闽南养殖九孔鲍暴发性流行病的病原研究

从1999年春季东山县九孔鲍暴发流行病的病鲍内脏提取病原粗提液,经电镜观察和回归感染实验,证实其病原主要是病毒合并细菌感染,细菌为两种弧菌,病毒为球形,其发生基质为细胞质中一种双层膜的泡状结构,观察到病原入侵后引起鲍的组织细胞产生严重的病理变化,探讨病原的入侵途径,提出预防该流行病的一些措施.     

皱纹盘鲍Hdh-MMP-1基因cDNA的克隆及原核表达

利用同源克隆方法和cDNA末端快速扩增(RACE)技术,从皱纹盘鲍(Haliotis discus hannai)肌肉组织中克隆得到基质金属蛋白酶-1基因(Hdh-MMP-1)cDNA全长序列(GenBank登录号:KR537291)。结果表明,Hdh-MMP-1 cDNA全长2136 bp,其中ORF长度为1551 bp,编码区含有516个氨基酸残基,预测其分子质量为58.94 ku,理论等电点为5.99。Hdh-MMP-1具有MMPs家族典型的N-端前肽区、催化区、铰链区和C-端类血红素结合区。利用SOPMA和SWISS-MODEL软件对该基因编码蛋白质高级结构进行了预测分析。氨基酸序列相似性结果显示,Hdh-MMP-1不仅与多种生物MMP-1基因具有序列相似性,且与某些软体动物和虫类的MMP-14及MMP-19也具有序列相似性。多序列比对结果显示,Hdh-MMP-1与红螺鲍、杂色鲍、美洲牡蛎的MMP-1相似性分别为95.29%、82.35%、38.85%。随后,构建了表达载体pET28a-catMMP-1,利用大肠杆菌原核表达系统,在大肠杆菌BL21 (DE3)中成功对该蛋白质催化区进行异源表达。     

九孔鲍肠道及水体中产几丁质酶菌群的测定

通过特定的TCBS(Thiosufate-Citrate-Bile Salts-Sucrose)和筛选培养基,对九孔鲍肠道及其养殖水体中菌群的产几丁质酶能力进行了研究．结果表明,在鲍鱼肠道及其养殖水体中均存在有能分泌几丁质酶的微生物．在鲍鱼肠道中,共分离到12株菌株,占总细菌的34．3％,它们分别属于Vibrio fluvialis和Vibrio minicus;在鲍鱼养殖水体中则分离到4株菌株,占总细菌的11．8％,属于Vibrio fluvialis．比较鲍鱼肠道和养殖水体中产几丁质酶菌株的比例及其能力的大小,可以发现前者的比例高于后者,由此表明了鲍鱼肠道对菌株的选择性．     

杂色鲍×盘鲍杂交及亲本自繁群体的AFLP分析

应用AFLP技术研究了杂色鲍(SS)、盘鲍(JJ)及其正反交群体(SJ和JS)的遗传关系,并比较了各群体内的遗传多样性.3对选择性引物共扩增出344个位点.双亲自繁群体SS和JJ 的AFLP图谱差异很大,平均遗传距离达1.425.因此,AFLP图谱可以用于两物种及其杂交种的种质鉴别.正反交群体SJ与JS的AFLP图谱很接近于母本自繁群体,平均遗传距离分别为0.111(SJ与SS之间)和0.134(JS与JJ之间),而与父本自繁群体则有较大区别,平均遗传距离分别达1.408(SJ与JJ之间)和1.394(JS与SS之间).将4个群体分为SS/SJ和JS/JJ两组,进行三水平的AMOVA分析,结果显示:84.74%遗传变异来源于母本不同的两组之间(SS/SJ组和JS/JJ组之间),12.66%变异存在于群体内个体之间,正反交群体与母本之间的变异仅有2.60%.另一方面,正反交F_1群体的多态性位点比例、Nei′s 遗传多样度、香农多样性指数均低于母本自繁群体.综合群体内多样性和群体间遗传关系分析结果,杂色鲍与盘鲍正反交F_1的遗传物质组成有别于同时含有双亲基因组的实质性杂交,而与母本有着高度的遗传同质性,且遗传多样性水平略低于母本自繁群体.     

男子二级铁饼运动员专项素质与成绩的统计分析

以北京体育大学的32名男子二级铁饼运动员为研究对象,运用体育测量与评价和统计学原理,经逐步回归计算分析,从被选入方程的8项指标中筛选出和男子二级铁饼运动员成绩相关最密切的变量指数,它们分别是体重X2、卧推X3、100 m起跑X5,并得到了预测运动员成绩的回归方程:Y=32.788 1 0.272 6X2-2.072 5X3 0.077 4X5,旨在为教练员制定训练计划和选材时提供科学的依据.     

三种鲍腹足肌胶原多肽抗氧化性研究

研究了皱纹盘鲍(Haliotis discus hannai)、黑足鲍(Haliotis iris)及其杂交鲍腹足胶原多肽的制备和性质,并采用总还原力、对O^-₂·和·OH自由基清除率和致衰小鼠灌胃胶原多肽后体内MDA、SOD和GSH-PX变化来评价3种鲍胶原多肽的抗氧化性。结果显示,皱纹盘鲍、黑足鲍及其杂交鲍的胶原蛋白分别占总蛋白含量的23.44%、30.78%和26.92%,皱纹盘鲍与杂交鲍胶原蛋白含有α1、α2、β和γ链,而黑足鲍胶原蛋白没有γ链;来自3种鲍的胶原多肽均呈现出较高的还原力、O^-₂·和·OH自由基清除能力,对O^-₂·清除率的IC₅₀值分别为3.03、2.40、1.15 g/L,对·OH清除率的IC₅₀值分别为4.12、3.58、3.70 g/L;灌胃3种胶原多肽后,致衰小鼠肝脏和血清的MDA含量均降低,SOD和GSH-PX活力均上升。三者比较,杂交鲍胶原多肽在降低MDA含量、提高GSH-PX活力的作用最强,黑足鲍胶原多肽在提高SOD活力的效果最显著。     

皱纹盘鲍循环系统和排泄系统的组织学研究

对皱纹盘鲍的循环系统和排泄系统进行了组织学研究，并对二者组织学上的关系进行了探讨．结果表明：鲍循环系统由心脏、血管和许多血窦组成．属于开管式循环．血液由血浆和3种不同形态的血淋巴细胞构成．鲍的排泄系统主要由左右2个肾脏组成．肾脏呈囊状．由肾脏壁和肾实质构成．而肾脏壁由围心腔壁延伸而成．与围心腔壁具有几乎相同的结构．肾小管是肾实质的主耍功能结构，由一层腺上皮细胞构成．肾小管之间充满血窦．循环系统与排泄系统组织结构上的紧密联系有利于代谢产物的排泄．     

西氏鲍与盘鲍杂交育苗的初步研究

于2005年11月～12月利用从日本引进的西氏鲍与盘鲍进行了杂交育苗实验,获得西氏鲍♀×盘鲍♂、盘鲍♀×西氏鲍♂、西氏鲍♀×西氏鲍♂和盘鲍♀×盘鲍♂4个组合的F1代.对西氏鲍和盘鲍的卵径以及4个组合的受精率、孵化率、胚胎发育速度、子代早期阶段的生长速度以及存活率进行比较,结果表明:西氏鲍和盘鲍的卵黄径并无明显差异,而二者的卵膜径差异显著.西氏鲍♀×盘鲍♂的受精率为19.1%～65.3%,孵化率为76.3%～84.8%.盘鲍♀×西氏鲍♂的受精率为22.3%～82.7%,孵化率为77.1%～85.2%.在水温19.0℃、盐度30的条件下,杂交组合比自繁组合的胚胎发育速度明显滞后.在鲍苗生长的早期阶段(12、20、30、60 d),各组合生长速度差异不显著(p＞0.05),但从100 d后,杂交子代的生长速度快于盘鲍和西氏鲍的自繁子代,其中以西氏鲍♀×盘鲍♂的生长速度最快,与其它组合相比差异显著(p＜0.05),表现出一定的杂种优势.但是,在180 d内,杂交组合和自繁组合稚鲍的存活率差异不显著(p＞0.05).     

皱纹盘鲍组织培养研究

用ＭＥＭ培养液对皱纹盘鲍的血细胞、鳃、外套膜、肾脏和足肌进行了组织培养研究,血细胞培养１ｈ后即贴壁生长,从形态上可分为成纤维样细胞和圆形细胞,但２ｄ后即脱落,鳃细胞呈圆形,增殖迅速,容易获得传代细胞,其中两株现已分别传至２２代和３０代,肾细胞呈上皮样,生长缓慢,已传至第３代、外套膜和足肌则未获传代细胞。     

1999年春季东山九孔鲍暴发性病害研究

对 １９９９ 年春季福建省东山县九孔鲍的暴发性流行病进行调研和检测,对细菌性病原进行分离纯化、回归感染确定致病原、对致病菌进行形态（包括电镜和光镜观察）和生理生化鉴定;对病毒性病原进行电镜负染和超薄切片观察、以及病理变化分析．结果表明引起此次东山养殖九孔鲍暴发性流行病的主要致病原是 ３ 种球状病毒（５０ ｎｍ 、１１０ ｎｍ 、１５０ ｎｍ ）、溶藻弧菌和副溶血弧菌．还探讨了这些病菌和病毒的致病性,并以 ４９ 种药敏纸试验寻求防治的有效药物．