ECHS1抑制IFNa诱导的STAT3转录活性

烯脂酰辅酶A水解酶 (Enoyl-CoA Hydratase short chain 1,ECHS1), 是一种脂肪酸代谢过程中的关键酶,关于其功能研究甚少。本研究采用双荧光报告系统和Western blot等方法,分别干涉和过表达ECHS1,分析ECHS1对IFNa刺激下STAT3转录活性的影响,结果显示ECHS1能够显著抑制IFNa诱导的STST3的转录活性,提示该基因可能参与STAT3相关功能的调控。     

CUEDC1抑制TNFα激活的AP-1的转录活性

为了研究CUEDC1蛋白质是否参与了AP-1信号通路,首先在真核细胞中成功表达了Flag-CUEDC1蛋白质,通过双荧光报告系统,研究了CUEDC1对AP-1信号通路的影响.结果显示,过表达CUEDC1能够显著抑制TNFα激活的AP-1转录活性,而对IFNα激活STAT3的转录活性没有影响,并且CUEDC1抑制AP-1转录活性影响是发生在TRAF2分子或者上游水平.     

CUEDC1抑制TNFalpha激活的AP-1的转录活性

为了研究CUEDC1蛋白质是否参与了AP—1信号通路,首先在真核细胞中成功表达了Flag—CUEDC1蛋白质,通过双荧光报告系统,研究了CUEDC1对AP—1信号通路的影响。结果显示,过表达CUEDC1能够显著抑制TNFα激活的AP—1转录活性,而对IFNα激活STAT3的转录活性没有影响,并且CUEDC1抑制AP—1转录活性影响是发生在TRAF2分子或者上游水平。     

PIAS3与转录调控的研究进展

PIAS3（ protein inhibitor of activated STAT3）是PIAS蛋白家族中的一员,此蛋白家族最初是作为活化的STAT的转录活性抑制蛋白被发现的.PIAS3具有特殊的功能和结构域,因此影响了许多转录因子的活性.随着对PIAS3研究的增多,更多的PIAS3对转录因子的作用机制被发现.现对PIAS3的转录调控方面的研究进展做一综述.     

CUEDC1的克隆表达及其对PRB和ERα转录活性的影响

为了研究CUE Domain Containing 1 (CUEDC1)蛋白质功能,构建了pcDNA3.0-Flag-CUEDC1表达载体,并且成功表达Flag-CUEDC1蛋白质.通过双荧光报告系统,对比CUEDC1与CUEDC2对PRB和ERα转录活性的影响.其结果显示,CUEDC2能够抑制PRB和ERα转录活性,而CUEDC1对PRB和ERα转录活性的影响不显著.     

致病性不同的两种流感病毒NS1蛋白对人源细胞IFN-β转录抑制的比较

A型流感病毒编码的NS1蛋白是病毒关键的致病因子,可以通过多种机制拮抗宿主抗病毒反应.病毒感染过程中,NS1通过抑制NF-κB和IRF3两种转录因子的活性,下调IFN-β转录水平以阻断其诱导的信号通路.实验选取病毒母本致病性不同的两种NS1蛋白(NS1-a,NS1-h),通过RT-PCR、报告基因和VSV病毒滴度等实验证明高致病性禽流感病毒NS1-a与普通人流感病毒NS1-h相比,表现出较强的抑制IFN-β转录能力,并有效帮助VSV病毒复制.此差异源于NS1-a更加有效抑制NF-κB活性以及IRF3激活后的入核行为,与IFN诱导的ISG转录无关.所得结果为阐释流感病毒致病性与NS1的密切关系提供线索.     

siRNA干扰p38α上调人血管eNOS基因启动子转录活性

目的:通过靶向 p38α的siRNA干扰人血管内皮细胞的 p38α信号通路,探索其对血管内皮型一氧化氮合酶(eNOS)基因启动子转录活性的调节作用.方法:利用 Western 印迹检测 siRNA-p38α干扰HUVEC-12细胞后 p38α蛋白的表达,确定 siRNA-p38α的最佳作用时间和浓度,然后通过双荧光素酶报告基因技术检测转染 siRNA-p38α后细胞裂解液的荧光强度,分析eNOS基因启动子的转录活性变化.结果:与对照组比较,siRNA-p38α干扰后 p38α蛋白表达明显减弱,而相应的 eNOS启动子转录活性上调, 以100 nmol/L 的 siRNA-p38α作用 48 h 的效果最佳.结论:siRNA干扰 p38α信号可上调人血管内皮细胞 eNOS基因的转录活性.     

CAV-1感染MDCK中各IFN及受体分子表达谱的差异

目的 分析犬肾细胞系(MDCK)感染犬腺病毒1型(CAV-1)后各种干扰素(IFN)亚型及其受体分子转录水平的表达情况。方法 建立犬 IFN-β、IFN-β 受体(IFNAR1)、IFN-λ1、IFN-λ1 受体(IFN-λ1R)、IFN-λ3 和 IFN-λ3 受 体(IFN-λ3R)的染料法定量PCR方法,分析了 MDCK在Poly I：C处理和接种CAV-1后细胞内各IFN及受体分子转录水平的相对含量。结果 正常MDCK细胞内存在较高含量的IFN-X3R且含量显著高于其他IFN及受体分子的 转录水平;用Poly I：C处理MDCK细胞24 h后,IFN-X1R、IFN-X3和IFN-X3R的表达量均显著性上调,而IFN-λ1R、IFN-λ3和IFN-λ3R几乎没变化;接种CAV-1后,IFN-α的含量急剧上升至6倍。结论 MDCK细胞存在不同水平浓度的 IFN分子及其受体转录产物,且在Poly I：C刺激和腺病毒感染时受体分子的表达谱不同。     

UBE2W抑制TNFα诱导的NF-κB转录活性

UBE2W(ubiquitin-conjugating enzyme E2W)是一新的泛素结合酶,关于其功能研究甚少。采用双荧光报告系统和Western blot等方法,分别干涉和过表达UBE2W,分析UBE2W对TNF(刺激下NF-(B转录活性的影响。结果显示UBE2W能够显著抑制TNFα诱导的NF-κB的转录活性,提示该基因可能参与NF-κB相关功能的调控。     

hUPF1的两个功能位点对调控ZNF268基因转录活性的影响

h UPF1是人类无义介导mRNA降解途径的关键因子,前期研究结果显示h UPF1能够调控ZNF268基因的转录活性.为研究h UPF1的两个功能位点对调控ZNF 268转录活性的影响,使用双荧光报告实验体系,在He La细胞中转染R1R-DE637AA、R1R-RR857AA或质粒组合,然后测量ZNF 268启动子报告质粒p GL3(-37/1234)和p GL3(589/760)的活性.结果显示h UPF1的任何一个功能位点缺失都导致ZNF 268转录活性下降.为排除内源性h UPF1对实验结果的影响,使用RNA干扰的方法降解内源性h UPF1,再转染R1R-DE637AA或R1R-RR857AA质粒.实验结果得到进一步证实.研究表明h UPF1的两个功能位点对调控ZNF 268基因的启动子活性都是必要的.     

不同亚型人SMYD3启动子转录活性比较

利用PCR方法克隆SMYD3两个亚型的启动子区域,并构建其荧光素酶报告质粒.转染COS-7细胞后,利用荧光素酶报告分析技术,对二者启动子的转录活性进行了检测和比较.结果显示:SMYD3亚型1启动子的转录活性要显著高于亚型2启动子,生物信息学分析提示其原因可能与含有转录因子E2F-1结合位点的串联重复序列有关.     

AWP1抑制TNFα诱导的NF-κB转录活性

AWP1含有A20样锌指蛋白结构域。在人乳腺文库中克隆了AWP1 cDNA序列。双荧光报告基因检测系统证明过表达AWP1抑制TNFα诱导的NF-κB转录激活,并且AWP1与TNFα受体复合物中的TRAF2、IKKγ存在外源相互作用,为AWP1抑制TNFα信号通路的机制研究提供线索。     

EWS抑制TRIF和IKKε激活的IRF3的转录活性

为了研究EWS蛋白质对IRF3转录活性的影响,以及EWS蛋白对IRF3信号通路的调节,在真核细胞293T中表达Flag-EWS蛋白质,通过双荧光报告系统研究EWS对TRIF和IKKε激活的IRF3转录活性的影响。结果显示Flag-EWS蛋白质能够在真核细胞293T中正确表达,过表达EWS能够抑制TRIF和IKKε激活的IRF3转录活性,而且能够直接抑制IRF3的转录活性。     

丹参酮ⅡA调控孕烷X受体的转录因子活性诱导肝细胞癌细胞对分子靶向药物索拉非尼耐受

旨在探索丹参酮ⅡA对孕烷X受体(pregnane X receptor,PXR),PXR转录因子活性的影响,确定丹参酮ⅡA诱导肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)细胞对分子靶向药物索拉非尼等耐受的分子机制。使用系列浓度梯度的丹参酮ⅡA处理HCC细胞系MHCC97-H细胞,检测丹参酮ⅡA对PXR转录因子活性以及PXR下游耐药基因表达的影响。同时在裸鼠中利用MHCC97-H细胞建立HCC肿瘤模型,对动物给予丹参酮ⅡA后,再使用分子靶向药物索拉非尼对动物进行抗肿瘤治疗,确定丹参酮ⅡA对索拉非尼抗肿瘤作用的影响。利用液相色谱-质谱联用技术(LC-MS/MS)检测丹参酮ⅡA对MHCC97-H细胞及肿瘤组织中索拉非尼代谢与清除速率(半衰期)的影响。结果显示,丹参酮ⅡA能够在HCC细胞中诱导PXR的转录因子活性、上调PXR下游耐药相关基因CYP3A4以及MDR-1的表达、加速分子靶向药物索拉非尼在HCC细胞中的代谢与清除作用,最终诱导HCC细胞对分子靶向药物索拉非尼的耐受。这表明,丹参酮ⅡA调控孕烷X受体的转录因子活性诱导肝细胞癌细胞对索拉非尼耐受。     

Pax5启动子的克隆及其在人淋巴瘤细胞系HL-60中转录因子的确定

克隆Pax5基因的启动子,插入荧光素酶报告基因载体中,并检测其活性;采用PCR技术从人淋巴瘤细胞系HL-60基因组中扩增出Pax5启动子,插入荧光素酶报告基因载体pGL3-basic中,确定所扩增的DNA序列,在293T细胞中检测其活性;测序结果表明扩增的Pax5启动子序列正确,活性实验表明构建的报告基因具有启动子活性,转录因子SP1和Runx1能以剂量依赖的方式提高Pax5报告基因的转录活性;克隆了Pax5启动子,并发现转录因子SP1和Runx1能够调控Pax5的转录。     

人CSNK1A1基因两种转录变异体CK1αLS与CK1αS在细胞株中的表达

目的:分析CSNK1A1基因两种转录变异体CK1αLS和CK1αS在人正常细胞株和人肿瘤细胞株中的表达及在肿瘤发生发展中的作用.方法:RT-PCR法半定量检测不同细胞株中CSNK1A1基因的CK1αLS与CK1αS的mRNA表达水平.结果:36个细胞株中有32个细胞株存在CK1αLS与CK1αS的表达差异.在胚肾细胞2...     

CUEDC1氨基酸保守性分析及抑制TGF-beta /Smad转录活性

为了分析CUEDC1氨基酸保守性和研究CUEDC1蛋白质影响TGF-beta/SMAD信号通路的转录活性,用软件分析比较CUEDC1的氨基酸序列和通过双荧光报告系统测定TGF-beta/SMAD转录活性。结果显示cue结构域在人、小鼠和大鼠之间相似性为100%和过表达CUEDC1能够抑制TGF-beta/SMAD转录活性。     

HMG单一成分对转录活性的影响

使用北京鸭嗜多染红细胞核和DNA的转录体系测定了HMG单一成分和组合成分对转录活性的影响。结果表明,HMG_1+HMG_(2a)+HMG_(2b)抑制核转录的活性,而单一的HMG_1或HMG_(2a)或HMG_(2b)没有这种抑制作用。在DNA转录体系中,DNA的转录活性可被单一的HMG_(2a)或HMG_(2b)所抑制。HMG_(14)或HMG_(17)对核和DNA的转录都没有明显的影响,但是在核转录体系中,HMG_(14)+HMG_(17)在加样量为20μg时有明显的促进作用。     

重组人干扰素α2a和胸腺肽α1融合蛋白的分子设计及其基因表达产物的鉴定

人干扰素α_2a（IFNα_2a）和胸腺肽α₁（THYα₁）联合使用效果远大于各自单独使用的效果，本文通过DNA重组技术将两者构建成一个融合蛋白药物。首先，依据IFNα_2a和THYα₁的分子结构，设计了一个连接肽，将IFNα_2a和THYα₁相连，并分别位于该融合蛋白的N端和C端。在此基础上，构建出表达载体pCJ101质粒，获得的阳性克隆307在2×YT培养基小试中，产物变性复性后经DEAE-Sepharose柱层析纯化后，在SDS-PAGE上得到相对分子质量为23000的谱带。经鉴定，融合蛋白中干扰素α_2a的比酶活性为1.34mol/s·g；检测胸腺肽α₁的活性，显示活性E玫瑰花结形成率达到20%。结果表明，融合蛋白中两种药物蛋白均较好地保持各自的生物功能，为继续研究奠定了良好基础。