朊圆酵母尿酸酶的基本特性研究

研究了尿酸酶分离纯化条件和pH、温度、底物浓度、一些有机和无机试剂对尿酸酶酶促反应速度的影响.研究结果表明,用Triton X-100及巯基乙醇处理细胞悬液(pH 8.5),再用超声波处理破碎细胞效果最佳.硫酸铵沉淀尿酸酶的最佳浓度为75%.用Phenyl-Sepharose CL-4B疏水层析和Xanthine-agarose亲和层析两步纯化步骤可获得理想纯度的酶制剂.在一定的条件下,尿酸酶的最适pH和酸碱稳定pH范围分别为8.5和5.0~12.最适温度为37℃;热稳定性较好,在50℃处理30 min时     

朊圆酵母Y0401尿酸酶的基本特性研究

研究了尿酸酶分离纯化条件和pH、温度、底物浓度、一些有机和无机试剂对尿酸酶酶促反应速度的影响.研究结果表明,用Triton X-100及巯基乙醇处理细胞悬液(pH 8.5),再用超声波处理破碎细胞效果最佳.硫酸铵沉淀尿酸酶的最佳浓度为75%.用Phenyl-Sepharose CL-4B疏水层析和Xanthine-agarose亲和层析两步纯化步骤可获得理想纯度的酶制剂.在一定的条件下,尿酸酶的最适pH和酸碱稳定pH范围分别为8.5和5.0～12.最适温度为37℃;热稳定性较好,在50℃处理30 min时活性保持90%,在60℃处理30min时活性仍保持80%.在最适条件下,该酶催化尿酸的米氏常数(Km)为3.34×10-5mol/L.一些金属离子和有机化合物对酶活性的影响也进行了研究.     

产朊假丝酵母(Candida utilis)尿酸酶的基本特性

产朊假丝酵母尿酸酶通过由DEAE-sepharose和Xanthine-agarose等层析纯化.纯化酶经SDS-PAGE显示单一蛋白带,HPLC显示纯度为97.5%.其相对分子质量为127 kDa,变性SDS-PAGE表明该酶的表观分子质量为33 kDa.该酶具有较强的酸碱稳定性和热稳定性,最适pH为8.5,最适温度为40.0℃.在最适条件下测得其Km为35.0 μmol/L.某些金属离子对酶活性的研究结果表明,Co3 ,Pb2 ,Mn2 及EDTA,NEMI对尿酸酶活性有抑制作用,Mg2 ,Triton X-100对尿酸酶活性略有激活作用.     

碳纳米管和纳米氧化锌修饰的尿酸传感器的研制

利用碳纳米管和纳米氧化锌对尿酸的电催化氧化作用,研制了一种新型的基于尿酸氧化酶的生物传感器.考察了pH、电位等条件对传感器测定尿酸的影响.结果表明在pH 6.98,电位为0.61 V条件下传感器检测尿酸的线性范围为3.38×10-6~1.59×10-3mol/L,检出下限为1.48×10-6mol/L,该传感器稳定性好,制作简单.可用于实际尿样中尿酸的测定,为尿酸的测定提供了一种新的手段.     

产朊圆酵母尿酸酶形成条件研究

择到一株产尿酸酶较高水平的产朊圆酵母（Torula utilis Henneb）．对此菌株尿酸酶形成条件的研究表明：蔗糖、葡萄糖是酶形成的适合碳源;蛋白胨和酵母膏是产酶的适合氮源,另添加无机氮源对产酶略有帮助作用;尿酸、黄嘌呤和乌嘌呤对酶形成起诱导作用,底物尿酸是适宜的诱导物．尿酸酶形成最适培养基组成为（％）：蔗糖3,蛋白胨2,酵母膏0．5,（NH4）2SO40．05,尿酸0．05,KCl0．04,Pb^2＋、Fe^3＋、Hg^2＋、Mg^2＋、Ag^＋、Ca^2＋、Zn^2＋不利于产酶．另对培养条件做了优化探索：最适pH为6．0,在250mL三角瓶中装30mL培养液,接种量10％,在200r／min的旋转摇床上28℃振荡培养23h．     

产朊圆酵母尿酸酶的分离纯化及其部分性质研究

产朊圆酵母Y0401经尿酸诱导培养,菌体采用超声波处理,依次经过DEAE-Sepharose离子交换层析、Phenyl Sepharose CL-4B疏水层析和Xanthine-agarose亲和层析,尿酸酶比活力达到18U/mg,纯化倍数为409倍,回收率为19.2%.纯化后的酶经还原、非还原SDS-PAGE分析为单一蛋白染色带,HPLC显示纯度为98%以上.用HPLC和Superdex 200分子筛层析两种方法测得该酶的相对分子质量为127kDa,在还原条件下进行SDS-PAGE,测得表观分子质量为33kDa,综上结果推测该酶是由分子量相同的4个亚基组成的四聚体蛋白.等电聚焦显示其等电点在6.8~7.5之间.该酶具有较强的酸碱稳定性和热稳定性.最适pH为8.5,最适温度为40.0℃.在最适pH和温度条件下测得该酶Km值为3.34×10-5mol/L.对某些金属离子和有机物对酶活性的影响也进行了研究.     

产朊圆酵母(Torula utilis Henn 2.281)尿酸酶快速提取法的研究

近年来,种类繁多的细胞破碎技术在迅速发展的生物工程领域占有越来越重要的地位．酵母细胞由于其细胞壁的特殊结构,较难破碎,从而限制了它的应用前景．对此,前人曾经进行了广泛而深入的研究：Asenjo等人对酵母细胞的酶溶过程中温度、pH、酶用量及使用次序等方面进行了深入的研究．     

尿酸酶突变体的高通量筛选方法

建立一种尿酸酶突变体的高通量筛选方法。将野生型苛求芽孢杆菌尿酸酶及其突变体的表达载体转入大肠杆菌,每个克隆诱导培养后超声裂解上清液为样品,全自动酶标仪测定293 nm光吸收,并分析反应启动后8~28 min的数据计算酶活性,Bradford法测定总蛋白;ROC比较用酶活性或比活性识别阳性突变体的可靠性。任2种突变体酶活性或比活性比值2时,ROC分析曲线下面积接近1;当酶活性或比活性仅增加50%时,分析比活性所得曲线下面积比分析酶活性更大,将ROC分析比活性提高近1倍。突变体敏感度达90%时,比活性为判断阳性突变体阈值,其相当于以起始物比活性均值加1.7倍标准差;此阈值能用于高通量筛选变体库中比活性增加1倍以上的阳性突变体。     

双硫腙对聚苯胺尿酸酶电极的激活作用

以聚苯胺固定失活的尿酸酶形成酶电极，用酶电极研究尿酸酶的失活过程，在双硫腙存在下，固定的尿酸酶活激活。