利用枯草杆菌整合表达嗜铬粒蛋白抗真菌片段

为实现CGA1-76片段基因在枯草杆菌中的稳定表达,将CGA1-76片段基因的表达元件重组到枯草杆菌转座子质粒pHV1249微转座子mini-Tn10内,利用mini-Tn10将CGA1-76片段基因的表达元件整合到枯草杆菌DB1342染色体上,用氯霉素和红霉素筛选枯草杆菌转座工程菌DB1342(TnSVTQ).DB1342(TnSVTQ)在无选择压力条件下经10 d连续传代培养,转座子内氯霉素抗性丢失率为0%,说明转座子稳定整合在DB1342染色体上.SDS-PAGE和免疫印迹分析结果表明,在蔗糖诱导下,CGA1-76片段基因在DB1342(TnSVTQ)中获得表达,产物被分泌到细胞外.孔穴琼脂扩散法测定表达上清的抑制真菌活性,结果表明重组CGA1-76能抑制烟曲霉菌和黄曲霉菌的生长,抑菌圈直径分别为9 mm和8 mm.     

利用Tn5转座子构建杆状病毒AcMNPV随机突变体的初步研究

以杆状病毒模式种AcMNPV为研究对象,应用基于Tn5转座子的随机转座的方法,构建杆状病毒突变体库将果蝇hsp70启动子后接绿色荧光蛋白基因后插入Tn5转座子,构建了可以在昆虫细胞中表达,易于跟踪的转座载体．利用体外转座系统将转座子随机插入AcMNPV基因组,并用转座反应液转染Sf21细胞,得到了表达绿色荧光蛋白的病毒突变体库进一步纯化了两株病毒B9F和Li6A,进行了转座子插入位点的分析,确定两株病毒中,转座子分别插入了94K基因和p10基因．该方法将为杆状病毒功能基因组研究提供重要的手段。     

低能氮离子束对大肠杆菌基因表达的影响

研究了能量为25keV的氮离子束照射后大肠杆菌细胞基因表达水平的变化.结果表明:(1)N + 离子照射后细胞总蛋白表达水平显著提高.(2)应用差异mRNA表达(DDRT-PCR)技术并与点杂交方法相结合,使用两组引物组合,成功地从E.coli(DH5α)细胞中分离了共计23条差异表达片段:12条基因表达开启(损伤诱导表达),4条表达关闭,6条表达增加,1条表达减少.证明低能离子束诱发E.coli的基因表达变化是明显和多样性的.     

PiggyBac 转座子在肝脏中的活性研究

本实验运用高压尾静脉注射的方法将PB转座系统导入小鼠肝脏,研究其在肝脏中的转座活性,系统中PB转座子携带表达红色荧光蛋白的基因以指示转座的发生.注射10个月后取出小鼠肝脏,体视荧光显微镜观察肝脏是否有红色荧光,并通过基因组PCR、splinkerette PCR分析PB转座子在肝脏中的插入情况.实验结果表明,PB转座子在肝脏内发生高效转座,检测的68个PB插入位点中有34个位于基因序列,使得PB系统可以作为有效的基因诱变工具来研究基因功能.     

低能离子束辐照诱导的水稻差异表达基因的调控网络研究

用基因芯片检测鉴定离子束辐照下水稻中的差异表达基因（DEGs）.结果共检测到26个上调和6个下调的差异表达基因.共表达网络分析（RiceNET）表明,这些基因都存在着直接或间接的互作网络,暗示水稻存在着以前没有充分认识的基因网络.为进一步研究植物应答离子束辐照候选基因提供了基础.     

强流离子束辐照加热过程的数值计算

考虑瞬态的热传导过程,用有限差分方法计算了强流恒定离子束辐照过程的温度效应.由温升曲线的计算可知,对中等以上的注量率(>10~(13)cm~(-2)s~(-1))来说,快速注入过程都将是非稳态的,由此可知对强流离子束辐照过程进行瞬态热传导分析是必要的.若注量固定,晶片表面温度与离子能量的关系在低能部分(<100keV)很平缓,在高能部分很陡峭,在大注量注入情况下,降低靶座温度以抑制晶片表面温升是可行的方法之一.     

低剂量碳离子束辐射增强AdCMV-p53转染对人非小细胞肺癌细胞的治疗效果

探讨低剂量碳离子束预辐照对AdCMV-p53转染非小细胞肺癌细胞的影响,观察了20和40MOIAdCMV-p53转染经^12C^6＋束流或γ射线预辐照的H1299细胞后,外源性p53的表达、细胞周期、细胞凋亡和细胞存活等．结果显示,经碳离子束预辐照后AdCMV-p53转染细胞p53阳性细胞所占比例高达90％多,明显高于γ射线预辐射后AdCMV-p53转染细胞p53阳性率．低剂量碳离子预辐照明显阻止AdCMV-p53转染细胞G0／G1阻滞的发生,促进G2／M阻滞和细胞凋亡的发生．碳离子束辐射诱导AdCMV-p53转染组相对生物学效应（RBE）比单纯碳离子束辐照组增加30％～60％,比单纯AdCMV-p53转染组增加20％～130％,比单纯γ辐射诱导AdCMV-p53转染组增加30％～70％．结论：低剂量碳离子束预照射明显增强外源性p53的表达和AdCMV-p53转染对非小细胞肺癌细胞的抑制．     

逆转录转座子LINE-1的活性调控及其在癌症中的作用

逆转座子长散布核元件-1(LINE-1)是一种跳跃基因,约占人类基因组的17%。LINE-1采用"复制-粘贴"的方式,以RNA为媒介,在基因组中进行转座易位。一般地,细胞中LINE-1的转座活性受到严格调控。而在肿瘤细胞中,LINE-1异常活化,以逆转座依赖或非依赖的方式,影响基因组的稳定性:前者可以改变靶基因表达、引起染色质重排或协助其他转座子(如SINEs等)进行转座;后者为表观遗传的方式,通过产生内源的调节性RNAs、形成LINE-1嵌合性转录、形成新的剪切位点或启动位点来改变临近基因的表达等。本文主要介绍LINE-1的组成及其转座活性调控,并讨论LINE-1转座在肿瘤中的功能,以期为LINE-1的深入研究、肿瘤的形成机制及治疗探索提供一些参考。     

过表达OsAIL5基因使水稻种子在发芽过程中对高浓度硝酸盐敏感

从水稻中克隆AP2/EREBP转录因子家族基因OsAIL5(AINTEGUMENTA-like 5),聚类分析结果表明OsAIL5为拟南芥AIL5的同源基因.器官表达谱结果表明OsAIL5在干燥种子中表达量最高.启动子GUS染色分析结果显示OsAIL5在种子发芽后第5～7d表达,并主要定位于根和幼叶中.转35S∷OsAIL5基因水稻的发芽率和生长势指标都表明:过表达OsAIL5基因会导致水稻种子对高浓度硝酸铵敏感.     

铀矿冶低剂量γ射线辐照对淋巴细胞凋亡的影响

淋巴细胞凋亡在其发育中起着重要的作用,淋巴细胞凋亡率升高可能会引起免疫缺陷,抑制淋巴细胞凋亡率可能会促进淋巴瘤的发展。铀矿冶低剂量γ射线辐照会诱导淋巴细胞的凋亡,流式细胞术检测结果表明,淋巴细胞在接受剂量率为14 μGy/h的低剂量率γ射线辐照的21 d内凋亡率逐渐增高,并基本呈线性增加趋势。全转录组测序结果表明,低剂量γ射线辐照后,淋巴细胞内共有1 677个表达差异显著(任意两组间p值<0.05)的基因,主要与细胞对压力的反应、细胞周期、DNA构象变化、DNA修复、细胞蛋白分解代谢过程、病毒致癌机理、染色体分离、p53的转录调控相关。低剂量γ辐射会激活肿瘤抑制蛋白p53,最终使细胞凋亡率升高。     

强脉冲离子束对Ni/Ti和Al/Ti体系的辐照混合研究

研究了强脉冲离子束(IPIB)对Ni/Ti和Al/Ti体系的混合效果,并与常规离子束混合进行了对比研究,表明IPIB辐照确实获得了比常规离子束辐照更厚的混合层,且混合效率远高于常规离子束。但对于不同的膜/基体体系,IPIB混合效果相差很大。这与膜和基体的热力学特性的差异相关。在IPIB辐照过程中,膜材料损失严重,特别是膜和基体的热力学特性差异大的样品损失更加严重。探讨了IPIB辐照不同于常规离子束混合的两种特殊混合机制以及膜材料损失的原因。     

重金属Cr6+对水稻幼苗的毒害效应

以含浓度为50 μmol·L-1、100 μmol·L-1、200 μmol·L-1 K2Cr2O7的Hoagland营养液培养杂交水稻"优I207"1叶龄幼苗10 d后,测定植株生长量、叶绿素含量、细胞膜透性、超氧化物岐化酶活性和过氧化物酶活性,以不含Cr6+的Hoagland培养液为对照.结果表明,随着Cr6+浓度的增加,植株的生长明显受到抑制,株高、根长、鲜重和干重均下降;植株叶片的叶绿素含量和SOD活性下降,POD活性先上升后下降,细胞膜透性大幅度增大.表明Cr6+的毒害导致体内保护酶活性受到抑制,膜系统受到伤害,从而影响水稻幼苗生长.     

人参煎剂对实验红鲫经137Cs辐射后肝肾组织HSP70表达量的影响

目的 研究137Cs辐射对实验红鲫肝肾组织HSP70表达的影响,并探讨人参煎剂对实验红鲫的辐射防护效应。方法 将实验红鲫随机分为8组,即空白对照组、人参对照组、4.1Gy辐照组、4.1Gy人参预防组、4.1Gy人参治疗组、8.2Gy辐照组、8.2Gy人参预防组及8.2Gy人参治疗组。分别以137Cs辐照处理,或辐照处理前以人参煎剂浸浴7 d做预防处理,或辐照处理后以人参煎剂浸浴7 d做治疗处理,然后分别采集实验红鲫肝脏和肾脏组织,利用Western blot方法检测各组HSP70表达量。结果 与空白对照组相比,经4.1Gy或8.2Gy辐照处理后的HSP70蛋白表达量均增加;与辐照组相比,经人参煎剂预防或治疗处理后的HSP70表达量均下降;单独的人参煎剂处理,对HSP70蛋白表达量无明显影响;比较人参煎剂做预防与治疗处理,发现两者之间的HSP70蛋白表达量差异不明显。结论 137Cs辐射能够引起实验红鲫肝脏和肾脏的HSP70表达量升高,再经人参煎剂预防或治疗处理后的HSP70表达量均下降。     

重金属Cr6+对水稻幼苗的毒害效应

以含浓度为50 μmol·L-1、100 μmol·L-1、200 μmol·L-1 K2Cr2O7的Hoagland营养液培养杂交水稻"优I207"1叶龄幼苗10 d后,测定植株生长量、叶绿素含量、细胞膜透性、超氧化物岐化酶活性和过氧化物酶活性,以不含Cr6+的Hoagland培养液为对照.结果表明,随着Cr6+浓度的增加,植株的生长明显受到抑制,株高、根长、鲜重和干重均下降;植株叶片的叶绿素含量和SOD活性下降,POD活性先上升后下降,细胞膜透性大幅度增大.表明Cr6+的毒害导致体内保护酶活性受到抑制,膜系统受到伤害,从而影响水稻幼苗生长.     

油菜秸秆还田对水稻根系及分蘖生长的影响

为明确油菜秸秆还田方式及用量对水稻根系和分蘖生长的动态影响,为油稻轮作系统的资源高效利用和可持续发展提供理论依据,以F优498为试验品种,于绵阳龙门采用裂区设计开展试验.结果表明,油菜秸秆还田量及移栽后天数对水稻根系及分蘖生长有显著或极显著影响,且油菜秸秆还田量与研究中各性状呈负相关.水稻根系及分蘖于试验前期(移栽后19 d前)生长较缓慢,试验后期(移栽后19 d之后)表现出快速增长,其中,1.5 t/hm2还田量增长率最大.翻埋还田处理于移栽后24 d有最小增长率(61.1%、74.8%、317.9%、140.4%),与覆盖处理的最大增长率(105.6%、119.7%、335.8%、118.6%)相近,而在试验前期覆盖处理根系与对照的差值较翻埋处理与对照的差值小.由此可以得出,水稻根系及分蘖在秸秆还田后,其生长在移栽后15 d前受到一定的抑制,且翻埋处理水稻根系及分蘖生长受抑制程度较覆盖处理更大,之后其能更早地利用秸秆来促进自身根系总量的生长.覆盖与翻埋还田处理下1.5 t/hm2还田量比较有利于水稻根系及分蘖生长.     

离子注入水稻的同工酶研究

研究离子束辐照水稻干种子对幼苗过氧化物酶（ＰＯＤ）和细胞色素氧化酶（ＣＯＤ）同工酶的影响。结果表明：根的ＰＯＤ同工酶和苗的ＣＯＤ同工酶谱带数量和酶活性均有变化,而苗的ＰＯＤ同工酶和根的ＣＯＤ同工酶仅表现为酶活性的变化。植物体中不同种同工酶和不同器官对离子束辐照的敏感性不同。     

all 1691基因表达及铁元素对鱼腥藻生长的影响

为实现FurA的表达,探究铁元素对藻生长的影响,首先运用Primer5.0设计引物,克隆出鱼腥藻PCC7120染色体上all1691(furA)基因片段;构建含组氨酸融合表达标签和T7启动子标签的表达载体.IPTG诱导FurA蛋白表达.然后设计不同Fe3+浓度梯度培养基,利用SDS-PAGE检测高、中、低Fe3+浓度培养液的藻细胞总蛋白,考马斯亮蓝g-250法测定蛋白含量,并用Trizol法提取不同Fe3+浓度培养的藻细胞总RNA.结果表明,获得纯化的all 1691克隆片段,大小为456bp,pET-1691重组蛋白在1mmol/L的IPTG诱导下,于37℃下摇床培养15h得到成功表达;低浓度Fe3+促进藻生长,高浓度Fe3+抑制藻生长;Fe3+浓度为2.0mg/L时rRNA位置与亮度清晰可见,而缺铁培养的藻生长几乎停滞,转录和翻译水平都很低.     

氮离子注入纤维素酶产生菌的诱变效应研究

作为一种新型的生物诱变手段,离子注入技术以其独特的诱变机理和显著的生物学效应受到关注,被广泛地应用于植物、微生物育种和转基因.本文应用低能离子注入技术对纤维素酶产生菌里氏木霉(Trichoderma reesei)进行诱变选育,研究低能N+注入对其存活率、菌体总抗氧化能力(T-AOC)、蛋白质含量以及产酶能力的影响.结果表明,低能N+注入对T.reesei的诱变效应显著,T.reesei经N+离子注入后存活率曲线呈现"双马鞍型",而菌体注量-总抗氧化能力曲线与注量-存活率曲线呈现一致的变化趋势.由此推测,离子注入微生物所诱导的总抗氧化能力的强弱变化很有可能决定微生物的存活情况.在注入剂量为250×1014N+/cm2的条件下得到突变幅度提高最多的菌株,CMCA活力较对照增加了24.3%.     

离子注入引起植物变异的研究

对玉米、水稻、大豆、大麦、黑麦、小麦、三色堇、矮牵牛等植物的种子进行离子束辐照处理,在被处理当代种子中,发芽率、生长速度、植株株型等方面均出现了变异,不同作物表现的变异程度及变异类型不同,不同品种间也有差异。对染色体行为观察,发现有丝分裂基本正常,减数分裂出现异常。玉米中有单价体和多价体,大豆中有落后染色体,水稻中有微核仁等现象。对离子束作为诱变源的研究现状、特点及前景进行了讨论。     

脑源性神经营养因子前体对海马神经元发育的影响

目的:通过体外培养海马神经元,给予抗proBDNF血清,观察其对体外海马神经元发育及存活的影响。方法:取新生0~1h的SD大鼠海马组织,体外培养神经元,给予抗pr0BDNF羊血清处理进行形态学观察,通过细胞免疫组织化学方法观察。结果:体外培养的海马神经元生长有明显的阶段性。给予抗pr0BDNF处理后,其表达量与神经元生长状态、存活细胞数成正比。培养Id组的表达水平高于3d、7d组,差值具有统计学意义。结论:给予外源性抗pr0BDNF羊血清处理后,体外培养的海马神经元生长状态良好且突起数目增多,提示内源性的proBDNF抑制神经元的发育,促进凋亡,给予外源性抗体后,减弱其生物学作用,神经元发育抑制因素减弱,存活细胞数、突起数增多。