绿豆胰蛋白酶抑制剂BBI诱导肺腺癌A549细胞凋亡

研究了绿豆胰蛋白酶抑制剂BBI对人肺腺癌A549细胞增殖抑制作用和对肺腺癌A549细胞凋亡的影响.结果显示:绿豆BBI对人肺腺癌A549细胞的增殖有明显抑制作用,绿豆BBI可以促使人肺腺癌A549细胞出现明显的染色质浓缩和凋亡小体,诱导人肺腺癌A549细胞的凋亡.说明绿豆BBI能抑制人肺腺癌A549细胞增殖、诱导人肺腺癌A549细胞凋亡,为绿豆BBI抗肿瘤效应提供了依据.     

反相微乳液萃取Zn2+、Ni2+/胰蛋白酶体系的研究

分析了部分皂化的二(2-乙基己基)磷酸酯/正庚烷反相微乳液萃取Zn2+/胰蛋白酶、Ni2+/胰蛋白酶前后体系的紫外光谱和透射电镜.结果表明,在胰蛋白酶萃取有机相中,蛋白质、两亲分子及过渡金属离子3者之间存在着复杂相互作用,金属离子的种类、浓度、水相的pH值对胰蛋白酶的羰基和芳香族残基的微环境均有不同程度的影响,并导致胰蛋白酶萃取率的变化.同时,从萃取前后微乳液和胰蛋白酶的形貌可见,胰蛋白酶可较好的被萃取进入反相微乳液的水核中,过渡金属离子的加入则使微乳液发生破乳现象.     

人胰蛋白酶原-2在大肠杆菌中的表达、纯化与活性测定

胰蛋白酶原-2是急性胰腺炎相关的敏感而特异的标志物,并且与多种肿瘤转移的过程密切相关．对胰蛋白酶原-2基因5’端4个氨基酸的密码子碱基进行简并突变,并在其3’端连接6个组氨酸编码序列构建含重组质粒pBVTg2的大肠杆菌工程菌-pBvTg2／DH5α．重组大肠杆菌经温度诱导后获得了高效表达,重组蛋白占总菌体蛋白的20％,并以包涵体形式存在．包涵体经尿素缓冲液裂解后,通过Ni-NTA亲和树脂一步分离纯化．纯化蛋白经SDS-PAGE分析及利用anti—histidine mAb进行Western blotting分析,以及蛋白N末端测序分析,结果表明与目的蛋白特征相符合．纯化的重组人胰蛋白酶原-2经复性后能与天然人胰蛋白酶原-2的单抗antihTrypsinogen2 mAb特异结合,复性后的蛋白在肠激酶作用后测得具有74BAEEU／mg的胰蛋白酶比活力,为进行胰蛋白酶原-2单克隆抗体的制备及其检测和应用奠定了基础．     

抗虫基因在转基因植株中聚合的初步研究

以质粒 pBUSCK HPT ,pCUSBK HPT和pGNA HPT作抗虫基因供体 ,优良籼型三系恢复系SH5 2 7和广亲合系W 2 0 0 8为受体 ,采用基因枪转化法 ,获得了转修饰的豇豆胰蛋白酶抑制剂基因 (sck)、修饰的Bt毒蛋白基因 (sbk)和雪花莲凝集素基因 (gna)的植株 .通过人工杂交 ,将外源基因聚合 .分子证据显示 ,作者获得了抗性基因聚合的材料 .蛋白活性测定表明 ,聚合基因的表达因载体结构相似而受到影响 ,但抗虫性却得到提高 .作者还讨论了聚合转基因在水稻育种中的作用和及其相关问题 .     

固定化胰蛋白酶水解酪蛋白及亲和吸附提取磷肽

磷肽与钙离子结合成可溶性的磷肽钙，是最易为人体吸收的磷钙营养素．又是无毒有效的龋齿防治剂．本文用固定化胰蛋白酶在ｐＨ８．０的硼酸缓冲液中，４０℃条件下水解酪蛋白，经ＳＤＳ聚丙烯酰胺凝胶电泳及葡聚糖Ｇ—１５０凝胶层析分析，其最适水解时间为１０ｈ．用硫氨络铁凝胶珠在ｐＨ４．０醋酸缓冲液含０．５ｍｏｌ／ＬＫ２ＳＯ４条件下亲和吸附磷肽，用ｐＨ７．６Ｔｒｉｓ—ＨＣｌ缓冲液洗脱，磷肽的吸附量为１．７ｍｇ／ｍＬ湿珠．每克磷肽含磷量为５５．５ｍｇ．每克酪蛋白的含磷量为６．９ｍｇ．磷肽的含磷量是酪蛋白的８倍．     

人胚肝细胞分离培养研究

目的 探讨体外优化培养人胚肝细胞的方法：方法采用胰蛋白酶和聚乙烯吡咯烷酮(pvp)，胶原酶，胶原酶和pvp消化法分离人胚肝细胞，并比较3种方法对分离人胚肝细胞的效果。结果运用这三种方法均能成功地培养出原代肝细胞，并能够传代；但胶原酶和pvp消化法分离细胞效果最好，细胞贴壁生长能力强。三种消化方法其细胞存活率从高到低依次为胶原酶和pvp消化法、胶原酶消化法、胰蛋白酶和pvp消化法。结论人胚肝细胞的分离首选胶原酶和pvp消化法，使用该法在体外培养的人胚肝细胞生长良好，可用于肝细胞移植和生物人工肝等方面的研究。     

胰蛋白酶水解牛血清白蛋白过程集总动力学研究

在间歇搅拌反应器中用胰蛋白酶水解牛血清白蛋白 ,考察了反应温度、底物浓度与酶用量等操作参数对水解度的影响规律。在此基础上 ,根据水解产物的相对分子质量分布将其归入四个集总组分 ,建立了此反应体系的四集总动力学模型。按照自下而上分层估算的原则 ,采用Marquardt法估算出反应网络中各反应的动力学常数。结果表明 ,产物空间体积的大小是影响反应速率的主要因素之一 ,动力学常数与温度的关系能较好地符合阿累尼乌斯关系式。经不同原料组成和反应条件的实验验证 ,各集总组分浓度的模型计算值与实验值较为吻合 ,这说明所建立的集总动力学模型能较为有效地预测反应网络的产物分布     

蛋白酶抑制剂mRNA在抗褐飞虱水稻中的原位定位

利用RNA原位杂交技术, 对抗虫水稻B5植株接种褐飞虱若虫72 h后的根、茎、叶组织切片进行了蛋白酶抑制剂基因(E61932)的原位定位. 结果显示, 在未接虫的材料中, 该基因在根、茎、叶等部位都有表达, 但表达水平很低; 褐飞虱取食后, 蛋白酶抑制剂基因在水稻茎、叶的薄壁组织中大量表达, 根中表达较弱, 说明受褐飞虱若虫取食诱导该基因表达上升.     

肝素钠的精制及效价分析

采用过氧化氢二次氧化法精制肝素钠．在此过程中采用低温离心技术，解决了去除杂蛋白时沉淀不易滤除的问题．通过实验确立了酶解结合氧化法精制肝素钠的新工艺，克服了精品肝素钠纯化过程中残留杂蛋白难以除去的缺点．在粗品肝素钠溶液中加入胰蛋白酶对杂蛋白进行酶解，再结合氧化除杂，提高了精品肝素钠的效价和效价回收率．