小鼠肺腺癌高、低转移潜能亚系（C_6／C_7）生物学特性的比较

利用小鼠肺腺癌高、低转移潜能亚系（Ｃ６／Ｃ７）细胞，在体外对其细胞移动性、粘连性、细胞骨架以及内源性非特异性酯酶的表达进行比较。结果小鼠肺腺癌高、低转移潜能亚系（Ｃ６／Ｃ７）细胞体内转移能力与其体外移动性、粘连性呈负相关；与其细胞胞浆骨架网络分布不均、紊乱，常纠集于胞核一侧以及细胞内非特异性酯酶的高表达里正相关。提示：癌细胞体内转移能力与其体外移动性、粘连性不一定相互平行：癌细胞浆骨架分布不均、紊乱，尤其常纠集于胞核一侧的现象，以及内源性非特异性酯酶的高表达，很可能是高转移性癌细胞的重要生物学表型。     

乌三颗粒抗肺癌细胞的实验研究

目的探讨乌三颗粒抗肿瘤作用.方法 (1)采用药效学体内实验及体外细胞培养实验相结合,观察了本方药在体内对小鼠移植性Lewis肺癌抑制率的影响和在体外3H-TdR掺入对人巨细胞肺癌株(A-2)瘤细胞的生长抑制作用;(2)观察了本方药对PHA诱导小鼠淋巴细胞转化的影响.结果乌三颗粒在8.1～16.2 g/kg的剂量下,体内对Lewis肺癌荷瘤小鼠的肿瘤有明显抑制作用,其抑制率为40%～57%,与对照组比较P＜0.05.在体外0.5～8 mg/ml的剂量,对人巨细胞肺癌株(A-2)表现出较好的生长抑制作用(P＜0.01);同时能显著提高小鼠淋巴细胞转化率(P＜0.05～0.01).结论乌三颗粒对体内、外肺癌有一定的抑制作用,同时能增强小鼠免疫功能.这为扶正化瘀中药治疗恶性肿瘤提供了一定实验依据.     

小鼠肺腺癌高,低转移潜能亚系（C6／C7）生物学特性的…

利用小鼠肺腺癌高、低转移潜能亚系（Ｃ６／Ｃ７）细胞，在体外对其细胞移动性、粘连性、细胞骨架以及内源性非特异性酯酶的表达进行比较。结果小鼠肺腺癌高、低转移潜能亚系（Ｃ６／Ｃ７）细胞体内转移能力与其体外移动性、粘连性呈负相关；与其细胞胞浆骨架网络分布不均、紊乱，常纠集于胞核一侧以及细胞内非特异性酯酶的高达呈正相关。     

一个肺癌相关新基因ASPH6功能的初步研究

为了探讨ASPH6在肺癌发生和发展中的生物学作用,构建了ASPH6真核表达载体,分别转染了2株肺腺癌细胞系LTEP-a-2和NCI-H1299,经G418筛选后获得了稳定的克隆细胞株.体外实验结果显示,表达ASPH6的肺癌细胞与对照空载细胞相比,细胞的迁移和浸润能力明显下降,但细胞的生长无明显改变.动物体内实验性转移结果显示,高表达ASPH6可明显抑制肺癌细胞的转移能力.进一步通过蛋白质组学方法,筛选并鉴定出14个ASPH表达调控蛋白.因此推测,ASPH6很可能是一个在肺癌发生和发展中起负调控作用的基因.     

艾氏腹水瘤细胞有丝分裂过程的显微观察

给小鼠腹腔注射艾氏腹水瘤瘤株，1wk后，抽取腹水细胞，经HE染色制成切片来观察动物细胞的有丝分裂过程及中期染色体形态．此法利用腹水型肿瘤细胞生长快、个体体积大、分裂相多且细胞间无粘连的特点，操作简单，结果明显，是一种新型的观察动物细胞有丝分裂过程的实验方法．     

LNT对视神经损伤后RGC保护作用的实验研究

目的：观察家兔视神经损伤后视网膜节细胞（RGC）的凋亡及视网膜内超氧化物歧化酶（SOD）活性变化,探讨香菇多糖对RGC的保护作用。方法：在家兔视神经损伤后1d、4d、7d、14d,分别用Tunel及生化法检测RGC的凋亡及SOD活性变化情况。设立正常对照组,实验损伤组,损伤对照组,损伤治疗组进行比较研究。结果RGC损伤1d即出现凋亡细胞,且逐渐增多,3天增加速度最快,7天达高峰,14天凋亡细胞减少;损伤后1d,SOD活性明显下降,之后逐渐增强,到14d恢复到正常范围。实验损伤组与损伤对照组比较差异具有显著性。结论：家兔视神经损伤后,玻璃体腔内注射香菇多糖（LNT）可减少RGC凋亡,其机制可能与早期玻璃体腔内注射香菇多糖增强了视网膜SOD活性有关。     

茶硝香酰胺对高转移性Lewis肺癌细胞侵袭和转移的抑制作用

本文旨在从动物体内外、细胞和分子水平上研究探讨茶硝香酰胺(TNC)对高侵袭和高转移性Lewis肺癌(LLC)细胞系侵袭和转移能力的影响.使用Transwell法观察TNC对LLC细胞侵袭能力的抑制作用;建立肿瘤转移动物模型,评估TNC对小鼠LLC细胞肺癌转移的抑制效果;以Western Blotting为检测手段,分析TNC对LLC细胞中相关蛋白表达的影响.实验结果表明,TNC药物浓度与LLC细胞侵袭和转移能力受到的抑制效果成正相关,抑制效果随浓度增大而增强;TNC能下调VEGFR1、VEGFR2、AKT、磷酸化AKT(p AKT)、RELA和MMP9蛋白的表达,并能上调E-cadherin蛋白的表达.分析实验结果可知,TNC能够明显抑制LLC细胞的侵袭,对小鼠体内LLC肺癌的转移同样有显著的抑制作用,从分子水平上,其作用机制与VEGFR介导的AKT/NF-κB信号传导通路有关,TNC有成为抑制高侵袭和高转移肺癌临床治疗药物或者辅助治疗药物的潜力.     

免疫缺陷动物在肿瘤细胞侵袭研究中的应用

近10余年来利用免疫缺陷动物从不同角度进行了人类瘤细胞侵袭性的观察。共进行了以下几个方面的工作:(1)侵袭模型的建立:共建立了6个体内侵袭模型(包括背侧皮下,肌肉内,腹腔内,肾包膜下,睾丸包膜下和爪垫皮下等移植侵袭模型),不同模型具有不同用途。这6种侵袭模型均可作侵袭力的比较研究。(2)侵袭和转移之间关系的观察;利用爪垫皮下和睾丸包膜下移植侵袭模型,以不同时间截肢(切除局部肿瘤),待动物存活到最终时间和不同时间处死动物,观察局部肿瘤侵袭程度和转移出现时间的关系。初步证明局部肿瘤侵袭发展到Ⅲ级侵袭以上时方出现转移,侵袭Ⅲ级是危险期,这个结果对临床肿瘤病人手术时机的选择有重要参考价值。(3)对瘤细胞侵袭程度的定量分析做了初步观察,为今后深入研究侵袭定量打下了基础。(4)瘤细胞侵袭性和器官微环境关系的观察,初步证明了肿瘤细胞侵袭性和转移一样,也具有器官特异性。(5)同时也证明了瘤细胞侵袭的表达与移植方式的关系,找出了对瘤细胞侵袭最敏感的部位和器官,如肾包膜下和腹腔内为敏感的部位;背侧部皮下为不敏感的部位。因此鉴定一个肿瘤是否具有侵袭性,其侵袭程度如何,就不能仅用一个部位和器官。本文总结了近10余年的初步结果,提出了一些待深入研究的问题,这为今后深入研究人类肿瘤细胞侵袭机制和实验治疗,建立了良好的基础和条件。     

LAK细胞裸鼠体内抗实验性转移研究

利用裸鼠循环系统为实验体系,建立高转移性癌细胞实验转移模型。在此基础上,将体外经白细胞介素2活化的人LAK细胞与高转移性癌细胞同时注射于裸鼠尾静脉内;将未经活化的淋巴细胞与癌细胞一同注射,作为对照,观察LAK细胞抗实验性转移作用。结果表明,每只接受3×10~7 个LAK细胞与1×10~6 个肿瘤细胞的实验组5只小鼠,注射细胞后全部健康存活,无一生长肿瘤。而接受与实验组相同数量的淋巴细胞与肿瘤细胞的对照组5只小鼠,分别于注射后第五周在皮下、脊柱旁及肺脏内出现转移瘤生长。说明LAK细胞不仅在体外具有明显的抗肿瘤作用,在裸鼠内也能够抑制高转移癌系实验性转移的发生。     

PTTG基因对人垂体瘤细胞侵袭能力的影响

目的：本研究的目的在于PITG基因过表达及沉默对人垂体瘤细胞侵袭力的影响,探讨其与垂体瘤细胞侵袭性的关系及调控机制。方法：用脂质体转染携带PTTG基因的表达质粒,构建过表达PTTG基因的垂体细胞株,观察细胞形态。另外我们运用脂质体转染PITGsiRNA对垂体瘤中的PITG基因进行干扰;利用Western blot技术检测其基沉默效应;通过Transwell小室法测定垂体瘤细胞侵袭能力的改变。结果：转染PITG siRNA后,垂体瘤细胞中PTIG的mRNA转录和蛋白表达受抑,显著低于未经处理的垂体瘤细胞（P〈0.01）。利用PTTGsiRNA对PTTG进行RNA干扰后,垂体瘤细胞的侵袭能力下降。结论：（1）在正常垂体细胞中过表达PTTG基因也可以引起细胞癌变,增强侵袭能力。（2）设计的PTTG siRNA能有效抑制体外培养垂体瘤细胞中PTTG的mRNA转录和蛋白表达水平,实现其基因沉默效应。PTTG与人垂体瘤的侵袭能力密切相关,其表达水平下降导致细侵袭能力降低。     

SIOC-AA-005的抗肿瘤活性研究

观察SIOC-AA-005体外及体内抗肿瘤活性，通过MTT法和集落形成法观察SIOC-AA-005在体外的抗肿瘤活性，利用^3H-标记前体掺入法检测生物大分子的合成．利用小鼠移植瘤模型观察了SIOC-AA-005在体内的抗肿瘤活性．SIOC-AA-005对人结肠腺癌HT-29细胞的IC50为18．7nmoL／L，比对人胚肺成纤维细胞HELF的IC50低1000多倍，这一结果与集落形成和细胞生长曲线结果一致．SIOC-AA-005对HT-29细胞的DNA、RNA以及蛋白质合成均有抑制作用,SIOC-AA-005在10mg／kg剂量下对小鼠Lewis肺癌的抑制率为30．5％，在5mg／kg，10mg／kg和20mg／kg剂量下对小鼠肝癌H22的抑制率分别为37．6％、40．0％、47．2％，表现出良好的剂量效应关系,SIOC-AA-005在体外、体内均显示了较好的肿癌生长抑制作用，是一个有前景的抗肿癌化合物。     

利用miR-17的腺病毒载体抑制肺癌细胞系增殖

miR-17是肺癌的新型调节因子,有可能在肺癌发生和进展中发挥作用,但其功能尚不完全清楚。构建miR-17的腺病毒表达载体,检测miR-17对A549细胞体外增殖、锚定非依赖性生长、侵袭和转移的调控作用。利用miR-17的腺病毒载体(Ad-miR-17)在A549细胞中过表达miR-17后,使用MTT实验检测miR-17对NSCLC细胞系A549增殖作用的影响;软琼脂成集落实验检测miR-17对A549细胞锚定非依赖性生长的作用,使用Trans-well实验检测A549细胞的体外侵袭/转移作用(in vitro invasion/in vitro migration);在此基础上共转染miR-17的inhibitor确定miR-17作用的特异性。结果表明,miR-17能够显著下调A549细胞的增殖、锚定非依赖性生长、体外侵袭/转移作用;共转染miR-17的inhibitor能够阻断miR-17的作用。     

AS-mCLB1重组质粒联合多西紫杉醇抗Lewis肺癌细胞增殖活性的研究

pAS-mCLB1转染Lewis肺癌(LL/2)细胞72 h后,再加用多西紫杉醇(40 nmol/L)处理细胞,MTT法测定药物对LL/2细胞的体外杀伤作用.另将LL/2细胞接种C57BL/6小鼠,成瘤后分别用pAS-mCLB1、多西紫杉醇和pAS-mCLB1+多西紫杉醇处理动物,3天1次,共4次,观察肿瘤体内增殖情况,流式细胞仪检测动物肿瘤组织的细胞凋亡.结果显示：pAS-mCLB1联合多西紫杉醇可明显降低LL/2细胞体内、外增殖活性,同时促使肿瘤组织中细胞凋亡增加,两种方法具有协同作用.pAS-mCLB1显著增强多西紫杉醇抗肿瘤效应,此增强作用可能与pAS-mCLB1诱导肿瘤细胞凋亡,提高了多西紫杉醇的细胞毒作用有关.     

Transwell法检测细胞侵袭迁移能力实验中的影响因素

对常用于检测细胞侵袭迁移能力的Transwell检测方法进行分析总结,旨在提高Transwell方法检测细胞侵袭迁移能力的一致性与稳定性。以肺癌细胞为例,对Transwell检测细胞侵袭能力中常遇到的部分细节问题进行分析,对实验中的影响因素提出应对策略,给予相应解决方案。实验发现,在Tranwell实验中,细胞种类、Transwell孔径、基质胶浓度、细胞接种数量、染色等细节问题均为该实验的关键点;并根据分析得到细胞侵袭及迁移实验中关键的影响因素,提出应对方案,可以有效提高实验结果重复性及稳定性。     

卵母细胞老化对小鼠体细胞克隆胚发育的影响

就小鼠卵母细胞的卵龄对克隆胚的体外发育能力的影响进行了检测,以确定最佳的取卵时间,以及取卵后进行核移植操作的可耐受的时间。采用PMSG和hCG超排B6D2F1雌鼠。在体内老化实验中,分别于注射hCG后13,15,17,20h取卵用于核移植操作;在体外老化实验中,所有的卵均于注射hCG后13h取出并培养,然后在13,15,17,20h进行核移植操作。每个时间点的核移植操作在1h内完成,重构的胚胎培养1h后进行激活。结果显示:在体内老化实验中,注射hCG后13h取卵,获得的克隆囊胚发育率最高,为56.0%,15h取卵仍维持了其支持胚胎体外发育的能力,但17h及更长时间后取的卵,重构后的囊胚发育率显著下降(18.1%)。注射hCG后15h取的卵孤雌发育率最高(囊胚发育率为90.1%),并在17h仍维持较高的孤雌发育能力,在20h显著下降。在体外老化试验中,于注射hCG后13h取卵,分别于13,15,17h重构,都获得了较高的囊胚发育率(分别为57.7%,52.2%,46.3%),而在注射hCG后20h重构,囊胚发育率显著下降(14.8%)。体外老化的孤雌胚在注射hCG后22h激活时囊胚发育率显著下降。结果表明:卵母细胞在体内和体外老化都影响克隆胚的体外发育,最佳取卵时间为注射hCG后13h,取卵后立即用于重构可获得最佳囊胚发育率;体内、外老化卵支持重构胚较好发育的时间间隔是不同的,体内老化卵支持重构胚发育能力从注射hCG后17h开始下降,体外老化卵则发生在20h。这些结果可以指导操作,有利于在应用核移植进行其他基础研究时降低操作引起的误差。     

诱导MSCs转分化为视网膜神经样细胞的应用

近年来,人们研究发现骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)在体外可经生长因子诱导,抗氧化剂诱导,中药诱导,增加细胞内cAMP等不同途径的诱导方法,分化为神经外胚层来源的神经元及神经胶质细胞,因此一些研究者尝试以上诱导途径使MSCs分化为视网膜神经样细胞,用于体内相关疾病的细胞替代治疗,为多种疾病带来了新的治疗思路。     

SO-Rb_(50)细胞系裸鼠移植瘤实验研究

利用l988年建立的人视网膜母细胞瘤细胞系—SO-Rb_(50),作裸鼠移植瘤的实验研究。在手术显微镜下,用微量注射器吸取SO-Rb_(50)的细胞悬浮液0.45—0.5μl,含细胞数1.5—2.5×10~7个,注入裸鼠眼前房内。共注射7只裸鼠的右眼,左眼为对照。实验眼于注射后第3天瞳孔区即出现肉眼可见到的灰白色混蚀,以后逐日增多,或在前房,或进入玻璃体内。约于注射后第7周出现右眼球突出,逐渐加剧。长期观察的实验鼠左眼也逐渐丧失视力,最后小鼠衰竭死亡。病理检查见典型的视网膜母细胞瘤细胞充满眼球腔,伴有不同程度变性坏死,部分眼内移植瘤瘤细胞呈菊形团样结构。肿瘤侵入眼球各层组织,破坏眼球壁扩展至眼眶内。长期观察的实验鼠肿瘤细胞除侵犯视乳头、视神经外,可沿着视神经侵犯视交叉等。另外,将SO-Rb_(50)的细胞悬浮液0.5ml,含细胞1×10~8 个,注入7只裸鼠右颈背部皮下,只有1只于注射后第4周长出皮下移植瘤,其余6只观察50~90天均未出现肿瘤。可见SO-Rb_(50)细胞接种于眼前房内比接种于皮下更易形成移植瘤。移植瘤的组织学及免疫组织化学检查,与人类视网膜母细胞瘤相一致。     

不同浓度XZ对大鼠实验性葡萄膜炎的影响观察

目的:观察不同浓度XZ对实验性自身免疫性葡萄膜炎模型(Experimental Autoimmune Uveitis,EAU)Lewis大鼠的炎症影响。方法:用视网膜s抗原与完全弗氏佐剂于Lewis大鼠双后足垫、双后腿及背部皮下注射,行第一次免疫,第7天同法行二次免疫,第8天以伤寒杆菌内毒素于大鼠睫状体平坦部进针行玻璃体腔注射,以建立改良EAU模型。随机分为正常组、模型组、XZ实验组(6mg/kg;12mg/kg)、地塞米松阳性对照组(10mg/kg),每组8只。于第9天起灌胃给药,每日1次,连续11天。隔天用裂隙灯显微镜观察EAU大鼠右眼临床表现,分别于炎症高峰期和恢复期即第12、20天处死大鼠,制备鼠眼HE组织切片,观察视网膜组织结构改变。结果:(1)临床表现评分显示,正常组表现如常,模型组于第7天起出现明显炎症反应,第10天达到高峰,第16天开始逐步消退;XZ实验组和地塞米松组大鼠眼部炎症反应较模型组明显减轻,与模型组比较差异有统计学意义(P0.05)。(2)HE染色显示,正常组视网膜组织结构清晰,各层排列整齐,未见炎性细胞浸润。模型组在炎症高峰期出现大量炎性渗出,炎性细胞浸润广泛,视网膜各层组织结构紊乱;XZ各组和地米组大鼠视网膜各层结构稍紊乱,视网膜上少量炎性细胞浸润,炎症反应较模型组明显减轻。结论:应用视网膜s抗原联合伤寒杆菌内毒素免疫Lewis大鼠,可成功建立Lewis大鼠葡萄膜炎模型。新型抗葡萄膜制剂XZ能有效减轻EAU大鼠葡萄膜炎症,可通过减轻Th1细胞和Th17细胞免疫反应发挥对实验性葡萄膜炎的治疗作用。     

海带多糖FGS体内外抗癌作用的研究

研究了一个海带多糖组分FGS对两株人癌细胞体外增殖和对荷瘤小鼠存活期的影响．MTT法检测显示FGS对人肺癌NKM和肝癌SMMC细胞体外增殖具有显著的抑制作用，IC50值分别为91和164μg／mL。并且对卡铂抑制NKM、SMMC癌细胞的增殖有增效作用；放射性同位素（3H）标记检测显示FGS剂量依赖性抑制该两株癌细胞生物大分子前体物TdR、UR和Leu的掺入，提示DNA、RNA和蛋白质合成受到FGS的抑制．体内实验显示FGS显著延长荷艾氏腹水瘤细胞小鼠的存活期．     

小鼠肺腺癌细胞系（LA－795）高、低转移潜能亚系的建立及其形态学比较

利用单细胞克隆化培养技术，对小鼠肺脓癌ＬＡ７９５细胞系进行单细胞克隆化培养，分离出８个亚系，体外培养３５代内生物学特性稳定，反复液氮冻存能复苏。将其中４个亚系细胞在裸鼠体内移植，结果命名为ＬＡ７９５－Ｃ６的细胞亚系较命名为ＬＡ７９５－Ｃ７的细胞亚系具有更大的肺转移能力，表明了母系确实存在转移潜能不同的异质细胞；将高、低转移潜能细胞体外培养，并进行形态学观察，发现高转移潜能细胞比低转移潜能细胞表现为更幼稚，且更具有生长活跃性的特点，说明高转移亚系ＬＡ７９５－Ｃ６和低转移亚系ＬＡ７９５－Ｃ７在体外培养存在着分化程度上的差异，且该肿瘤体内转移能力和体外培养细胞分化程度呈负相关。这提示体外培养的肿瘤细胞其分化程度和体内转移潜能有密切的矢系。