一种基于荧光检测的GST-pull down改进方法的建立及对Atsttrin-TNFR2相互作用的分析

创建一种基于荧光检测的GST-pull down改进方法,用于蛋白质间相互作用分析.利用已确定具有相互作用的Atsttrin和TNFR2蛋白对作为实验对象,分别构建GST-Atsttrin和TNFR2-EYFP融合蛋白的原核和真核表达体系.将纯化的GST-Atsttrin与TNFR2-EYFP蛋白孵育后,经离心收集复合物,通过酶标仪检测其荧光值,从而分析Atsttrin和TNFR2间的相互作用.通过荧光值的检测成功分析了Atsttrin和TNFR2间的相互作用,荧光值的检测可代替传统方法中的Western blot分析,从而简化GST-pull down分析步骤、降低操作难度、并可对缺乏特异性抗体的靶蛋白进行有效地分析.     

中田大山楂提取物对肝脏脂肪变性的保护作用分析

利用逆转录PCR(RT-PCR)方法与定量逆转录PCR(q RT-PCR)方法对高血脂小鼠脂肪代谢关键基因激素敏感性脂肪酶(hormone-sensitive triglayceride lipase,HSL)、脂肪酸转运蛋白(fatty acid transport protein,FATP)、乙酰辅酶A羧化酶(acetyl Co A carboxylase,ACAC)等进行检测,结果表明:喂食小鼠中田大山楂提取物可上调FATP、HSL的表达,抑制脂肪合成的限速酶ACAC的表达.同时,病理切片分析显示,给药剂量为90,mg/(kg·d)、130,mg/(kg·d)的中田大山楂提取物与10,mg/(kg·d)的辛伐他汀均能够显著缓解高脂饲喂所引起的小鼠肝脏病变.为进一步明确中田大山楂提取物对肝脏脂肪变性的保护作用,利用体外培养的人肝癌细胞Hep G2优化,建立了高脂肝细胞模型,油红染色分析表明中田大山楂提取物能够剂量依赖性地直接抑制肝细胞脂肪合成过程.     

瑞替普酶在乳酸乳球菌中的表达

为建立溶栓药物瑞替普酶(r PA)的乳酸菌表达系统,从实验室前期构建的大肠杆菌表达质粒p ET22b-rpa上扩增出目的基因rpa,将该基因与乳酸菌表达质粒pCYT连接,构建了pCYT-rpa质粒.此外,为提高r PA在乳酸乳球菌NZ9000中的稳定性,同时构建了rpa位于葡萄球菌(Staphylococcal)耐热核酸酶基因nuc下游融合表达的重组质粒pCYT-nuc-rpa.将质粒p CYT-rpa和p CYT-nuc-rpa分别电转化至乳酸乳球菌NZ9000中,经Nisin诱导表达,Western blot结果显示Nuc可提高r PA在乳酸乳球菌中的稳定性,从而增加了rPA在乳酸菌中的表达量.重组r PA及Nuc-rPA在复性后均具有溶栓活性,活性分别为800,U/L和1,000,U/L.     

核酸制品的开发应用

核酸是生物体细胞中由几十到几千万个单核苷酸聚合而成的高分子聚合物.1868年,英国科学家米歇尔(Miescher)首先从外科绷带的脓细胞的细胞核中发现.第二次世界大战之后,作为了解、阐明生命现象的途径,对脱氧核糖核酸(DNA),核糖核酸(RNA),核苷酸的生物合成途径,DNA、RNA合成与分解有关的酶系,代谢调节机制,生命信息的复制、传递等方面进行了广泛的研究,取得了惊人的成果.在核酸基础理论研究的同时,对核酸及核酸制品的应用研究也得到快速的发展.     

解淀粉芽孢杆菌BI_2的鉴定及其对黄曲霉的抑制作用

菌株BI2是从青贮玉米秸秆饲料中分离得到的一株革兰氏阳性芽孢杆菌.经16S rDNA序列分析,发现该菌株与解淀粉芽孢杆菌Bacillus amyloliquefaciens(NC_009725)的相似性达到99.6%;进一步结合Biolog及生理生化分析,将该菌株鉴定为解淀粉芽孢杆菌.以番茄叶霉病菌、黄瓜枯萎病菌等12种植物病原菌及部分霉菌、酵母、食品乳酸菌和人类致病细菌为指示菌进行抑菌实验.结果表明:BI2主要抑制丝状真菌,而对细菌无拮抗作用;BI2菌株生长36 h的上清液能明显抑制黄曲霉孢子萌发及其菌丝生长,抑制率分别达到67.4%和74.8%;而且该上清液经120℃高温处理20 min后对黄曲霉的抑制效果基本没有影响.     

SMYD3对氯化钴诱导T47D乳腺癌细胞缺氧的影响分析

为了探究组蛋白甲基化酶SMYD3是否会对氯化钴(CoCl_2)诱导乳腺癌细胞缺氧损伤作用产生影响,采用MTT法和流式细胞术检测不同浓度的CoCl_2(0、50、100、200、400,μmol/L)给药24,h以及联合转染过表达质粒使SMYD3过表达后对T47D细胞的增殖及细胞周期的影响;实时荧光定量PCR法(Real-time PCR)检测其对SMYD3转录表达的影响情况.MTT和流式细胞术结果显示:CoCl_2可剂量依赖性地对T47D乳腺癌细胞的增殖产生抑制作用(P0.01),并诱导产生G0/G1期细胞周期阻滞(P0.05).CoCl_2可以抑制SMYD3的转录(P0.01).利用siRNA抑制内源性SMYD3表达后同样可诱导细胞发生G0/G1期阻滞(P0.05),而转染外源质粒使SMYD3过表达则可明显拮抗CoCl_2所诱导的G0/G1期阻滞及对细胞的杀伤作用.CoCl_2对T47D细胞的周期调控作用可能与抑制SMYD3的表达有关,SMYD3的过表达可提升肿瘤细胞在缺氧环境下的存活能力.     

高温索氏提取土壤中的可降解聚乙烯蜡残余物及根窖降解评价

通过高温索氏提取法采用混合溶剂(V正庚烷∶V二甲苯=1∶4)对土壤中的可降解聚乙烯(PE)残余物(PEW,Mw=5 000)进行分离提取,分别考察了提取时间和土壤类型对PEW提取率及结构和热性质的影响,同时做根窖实验并进行相对分子质量的测定。结果表明,对PEW的提取率随提取时间的增加而增大,2.5h后达最大(92.5%);提取时间对PEW的分子结构无明显影响,但对PEW的结晶有一定影响,使得熔融温度和结晶温度分别升高1~3℃;提取时间对PEW的平均相对分子质量无明显影响,但会导致相对分子质量分布变窄;土壤类型对PEW的提取率基本没有影响;根窖实验结果表明该提取方法可以用于实际土壤中PEW残余物的降解测试评价,长期跟踪下去还可以评估PE完全降解所需时间。     

细粒度授权的Web页面自动生成器——WPAG

现有的Web应用框架在一定程度上能够降低业务逻辑处理的难度,但缺乏页面细粒度授权机制的支持,对页面及页面上操作的访问控制问题仍要编写大量代码处理．本文设计并实现了一种面向细粒度授权机制的Web页面自动生成器（Web Pages Automatically Generator）WPAG．该生成器采用组件化页面自动生成技术,与基于角色的细粒度访问控制模型相结合．开发者只需对交互模型接口进行简单参数设置,即可实现细粒度访问控制的页面代码自动生成,并提供二次开发能力,适应复杂的逻辑业务的应用．     

城镇建设规划中现状建筑与工程质量计算机辅助 …

以实例探讨了计算机辅助设计（ＣＡＤ）技术在城镇建设规划现状建筑与工程质量分析中的应用,为快速、准确、高效分析与制图提供了先进的技术手段。