性蛋白酶的工程菌株并对其发酵条件进行优化,以中性蛋白酶工业生产菌株枯草芽孢杆菌AS1.398的基因组为模板,采用PCR技术扩增获得中性蛋白酶基因npr,与高拷贝质粒pWB980连接并转入蛋白酶缺陷型菌株枯草芽孢杆菌WB600中得到重组工程菌WB600/pWB980-npr.在初筛平板上工程菌蛋白酶活力明显高于工业生产菌AS1.398,工程菌发酵活力可达1,398.3,U/mL.通过对其发酵工艺进一步优化,在接种量5%、装液量100,mL/500,mL、摇床转速180,r/min、温度34,℃的条件下发酵48,h,发酵液的酶活力可达2,487.5,U/mL,比优化前提高了78%.     

一株广谱抗菌活性菌株的鉴定及生物学特性研究

从湛江湖光岩世界地质公园的火山岩石中分离到一株具有广谱抗菌活性的菌株,命名为菌株HGY25,该菌株对多种食品致病菌均有较强的抑制作用。通过形态学观察、生理生化指标测定、16S rDNA碱基序列测定和同源性分析,鉴定该菌株为枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis。对菌株部分生物学特性研究表明:其生长的最适pH值为7.0,最适生长温度为37℃。     

葡甘聚糖酶高产菌株Bacillus subtilis的超剂量诱变育种

超剂量诱变育种就是加大诱变剂处理剂量,提高菌株突变幅度,从而获得较好的诱变效果.以葡甘聚糖酶产生菌Bacillus subtilis MY-1为初始菌株,先用紫外线、硫酸二乙酯进行单因子诱变,再用超剂量复合诱变,经过透明圈法和摇瓶筛选,得到了一株高产葡甘聚糖酶的突变菌株,命名为Bacillus subtilis UDMY-25,连续传代培养5次,发酵酶活稳定在5 387.2U/mL以上,较原初始菌株提高了44.8%,该菌株产酶能力处于同领域较高水平,具有较好的开发潜力和市场应用价值.     

南瓜不同部位抗菌活性研究

利用乙醇、甲醇和蒸馏水作提取剂分别提取南瓜不同部位（瓜皮、瓜肉、瓜瓤）中的抗菌物质，并通过滤纸片法、琼脂孔扩散法测定其抗菌活性。实验结果显示，南瓜的甲醇提取液对枯草芽孢杆菌（G＋）和大肠杆菌（G-）的抑菌作用更为明显，且瓜瓤中抗菌物质含量最为丰富；南瓜的甲醇-瓤提取液对大肠杆菌的最低抑菌浓度为10％，对枯草芽孢杆菌的最低抑菌浓度为15％；初步鉴定瓜瓤中有良好抗菌活性的成分为脂溶性物质。     

一株新型乳酸菌素产生菌的分离及其鉴定

从新鲜牛乳中分离得到乳酸菌Ｘ４。该菌株在发酵过程中产生的乳酸菌素有较广的抑菌谱,不仅对芽孢杆菌、葡萄球菌、链球菌等革兰氏阳性细菌的生长具有较强的抑制作用,而且对大肠杆菌、沙门氏菌等革兰氏阴性细菌的生长也具有较强的抑制作用。经鉴定,Ｘ４ 菌株为乳脂链球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｃｒｅｍ ｏｒｉｓ ｓｐ．Ｘ４）。     

腺苷生产菌株的回复突变和性质检验

腺苷具有重要的医学价值,由RNA降解获取腺苷成本极高,用微生物发酵法生产腺苷具有重大的经济意义.作为腺苷的生产菌株,黄嘌呤缺陷型的枯草芽孢杆菌如果在生产过程中发生回复突变将会降低腺苷产量.本实验研究了枯草杆菌的黄嘌呤缺陷性菌株是否会回复突变、以及突变菌株的各种性质,进行了V.P.,硝酸盐,高盐浓度,淀粉水解检验,以及进一步的IMP脱氢酶、黄嘌呤氧化酶、腺苷脱氨酶的活性分析,发现大量菌株发生回复突变,该缺陷型菌株遗传非常不稳定,这些突变菌株与生产菌株相比,IMP脱氢酶活发生显著变化,黄嘌呤氧化酶与腺苷脱氨酶的活力没有明显变化.