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1.
利用枯草杆菌整合表达嗜铬粒蛋白抗真菌片段   总被引:4,自引:0,他引:4  
为实现CGA1-76片段基因在枯草杆菌中的稳定表达,将CGA1-76片段基因的表达元件重组到枯草杆菌转座子质粒pHV1249微转座子mini-Tn10内,利用mini-Tn10将CGA1-76片段基因的表达元件整合到枯草杆菌DB1342染色体上,用氯霉素和红霉素筛选枯草杆菌转座工程菌DB1342(TnSVTQ).DB1342(TnSVTQ)在无选择压力条件下经10 d连续传代培养,转座子内氯霉素抗性丢失率为0%,说明转座子稳定整合在DB1342染色体上.SDS-PAGE和免疫印迹分析结果表明,在蔗糖诱导下,CGA1-76片段基因在DB1342(TnSVTQ)中获得表达,产物被分泌到细胞外.孔穴琼脂扩散法测定表达上清的抑制真菌活性,结果表明重组CGA1-76能抑制烟曲霉菌和黄曲霉菌的生长,抑菌圈直径分别为9 mm和8 mm.  相似文献   
2.
采用PCR技术从人胎脑cDNA库中扩增了人内皮细胞抑制素基因。经DNA序列分析后将扩增的基因克隆至酵母载体pPICgK,获得的重组质粒pPIC9K-EDN转化毕节酵母GSll5,构建表达内皮细胞抑制素的酵母工程菌P.pastoris GSll5(pPIC9K-EDN)。SDS-PAGE分析结果显示:人内皮细胞抑制素在重组酵母GSll5(pPIC9K-EDN)中获得高效表达。用30L发酵罐构对建的工程菌进行高密度发酵,经甲醇诱导48h,生物量达到250OD,分泌量为150mg/L,发酵液经SP Streamline,SP Sepharose FF阳离子交换柱和SephamseHeparin Hi Trap柱纯化,产物纯度达到98%。纯化产物具有免疫活性并能抑制bFGF诱导的鸡胚绒毛尿囊膜血管生成。  相似文献   
3.
报道了波氏假丝酵母(Candida boidinii)启动子的克隆,将克隆的启动子与Neo^ 基因重组构建了含Neo^r基因的表达载体YepNP181,转化波氏假丝酵母,实现了Neo^r基因在波氏假丝酵母中的表达,使波氏假丝酵母转化子能在含G418的抗性培养基上生长从而建立了Neo^r基因-G418选择系统,为外源基因在波氏假丝酵母中表达创造了条件。  相似文献   
4.
ADK基因在酿酒酵母中的表达和ATP合成研究   总被引:1,自引:0,他引:1  
采用基因工程技术,将催化ATP合成的酶-ADK的基因克隆进表达载体YEpN181P2获得重组质粒YEpN-ADK,转化酿酒酵母GRF18后,ADK基因获得表达。用重组菌株GRF18(YEpN_ADK)发酵合成ATP其产率比对照菌株GRF18提高75%。  相似文献   
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