中田大山楂提取物对肝脏脂肪变性的保护作用分析

利用逆转录PCR(RT-PCR)方法与定量逆转录PCR(q RT-PCR)方法对高血脂小鼠脂肪代谢关键基因激素敏感性脂肪酶(hormone-sensitive triglayceride lipase,HSL)、脂肪酸转运蛋白(fatty acid transport protein,FATP)、乙酰辅酶A羧化酶(acetyl Co A carboxylase,ACAC)等进行检测,结果表明:喂食小鼠中田大山楂提取物可上调FATP、HSL的表达,抑制脂肪合成的限速酶ACAC的表达.同时,病理切片分析显示,给药剂量为90,mg/(kg·d)、130,mg/(kg·d)的中田大山楂提取物与10,mg/(kg·d)的辛伐他汀均能够显著缓解高脂饲喂所引起的小鼠肝脏病变.为进一步明确中田大山楂提取物对肝脏脂肪变性的保护作用,利用体外培养的人肝癌细胞Hep G2优化,建立了高脂肝细胞模型,油红染色分析表明中田大山楂提取物能够剂量依赖性地直接抑制肝细胞脂肪合成过程.     

一种基于荧光检测的GST-pull down改进方法的建立及对Atsttrin-TNFR2相互作用的分析

创建一种基于荧光检测的GST-pull down改进方法,用于蛋白质间相互作用分析.利用已确定具有相互作用的Atsttrin和TNFR2蛋白对作为实验对象,分别构建GST-Atsttrin和TNFR2-EYFP融合蛋白的原核和真核表达体系.将纯化的GST-Atsttrin与TNFR2-EYFP蛋白孵育后,经离心收集复合物,通过酶标仪检测其荧光值,从而分析Atsttrin和TNFR2间的相互作用.通过荧光值的检测成功分析了Atsttrin和TNFR2间的相互作用,荧光值的检测可代替传统方法中的Western blot分析,从而简化GST-pull down分析步骤、降低操作难度、并可对缺乏特异性抗体的靶蛋白进行有效地分析.     

瑞替普酶在乳酸乳球菌中的表达

为建立溶栓药物瑞替普酶(r PA)的乳酸菌表达系统,从实验室前期构建的大肠杆菌表达质粒p ET22b-rpa上扩增出目的基因rpa,将该基因与乳酸菌表达质粒pCYT连接,构建了pCYT-rpa质粒.此外,为提高r PA在乳酸乳球菌NZ9000中的稳定性,同时构建了rpa位于葡萄球菌(Staphylococcal)耐热核酸酶基因nuc下游融合表达的重组质粒pCYT-nuc-rpa.将质粒p CYT-rpa和p CYT-nuc-rpa分别电转化至乳酸乳球菌NZ9000中,经Nisin诱导表达,Western blot结果显示Nuc可提高r PA在乳酸乳球菌中的稳定性,从而增加了rPA在乳酸菌中的表达量.重组r PA及Nuc-rPA在复性后均具有溶栓活性,活性分别为800,U/L和1,000,U/L.     

Stat3调控MMP9和TIMP1的转录与表达

通过脂质体瞬时转染Stat3重组质粒的方法在NIH3T3细胞中过表达Stat3;采用RT-PCR,Western blot以及荧光素酶活性分析的方法评估Stat3对MMP9及对其内源性抑制因子TIMP1的影响.结果表明:Stat3可增强MMP9及TIMP1基因启动子的活性,促进两者的转录与表达;并且Stat3对TIMP1的促进作用明显强于对MMP9的促进作用,从而使ECM的降解能力减弱,细胞外基质成分积累,导致纤维化的发生.     

以评估为契机 加强省部级重点实验室建设

本文以工业发酵微生物教育部重点实验室暨天津市工业微生物重点实验室接受天津市科委和教委的评估为例,探讨了省部级重点实验室评估的必要性和重要作用,并以评估为契机,以评估标准为指南,结合重点实验室的实际情况和特色,进行总结和梳理,提出加强重点实验室的建设和管理的几点对策。     

SMYD3对氯化钴诱导T47D乳腺癌细胞缺氧的影响分析

为了探究组蛋白甲基化酶SMYD3是否会对氯化钴(CoCl_2)诱导乳腺癌细胞缺氧损伤作用产生影响,采用MTT法和流式细胞术检测不同浓度的CoCl_2(0、50、100、200、400,μmol/L)给药24,h以及联合转染过表达质粒使SMYD3过表达后对T47D细胞的增殖及细胞周期的影响;实时荧光定量PCR法(Real-time PCR)检测其对SMYD3转录表达的影响情况.MTT和流式细胞术结果显示:CoCl_2可剂量依赖性地对T47D乳腺癌细胞的增殖产生抑制作用(P0.01),并诱导产生G0/G1期细胞周期阻滞(P0.05).CoCl_2可以抑制SMYD3的转录(P0.01).利用siRNA抑制内源性SMYD3表达后同样可诱导细胞发生G0/G1期阻滞(P0.05),而转染外源质粒使SMYD3过表达则可明显拮抗CoCl_2所诱导的G0/G1期阻滞及对细胞的杀伤作用.CoCl_2对T47D细胞的周期调控作用可能与抑制SMYD3的表达有关,SMYD3的过表达可提升肿瘤细胞在缺氧环境下的存活能力.     

大鼠胚胎神经干细胞体外培养及诱导分化

神经干细胞在理论研究和临床应用上有着广泛的前景.本文主要在体外分离培养SD大鼠胚胎前脑的神经干细胞,并分别用去除生长因子或添加全反式维甲酸(ATRA)两种方法诱导分化.免疫荧光染色技术分别检测细胞巢蛋白(Nestin)的表达及分化后β微管蛋白Ⅲ(β-Ⅲtubulin)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达,计算分化率.结果显示:细胞生长状态良好,呈Nestin表达阳性.分化后可获得β-Ⅲtubulin及GFAP表达阳性的细胞,其中ATRA诱导方法获得β-Ⅲtubulin阳性细胞较多.     

植物乳杆菌CGMCC8198破碎上清液对黑色素生成的抑制作用

黑色素是由黑色素细胞合成的一种生物色素,能避免皮肤被紫外线灼伤,过度增长或分布不均会影响美观,导致老年斑、雀斑、黑斑病等病症.通过对植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)CGMCC8198破碎上清液(LAS)的抗氧化和黑色素生成抑制活性进行检测,结果表明:LAS能明显清除ABTS和DPPH自由基,并显著降低小鼠黑色素瘤细胞B16F10内黑色素的生成,且对细胞活性几乎无影响.LAS可降低细胞内的黑色素生成关键酶——酪氨酸酶的活性,而对细胞外酪氨酸酶的活性则无影响.通过实时荧光定量PCR(Real-timePCR)、免疫印迹实验(Westernblot)和荧光素酶报告基因检测分析,结果表明:LAS能够抑制酪氨酸酶和其相关蛋白家族成员TRP-1、TRP-2及该家族上游关键转录调控因子小眼畸形相关转录因子(MITF)的转录表达;抑制MITF以及TYR启动子转录活性.     

常压室温等离子体(ARTP)诱变及高通量筛选维生素B_(12)高产菌株

采用常压室温等离子体(atmospheric and room temperature plasma,ARTP)诱变脱氮假单胞菌(Pseudomonas denitrificans)并从中筛选高产维生素B12突变株,确定等离子诱变最优处理时间75,s、输出功率100,W.通过流式细胞仪并结合核糖开关(riboswitch)感应元件检测其荧光值以初筛诱变后高产菌株,并利用48孔板高通量培养发酵,酶标仪快速检测维生素B_(12)产量,建立完整的诱变后高通量筛选体系.通过4轮ARTP诱变,筛选得到的突变株PA320-M4-1B1在250,mL摇瓶发酵6,d的条件下,维生素B_(12)产量达到(103.2±2.1)mg/L,较初始菌株PA320的(71.9±1.8)mg/L提高了43.8%,且遗传性状稳定.     

不同亚型人SMYD3启动子转录活性比较

利用PCR方法克隆SMYD3两个亚型的启动子区域,并构建其荧光素酶报告质粒.转染COS-7细胞后,利用荧光素酶报告分析技术,对二者启动子的转录活性进行了检测和比较.结果显示:SMYD3亚型1启动子的转录活性要显著高于亚型2启动子,生物信息学分析提示其原因可能与含有转录因子E2F-1结合位点的串联重复序列有关.