海生红藻R-藻红蛋白和隐藻藻蓝蛋白光吸收系数测定

选用Bradford法和Lowry法,以牛血清蛋白和γ-球蛋白作为标准蛋白,分别对从海生红藻异管藻（Heterosiphonia japonica）和多管藻（Polysiphonia urceolata）以及蓝隐藻（Chroomonas placoidea）中分离纯化的异管藻R-藻红蛋白（HR-PE）、多管藻R-藻红蛋白（PR-PE）、蓝隐藻藻蓝蛋白（Cr-PC）进行了蛋白浓度及其特征吸收峰的光吸收系数测定.根据2种方法和2种蛋白针对3种藻胆蛋白的测定结果以及影响结果的主要因素进行了细致地分析和比较,Lowry法是进行藻胆蛋白,尤其是六聚体藻红蛋白浓度及光吸收系数测定的更适合、准确的检测方法;在进行同类或相同藻胆蛋白之间相对含量、比例的定量分析时,Bradford法是一种更便捷的测定方法.由于藻胆蛋白光吸收系数值与选用的蛋白定量检测方法及其所用的标准蛋白直接相关,在使用和比较藻胆蛋白光吸收系数值时必须明确检测方法和标准蛋白,否则藻胆蛋白光吸收系数值将不具有可比性.     

R-藻蓝蛋白的分离纯化及抗食物过敏活性研究

为探究R-藻蓝蛋白抗过敏功效,以坛紫菜为原料,通过25%～35%硫酸铵盐析和DEAE-Sepharose Fast Flow、Sephacryl S-200 HR两步柱层析获得了高纯度的目的蛋白(A620/A280>6.0).SDS-PAGE显示,该蛋白质由分子质量为17.7 ku和20.5 ku的两个亚基组成,紫外可见分光光度法测得其在620 nm、555 nm有两个特征吸收峰,可确认其为R-藻蓝蛋白.热稳定性和pH值稳定性实验结果显示,R-藻蓝蛋白在低于35℃、pH=4.0～9.0条件下光谱性质相对稳定.动物实验结果表明,100μg/mL高纯度R-藻蓝蛋白能够显著降低小鼠血清中IgE水平;细胞实验结果表明,40μg/mL R-藻蓝蛋白能够降低细胞因子IL-4、IL-13的蛋白质分泌量;基因表达量分析结果显示,R-藻蓝蛋白能够降低IL-4在淋巴细胞中的表达量.可见,坛紫菜R-藻蓝蛋白通过促使CD4+T cell向TH1型转化发挥抗食物过敏活性.     

多管藻R-藻红蛋白和R-藻蓝蛋白的制备及其相对分子质量的测定

以海生大型红藻多管藻(Polysiphonia urceolata)为材料,通过凝胶过滤层析、离子交换柱层析、凝胶电泳,得到纯度较高的R-藻红蛋白和R-藻蓝蛋白.在SDS-PAGE中,藻红蛋白表现出4个带有发色团的亚基α、β、β'、γ和γ',其相对分子质量分别为1.73×1041,.95×104,3.33×104和3.10×104;藻蓝蛋白则表现出3个带有发色团的亚基,分别是:α、β和β',其相对分子质量为1.75×1042,.13×104和2.62×104.不同相对分子质量的γ亚基和β亚基的发现都有别于先前的报道,这对藻红蛋白和藻蓝蛋白结构的研究提供了有价值的研究结果.选用Superdex-200凝胶柱层析对纯化的藻红蛋白和藻蓝蛋白进行了相对分子质量测定,藻红蛋白相对分子质量为2.4×105,藻蓝蛋白相对分子质量为1.36×105这表明纯化制备的藻红蛋白和藻蓝蛋白分别以六聚体((αβ)3γ(αβ)3)和三聚体((αβ)3)形式存在.     

海生红藻多管藻中的2种R-藻红蛋白

以新鲜的海生红藻多管藻(Polysiphonia urceolata Grev)为材料,通过DEAE-52离子交换层析,Sephadex G-150和Sephacryl S-300凝胶过滤层析纯化制备了2种R-藻红蛋白(R-phycoerythrin,R-PE)PE272-1和PE377-2.两者有非常相似的光谱特性,...     

不同来源钝顶螺旋藻藻蓝蛋白特性比较

 为更大程度地开发利用鄂尔多斯螺旋藻藻蓝蛋白资源,获得螺旋藻藻蓝蛋白提取及保存过程中的最佳参数,对2 藻种藻蓝蛋白硫酸铵盐析饱和度、热稳定性、酸碱稳定性进行了比较。结果显示,在硫酸铵饱和度达到40%时,2 藻种藻蓝蛋白纯度和藻蓝蛋白提取率均达到最高,且鄂尔多斯钝顶螺旋藻藻蓝蛋白纯度为引进钝顶螺旋藻的1.67 倍,两者的提取率持平。鄂尔多斯螺旋藻藻蓝蛋白对温度较引进种敏感,除25℃时相差不大外,35、45、55℃等条件下均表现出相比引进种更大的纯度降低率,多数为后者的两倍,但即使鄂尔多斯钝顶螺旋藻纯度降低率较大,降低后的纯度仍然比引进种最高纯度大,显示出鄂尔多斯钝顶螺旋藻在藻蓝蛋白上的优势。在工艺及环境条件允许的情况下,提取鄂尔多斯钝顶螺旋藻藻蓝蛋白时,尽量保持在较低温度下操作,如果兼顾提取率和纯度,宜选择55℃以内操作。2 藻种藻蓝蛋白酸碱稳定性上表现出较一致的反应,pH 值5~6 可以保持藻蓝蛋白的最大纯度。     

红毛藻R-藻红蛋白果冻的制备工艺

为了研究红毛藻R-藻红蛋白、卡拉胶 魔芋粉复合胶、木糖醇、柠檬酸的不同添加量对红毛藻R-藻红蛋白果冻品质的影响,通过单因素实验筛选获得4种物质的最佳添加量,并采用正交法优化果冻配方,确定红毛藻R-藻红蛋白果冻的最优制备工艺条件。结果表明,得到的最佳配方是复合胶、木糖醇、柠檬酸、红毛藻R-藻红蛋白液的质量分数分别为0.9%,9.0%,0.10%,4.5%;感官评分为87.64,弹性为（0.98±0.016）mm,咀嚼性为（0.789±0.021）N;可溶性固形物质量分数为24.3%;菌落总数为40 CFU/g,未检出大肠杆菌,结果符合国家标准要求。     

海生红藻多管藻R-藻蓝蛋白亚基组成及特性

以海生大型红藻多管藻(Polysiphonia urceolata)为材料,经Sephadex G-150凝胶过滤和DEAE-Sepharose FF离子交换层析,从藻胆蛋白提取液中分离纯化出在非变性电泳和非变性等电聚焦中均表现单一条带的R-藻蓝蛋白(R-phycocyanin,R-PC),等电点为5.6.SDS-PAGE、变性等电聚焦及二维电泳分析表明,所得R-PC含有1种分子质量为18.2kD、pI为6.5的α亚基α16.85.2,含有分子质量为20.0kD和20.9kD、pI为5.5和5.6的4种β亚基β52.05.0、β52.05.9、β52.06.0和β250..69.该结果为深化R-PC的结构功能研究提供了有价值的实验依据.     

红毛藻藻红蛋白的粗提方法比较及不同光照条件下藻胆蛋白变性机制的初步探讨

比较研究了多种细胞破碎方法和盐析方法对红毛藻中藻红蛋白的提取效果，确定组织捣碎法为效率较高的细胞破碎方法，用饱和度为60％的硫酸铵按“改进结晶法”进行盐析为较佳的盐析方法。探讨了冻融法的作用机制。同时对藻红蛋白盐析液在不同照射条件下的变性机制进行了初步的研究和探讨，研究显示光照有可能使藻胆蛋白的摩尔消光系数发生变化。     

混合异养螺旋藻中藻蓝蛋白的分离和纯化

为了从螺旋藻中分离和纯化藻蓝蛋白,研究了一种采用硫铵分步盐析,离子交换层析和凝胶过滤层析的分离纯化方法,在硫酸铵分步盐析中,通过对沉淀物的吸收光谱扫描发现,３００ｇ／Ｌ的硫酸铵溶溶能很好除去杂蛋白,而５００ｇ／Ｌ和６５０ｇ／Ｌ的硫酸铵溶液能较好离ｃ－蓝蓝蛋白和别藻蓝蛋白。     

R-藻红蛋白的提取方法的比较研究

R-藻红蛋白的提取是其分离纯化的重要前提.因此,选择适合的提取方法是较为关键的步骤.以坛紫菜藻为材料,分别采用反复冻融法、液氮研磨法、细胞溶胀法、低浓度CaCl2提取法、SDS溶液提取法、纤维素酶提取法和超声波破碎法提取R-藻红蛋白,以期确定最佳的提取方法.研究结果表明:在反复冻融法中,以磷酸盐缓冲液为提取液,冷冻2 ...     

海带凝集素的分离及性质研究

海带 (Laminariajaponica)经TBS缓冲液粗抽提 ,然后进行硫酸铵分级实验 ,测定盐析范围为 70 %硫酸铵饱和度 ,经 70 %硫酸铵饱和度分级后 ,海带凝集素 (LJL)纯化倍数为 9,总活力回收为 410 % ,LJL粗抽提液糖含量为12 .94% .该凝集素不被已测试的D 果糖、葡萄糖、γ 球蛋白所抑制 ,但被卵清蛋白抑制     

蚓激酶提取条件的优化与酶活性测定

蚯蚓纤溶酶是目前较为理想的溶栓药物之一,具有广泛的临床应用前景。采用盐析法从蚯蚓中提取蚓激酶,通过采用考马斯亮蓝G-250染色法间接地测定蚓激酶活性,优化出最佳的提取条件。结果显示,蚓激酶的提取最佳PH为7.5-8.0,二次盐析硫酸铵饱和度应在80%以上。     

纳豆激酶酶学性质的初步研究

通过(NH4)2SO4对NK分级盐析浓缩,发现用饱和度为65%的(NH4)2SO4盐析,浓缩10倍,NK回收率最高,可达到87.1%.对其纤溶活性研究表明,NK在40℃以下时,纤溶活性相对稳定,65℃以上时,活性迅速下降;pH<4时,显著抑制NK活性;Mg2+对其纤溶活性有显著激活作用,Zn2+,Ca2+,Fe2+和Cu2+对NK有不同的抑制作用,而Al3+则使NK活性完全丧失.     

微囊藻毒素的提取纯化方法比较

研究了从天然蓝藻水华藻粉中提微囊藻毒素,以及对提取物纯化的方法.通过对比不同提取剂的提取效果,发现浓度为80%的甲醇溶液提取效率最高,但采用乙醇作为替代提取剂也有较好的效率,且方法更为安全.对于提取物的纯化,可通过调节溶剂的pH至等电点以除去对反相填料具有负作用的藻胆蛋白.研究结果为更高效地纯化微囊藻毒素提供了依据.     

处理因素对龙须菜藻红蛋白抗氧化活性的影响

比较多种细胞破碎方法、不同硫酸铵浓度对龙须菜藻红蛋白的提取、分离效果,探讨不同光照、温度、pH等处理条件对藻红蛋白粗提物抗氧化活性的影响.结果表明,采用组织捣碎破壁细胞,50%饱和度硫酸铵沉淀藻红蛋白提取效果较好;温度、光照和不适宜pH均会导致藻红蛋白粗提物清除.OH自由基能力降低甚至起促氧化作用.因此对龙须菜原料的保存、加工及藻红蛋白的提取分离等必须在低温、避光、中性环境下进行,以保证藻红蛋白的稳定性.     

扁核木叶蛋白的提取及分离和纯化研究

本实验主要对扁核木叶蛋白的提取、分离和纯化进行了研究。从扁核木叶片中提取叶蛋白,用20%～80%硫酸铵沉淀分级盐析叶蛋白,采用葡聚糖G-150凝胶层析对扁核木叶蛋白进行脱盐和分离,以除去硫酸铵以及其他盐类,最终得到较纯的叶蛋白。结果表明,经盐析沉淀后的叶蛋白提取率达66%,层析纯化后的扁核木叶蛋白提取率较高,达74%,实验基本达到了纯化效果。     

硫酸钾的转化法制备及其晶体生长过程原位观察

为了提高硫酸钾产品纯度和回收率,研究硫酸铵加入比以及氯化钠杂质对硫酸钾产品的纯度和回收率的影响,并用蔡司体式显微镜原位在线观察硫酸钾晶体的生长过程,以找到有利于硫酸钾晶体快速生长的条件。结果表明：氯化钾与硫酸铵化学计量比2KCl：(NH4)2SO4为1：1时,硫酸钾产品回收率达到80%左右;氯化钠杂质严重影响硫酸钾产品的纯度和回收率,降低产品质量;提高溶液中硫酸钾的过饱和度和溶液流速可以加快硫酸钾晶体的结晶生长。     

两步纯化溶液法制备高纯氢氧化铝粉

以工业氢氧化铝和硫酸为原料,采用两步纯化溶液法制得了纯度为99.99%的氢氧化铝粉.此外,对活性炭和离子交换树脂对溶液的纯化效果,以及有屏蔽剂A存在时pH值对铁离子平衡浓度的影响进行了研究.研究结果表明:活性炭、吸附树脂、强碱性、弱碱性阴离子交换树脂纯化溶液的效果较差,螯合树脂Da纯化溶液的效果最好,其饱和容量大约是树脂体积的6倍;当没有屏蔽剂存在时,约有80%的铁离子以沉淀析出;当有屏蔽剂A存在时,在pH值为5时只有4.02%的铁离子以沉淀析出,在pH值为6.5时有16.41%的铁离子以沉淀析出,达到了用屏蔽剂阻止杂质离子析出的二次纯化的目的.     

Extraction and DNA Digestion of 5'-Phosphodiesterase from Malt Root

This study investigated the extraction of 5'-phosphodiesterase from malt root and the degradation of nucleic acids by this enzyme.The extraction used grade precipitation with ammonium sulfate and enzy-matic hydrolysis.Samples were assayed using the modified Bradford method and high performance liquid chromatography.The results show that 5'-phosphodiesterase is isolated by grade precipitation with 30% and 80% saturation of ammonium sulfate and can be utilized to degrade deoxydbonucleic acid.The hydrolysate has four kinds of deoxynucleotides: 5'-dCMP,5'-dTMP,5'-dAMP,and 5'-dGMP.The optimum reaction tem-perature is 70℃,and the optimum pH is 5.5-6.0 for the reaction.The percentage of deoxynucleotides indi-ceted by the China Pharmacopoeia (2000 edition) in the product is over 70%.The extraction of 5'-phosphodiesterase from malt root is shown to be possible and economical.Products from the enzymatic hydrolysate of DNA meet the pharmacopoeia.