HEp-2细胞MPM-2磷蛋白的蛋白质组学分析

MPM-2磷蛋白家族成员在有丝分裂进程中起着重要作用．为了从MPM-2磷蛋白家族层面入手研究细胞周期调控中磷蛋白的重要作用，以人上皮样喉癌细胞株HEp-2为细胞模型，运用双向电泳、免疫印迹以及质谱技术等蛋白质组学的方法对其细胞抽提物中的部分MPM-2磷蛋白进行了分析鉴定，初步确定了乙二醛酶(GlyoxalaseⅠ)、真核翻译起始因子(eIF4B)以及核质蛋白NPM等MPM-2特异识别的细胞磷蛋白，这将有助于进一步研究MPM2磷蛋白家族成员在细胞周期调控中的重要作用．     

p14ARF高表达对γ射线诱导的人黑色素瘤细胞凋亡的影响

抑癌因子ARF可以激活p53诱导细胞周期的阻断或凋亡.为阐明ARF在促进细胞凋亡作用中的分子机理,建立了高表达p14~(ARF)的人黑色素瘤A375细胞模型.实验表明,p14~(ARF)高表达能促进p53富集在细胞核.经γ射线照射后,发现pI4~(ARF)高表达能促进A375细胞凋亡,促使Smac从线粒体释放到胞质中,p53,Bax,Caspase-3,Caspase-9,p21~(cipl)和p27~(kipl)蛋白水平明显提高,而Bcl-2和磷酸化的ERK蛋白水平下降.提示γ射线辐照下,p14~(ARF)促进A375细胞凋亡是ERK介入的依赖p53的以线粒体为核心的凋亡途径.     

环磷酰胺对小鼠酯酶同工酶的影响及寿胎丸的拮抗作用

用聚丙烯酰胺凝胶电泳的方法研究了雌、雄小鼠（昆明种）7种组织的酯酶（Est）同工酶的变异,环磷酰胺（CTX）对各组织Est同工酶的影响,以及寿胎丸（FPP）的拮抗作用,结果表明：1）各种组织间Est同工酶带型差异明显,并存在一定的性别差异;2）CTX可导致小鼠Est同工酶性显著变化,并且、雄小鼠间舌、脾及肌肉组织受CTX影响的差异显著;3）本研究中CTX造成的Est同工酶变化大都体现在酶的相对量（活性）上,没有发现新酶带的出现;4）FPP对CTX对Est同工酶的影响有十分明显的拮抗作用。     

PCBP1基因RNAi序列的鉴定及其干扰效应的初步研究

以能与PCBP1mRNA特异结合的核苷酸片段(21个碱基对)构建shRNA真核表达载体并稳定转染Hela细胞,通过半定量RT-PCR、免疫印迹和间接免疫荧光实验证实转染细胞中PCBP1的mRNA水平和蛋白质表达水平均被显著抑制.接着,本研究通过测定稳定转染Hela细胞的生长曲线、血清依赖性生长曲线和软琼脂集落形成率,证明PCBP1的沉默能够显著抑制细胞的生长增殖能力以及克隆形成潜能,揭示PCBP1可能直接或间接参与细胞周期的调控.本研究成功鉴定了沉默PCBP1基因表达的有效干扰片段,为下一步利用该有效干扰片段进行体内研究奠定了基础.同时,本研究的结果将有助于深入认识PCBP1蛋白在细胞周期调控和细胞癌变中的作用机制.     

p14ARF高表达对γ射线诱导的人黑色素瘤细胞凋亡的影响

抑癌因子ARF可以激活p53诱导细胞周期的阻断或凋亡. 为阐明ARF在促进细胞凋亡作用中的分子机理, 建立了高表达p14^ARF的人黑色素瘤A375细胞模型. 实验表明, p14^ARF高表达能促进p53富集在细胞核. 经 γ 射线照射后，发现p14^ARF高表达能促进A375细胞凋亡, 促使Smac从线粒体释放到胞质中, p53, Bax, Caspase-3, Caspase-9, p21^cip1和p27^kip1蛋白水平明显提高, 而Bcl-2和磷酸化的ERK蛋白水平下降. 提示γ 射线辐照下, p14^ARF促进A375细胞凋亡是ERK介入的依赖p53的以线粒体为核心的凋亡途径.     

一个肺癌相关新基因ASPH6功能的初步研究

为了探讨ASPH6在肺癌发生和发展中的生物学作用,构建了ASPH6真核表达载体,分别转染了2株肺腺癌细胞系LTEP-a-2和NCI-H1299,经G418筛选后获得了稳定的克隆细胞株.体外实验结果显示,表达ASPH6的肺癌细胞与对照空载细胞相比,细胞的迁移和浸润能力明显下降,但细胞的生长无明显改变.动物体内实验性转移结果显示,高表达ASPH6可明显抑制肺癌细胞的转移能力.进一步通过蛋白质组学方法,筛选并鉴定出14个ASPH表达调控蛋白.因此推测,ASPH6很可能是一个在肺癌发生和发展中起负调控作用的基因.     

差异蛋白质组学及其应用

蛋白质组学是后基因组研究中最主要的部分,其研究策略有2种:一种是"完全"蛋白质组学,目的是检测一种细胞类型或一种组织内基因组表达的所有蛋白质; 另一种是"差异"蛋白质组学,主要是筛选和鉴定不同种类或状态下各样本之间蛋白质组的区别与变化.着重介绍了差异蛋白质组学的特点、研究内容和应用前景,简要介绍了适用于差异蛋白质组学研究的相关技术和近期发展概况.     

反义CENP-B对HeLa (Tet-off)细胞增殖状况的影响

为了检测反义转染引起的细胞着丝粒蛋白CENP－B表达的变化情况，用原核表达的融合蛋白GST－CENP－B免疫Balb/c小鼠，制得抗CENP－B的鼠抗血清（MaCenpB）。转染了含有反义CENP－B表达载体pBI-EGFP-as-CenpB的HeLa-Tet-off细胞（HaCb），用Northern blot和Western blot研究了转染后细胞内源CENP－B基因表达的抑制情况，生长曲线表明，反义CENP－B抑制HeLa(Tet-off）细胞增殖，使倍增时间延长了32.8h流式细胞光度术分析表明，较之HeLa（Tet-off）细胞，HaCb的G1期比例增加（△G＝9％），S期比例减少（△S＝11％）。同时，有丝分裂指数（MI）大大降低；间接免疫荧光分析表明，HaCb的着丝粒组装受到抑制。这说明，CENP－B的正常表达对于细胞的增殖是必要的。