硫酸铵盐析条件对多管藻R-藻红蛋白和R-藻蓝蛋白得率和纯度的影响

 藻胆蛋白是一类用途广泛、市场前景广阔的天然色素蛋白,但分离纯化困难。粗提条件优化对最终获得的藻胆蛋白的得率和纯度影响较大。研究了硫酸铵饱和度、盐析次数、分级盐析对海洋红藻多管藻R-藻红蛋白（RPE）和R-藻蓝蛋白（RPC）提取得率和纯度的影响。结果表明,多管藻RPE和RPC的得率随硫酸铵饱和度的提高而增加,饱和度为60%时得率最高,分别为91.59%、97.98%。饱和度20%的硫酸铵仍能沉淀47.3%的RPE和24.8%的RPC。RPE的纯度随硫酸铵饱和度的提高而降低,但RPC纯度随硫酸铵饱和度的提高而增加,至饱和度为45%时纯度最高,之后随饱和度的提高而缓慢降低。饱和度<40%时,RPE/RPC得率比随硫酸铵饱和度提高而增加;饱和度>40%时,RPE/RPC得率比趋于稳定。硫酸铵盐析2次与盐析1次相比,RPE、RPC的得率降低,但纯度提高。二步法盐析比一步法盐析RPE、RPC的纯度分别提高122.42%、18.67%,但得率降低。因此硫酸铵盐析提取多管藻RPE、RPC时,以饱和度60%为宜,盐析2次,二步法盐析有利于藻胆蛋白纯度的提高,二步法盐析时初次使用的硫酸铵饱和度应<20%。藻胆蛋白盐析条件优化可为藻胆蛋白的进一步分离纯化奠定基础。     

混合异养螺旋藻中藻蓝蛋白的分离和纯化

为了从螺旋藻中分离和纯化藻蓝蛋白,研究了一种采用硫铵分步盐析,离子交换层析和凝胶过滤层析的分离纯化方法,在硫酸铵分步盐析中,通过对沉淀物的吸收光谱扫描发现,３００ｇ／Ｌ的硫酸铵溶溶能很好除去杂蛋白,而５００ｇ／Ｌ和６５０ｇ／Ｌ的硫酸铵溶液能较好离ｃ－蓝蓝蛋白和别藻蓝蛋白。     

固氮红细菌(Rhodobacter azotoformans)多样化色素蛋白复合体分离纯化

分别采用硫酸铵盐析和蔗糖密度梯度离心结合离子交换层析方法对紫细菌中的固氮红细菌(Rhodobacter azotoformans)色素蛋白复合体进行分离纯化,获得了不同光谱类型的色素蛋白复合体,并分析了色素蛋白复合体多样性原因。蔗糖密度梯度离心结合离子交换层析法分离到光反应中心和1种外周捕光复合体;硫酸铵盐析结合离子交换层析法分离到光反应中心、3种具有不同A798/A848比值的外周捕光复合体,还分离到含量较低的具有423nm异常吸收峰的外周捕光复合体。由此可见,在常规培养条件下,硫酸铵盐析结合离子交换层析能纯化获得多种光谱类型的色素蛋白复合体。     

猪肝铜锌超氧化物歧化酶的分离纯化与理化性质研究

利用硫酸铵盐析分级分离、乙醇．氯仿沉淀除杂、丙酮再沉淀分级得到含铜锌超氧化物歧化酶（CuZnSOD）的粗酶液,通过DEAE-52离子交换层析和G-75凝胶层析实现了CuZnSOD的分离纯化,得到电泳纯产品CuZnSODI对猪肝CuZnSOD的理化性质、酶学特征和光谱性质进行了研究．     

地衣芽孢杆菌碱性蛋白酶分离纯化研究

对产白地表茅孢杆菌(B.licheniformis)的碱性蛋白酶通过乙醇沉淀、盐析、DEAE阴离子交换层析,凝胶层析4步纯化.以酶比活力为指标,对碱性蛋白酶分离纯化条件进行了优化.结果发现:提纯酶的比活力达62098U/mg,纯化倍数为23.7,活性回收率为15.7%.     

半夏蛋白的提取工艺及其凝集素的抑菌研究

运用正交试验和单因素比较试验,探讨半夏蛋白提取过程中各条件对蛋白质量浓度的影响,优化半夏总蛋白的分离纯化工艺.用DEAE-Sepharose FF离子交换层析对半夏凝集素进行分离、纯化、凝血鉴定,并进行抑菌效果的探究.建立半夏总蛋白的最佳提取工艺:称取适量新鲜半夏块茎,超声波处理20min,用1.5%NaCl溶液在4℃下静置抽提6h,提取1次后离心取上清并进行硫酸铵沉淀得到半夏总蛋白.凝集素对金黄色葡萄球菌的抑制效果明显,对大肠杆菌的抑制效果一般.     

猪肺血管紧张素转化酶分离纯化的工艺优化

血管紧张素转化酶(angiotensin converting enzyme, ACE)存在于生物体组织和血液中,并在血压调控方面发挥着重要作用,高效分离纯化ACE对研究其结构和功能具有重要意义。文中将猪肺匀浆液进行酶解处理,优化浆液比、盐析初始蛋白浓度等条件,并经盐析、透析和离子交换层析等步骤,得到高活性的ACE。当猪肺以1：3浆液比匀浆并经胰蛋白酶处理1 h后,其总酶活可增加27.06%;匀浆后初始蛋白浓度为3%时进行盐析,同时将废弃的一级盐析沉淀蛋白再回收处理,盐析过程粗酶纯化倍数为3.94倍,总酶活回收率可达73.73%,较常规处理提高了24.33%以上,经离子交换层析后,ACE酶比活为0.1303 U/mg,总酶活回收率为59.14%。 ACE酶学性质研究表明,ACE的最佳反应温度为42℃,最适pH为8.3。由酶促反应动力学方程计算得到的猪肺ACE的米氏常数Km为1.521 mmol/L,最大反应速率Vmax为17.301 nmol/min。新分离纯化工艺可使ACE收率大大提高。     

菜豆鲜荚中菜豆凝集素的提取与分离纯化工艺研究

以Bean Saint esprit a oeil rouge菜豆鲜荚为试验材料,优化了菜豆凝集素的提取和分离纯化工艺,研究了提取剂、料液比、p H值和提取时间对菜豆凝集素活性的影响,建立了硫酸铵分级沉淀、DEAE-52阴离子交换层析和Superdex-200凝胶过滤层析的组合方法用于分离纯化菜豆凝集素。研究结果表明:以磷酸盐缓冲溶液为提取剂,料液比1∶25,p H值6~8,浸提时间8 h,菜豆植物凝集素的提取效果适宜。菜豆凝集素浸提液经硫酸铵分级沉淀,DEAE-52阴离子交换层析,Superdex-200凝胶过滤层析,冷冻干燥后可获得纯度较高的菜豆凝集素。纯化的样品经非变性聚丙烯酰氨凝胶电泳检测为单一条带,血凝法检测有血凝活性。     

黑豆凝集素的提取及血凝效果研究

采用70%饱和度硫酸铵盐析的方法,分别以蒸馏水、生理盐水、pH=7.2的磷酸缓冲液、pH=5.2的乙酸缓冲液和0.7mol/L的甲酸作为浸提溶液,提取黑豆凝集素粗品,透析并用分子筛层析纯化黑豆凝集素,以鸡血凝集试验检测.结果表明:磷酸缓冲液为最佳浸提液,黑豆凝集素提取率最高,为9.17%,凝血效果最好.血凝试验表明分子筛层析图谱中出现的第1个峰即为黑豆凝集素,冷冻干燥后所得产品为白色粉末.     

金属亲和层析法分离纯化醇脱氢酶

报道了用金属亲和层析法分离纯化酵母细胞中醇脱氢酶(ADH).以壳聚糖为载体,戊二醛为交联剂,乙二胺为螯合配基,制备了金属螯合亲和吸附剂.通过溶胀法从酵母细胞中抽提胞内酶,粗抽提液再经过硫酸铵盐析以及亲和柱层析.收得率为16.9%,纯化倍数达11.5.     

酵母醇脱氢酶的分离纯化

报道了酵母醇脱氢酶的分离纯化，使用硫酸铵分级沉淀，SephadexG—100凝胶层析技术，从啤酒酵母提取液中分离出醇脱氢酶，收得率为10．9％，纯化倍数达53．2。     

氧化钙化焙烧法应用于从钒云母矿中提取钒的研究

本文介绍用氧化钙化焙烧法从钒云母矿中提取钒的试验研究,对焙烧、浸出、净化、沉钒过程中各影响因素进行了探讨。研究结果表明,用石灰和钒云母矿混合焙烧生成钒酸钙,然后用碳铵溶液浸出钒,提取率高达78%,工艺简单、可靠,并且对环境污染小,投资少,它不失为一种可取的提钒新方法。     

香葱凝集素的分离纯化及其部分性质的研究

香葱叶片经生理盐水抽提、硫酸铵沉淀、Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－７５和Ｂｏ－ＧｅｌＰ－３０柱层析分离得到香葱凝集素。该凝集经聚丙烯酰胺凝胶电泳、糖蛋白色均显示单一条带。ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳测得两条带相对分子质量分别为２９０００和２３０００，表明该凝集素是由两个不同的亚基组成。     

收获后存放时间对三叶草叶蛋白提取率的影响

用直接加热法提取不同存放时间的白三叶草叶蛋白并对提取率进行对比分析.结果表明,白三叶草收割后,存放0 h、24 h、48 h、72 h后,叶蛋白质提取率分别为4.247%、2.517%、2.135%、1.992%,叶蛋白提取率存在显著性差异(P<0.01).随着存放时间延长,叶蛋白提取率逐步降低,在24 h内下降最快.因此,收获后的三叶草应尽快加工,缩短存放时间.     

Extraction and DNA Digestion of 5'-Phosphodiesterase from Malt Root

This study investigated the extraction of 5'-phosphodiesterase from malt root and the degradation of nucleic acids by this enzyme.The extraction used grade precipitation with ammonium sulfate and enzy-matic hydrolysis.Samples were assayed using the modified Bradford method and high performance liquid chromatography.The results show that 5'-phosphodiesterase is isolated by grade precipitation with 30% and 80% saturation of ammonium sulfate and can be utilized to degrade deoxydbonucleic acid.The hydrolysate has four kinds of deoxynucleotides: 5'-dCMP,5'-dTMP,5'-dAMP,and 5'-dGMP.The optimum reaction tem-perature is 70℃,and the optimum pH is 5.5-6.0 for the reaction.The percentage of deoxynucleotides indi-ceted by the China Pharmacopoeia (2000 edition) in the product is over 70%.The extraction of 5'-phosphodiesterase from malt root is shown to be possible and economical.Products from the enzymatic hydrolysate of DNA meet the pharmacopoeia.     

亚热带木腐真菌产漆酶及其酶学性质

对选育的一株木腐真菌Psathyrella candolleana进行液体深层发酵生产漆酶,通过硫酸铵盐析和离子交换色谱等纯化技术分离发酵酶液后,得到纯度较高的漆酶,并对其酶学性质进行研究.结果表明:P.candolleana在发酵罐中的漆酶产量最高可达9 100 U/L;分离纯化后得到漆酶活性组分,其比活力达到438...     

蛹虫草发酵产物新纤溶酶的分离纯化

笔者所在项目组的前期研究发现,蛹虫草深层培养可以产生至少两种纤溶酶.基于此,文中对蛹虫草深层培养产生的纤溶酶的分离纯化展开了研究.采用硫酸铵盐析、Sephadex G-25凝胶色谱、Phenyl-Sepharose HP疏水相互作用色谱、CM-Sepharose FF弱阳离子交换色谱和Superdex 75凝胶色谱对纤溶酶进行分离.最终纯化后的纤溶酶Ⅰ比活力达1467.44U/mg,纯化倍数为36.07,回收率为5.79%.纤溶酶Ⅱ比活力达1681.58U/mg,纯化倍数为41.33,回收率为4.00%.两种纤溶酶经电泳鉴定均达到电泳纯,相对分子质量分别约为28000和32000.     

峨眉岩白菜总三萜纯化及活性分析

以峨眉岩白菜为研究对象,采用沉淀分级溶解法初步纯化其总三萜化合物并比较纯化前后总三萜抗氧化、抑菌和抑癌活性.结果表明：经4次冻干后,样品提取率从38.13 %降低到26.79 %,提取物中总三萜含量从48.58 %升高到70.99 %;纯化后的总三萜化合物总还原能力增强,对DPPH自由基的清除能力增强,IC50由0.32 mg·mL－1降低到0.27 mg·mL－1;峨眉岩白菜总三萜对铜绿假单胞杆菌和枯草芽孢杆菌均有一定的抑制能力,纯化后能提高总三萜对两种菌的敏感度;纯化后总三萜提取物对Hela细胞24和48 h的IC50从纯化前的102.5和69.00 μg·mL－1降低到59.01和28.56 μg·mL－1,对A549肺癌细胞24和48 h的IC50从纯化前的238.90 μg·mL－1和172.00 μg·mL－1降低到84.32 μg·mL－1和65.99 μg·mL－1.因此沉淀分级溶解法可适用于峨眉岩白菜总三萜的纯化,纯化后的总三萜体外抗氧化、抑菌活性和抑癌活性均有一定程度的提高.