2种海绵移植块周年生长的观测

为了解决药源海绵的供给问题,促进活性产物的挖掘和筛选,针对福建近海2种海绵:叶片山海绵(Mycale phyllophila)和苔海绵(Tedania sp.)的周年生长率以及生长模式开展了系统研究,旨在为实现药源海绵的规模化移植提供必要的实践依据.采用原位尼龙绳挂养的方式,对随机挑选的各30株海绵,每月进行生长数据的测量,并对海区水温进行周年高密度记录.其中苔海绵的观察时间为2012年7月至2013年8月,叶片山海绵的观察时间为2013年6月至2014年4月.结果表明:叶片山海绵的生长率与水温变化显著相关(p0.05),在水温较高的6—9月生长迅速,长度增长率达到了(541.47±103.68)%,周长增长率达到了(53.76±87.03)%,其中周长增长率最高达到了229.63%;而随着水温的降低,其生长受到明显抑制,并且过低的水温导致其死亡.苔海绵周年生长较缓慢,周长年生长率仅为(23.37±28.17)%,受海水水温影响不显著(p0.05),在2013年8月出现最高周长生长率,增长率为93.88%;长度年增长率为(546.45±201.98)%,最大的个体长度增长率出现在8月,达到了956.11%.2种海绵的生长模式相似,均是优先覆盖尼龙绳等附着基的表面,之后才开始向着增加厚度的方向发展.根据实验结果,在海区逐步出现海绵的季节,海绵的移植应该选择在水温开始升高的4—5月,叶片山海绵采用固定在绳索上的移植方式,苔海绵则采用网兜移植的方式,有望获得较理想的移植效果.     

胜红蓟内生真菌转化柠檬烯产物的抑菌活性

为考察入侵植物胜红蓟内生真菌转化柠檬烯产物的抑菌活性,以柠檬烯二醇作为标品对照,采用薄层色谱法筛选具有转化柠檬烯能力的胜红蓟内生真菌.通过气相色谱-质谱法对菌株的转化产物进行分析,并对其生物转化柠檬烯发酵液乙酸乙酯粗提物的抑菌活性进行研究.从22株胜红蓟内生真菌中共筛选得到14株具有转化柠檬烯能力的菌株,其中,有6个菌株的柠檬烯转化乙酸乙酯粗提物中含有柠檬烯-1,2-二醇;菌株Diaporthe phaseolorum(wl01)的柠檬烯转化产物中,柠檬烯-1,2-二醇的质量浓度最高(3.43 mg·mL^-1);菌株Alternaria alternata(wp06)生物转化柠檬烯发酵液的乙酸乙酯提取物对柑橘意大利青霉类致病菌有一定的抑制效果,对意大利青霉的抑菌效果为(40.03±3.58)%.     

鹿血抗氧化活性肽分子量测定及其氨基酸组成分析

分离提纯了鹿血酶解产物中的抗氧化活性肽,并用高效液相色谱(HPLC)体积排阻法(SEC)测定分子量,分析其氨基酸组成.经SephadexG-25和DEAE-52柱层析纯化,得到了带有较弱负电荷的抗氧化活性肽.HPLC分析结果表明,该抗氧化活性肽为低分子量肽类物质,且是以相对分子量为876,463,146Da为主的小肽混合物.氨基酸组成分析表明,该肽所含17种氨基酸中以亮氨酸、赖氨酸和丙氨酸的质量分数较高,分别为17.2%、12.3%和12.1%,人体必需氨基酸(缬氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、蛋氨酸、苏氨酸、赖氨酸)的含量为52.7%.     

文蛤蛋白水解制备抗氧化活性肽的研究

以文蛤蛋白为原料,通过蛋白酶水解制备抗氧化活性肽.利用体外清除DPPH活性评价酶解产物的抗氧化活性,采用超滤、葡聚糖凝胶柱层析和HPLC对相应的活性肽进行分离纯化,通过HPLC-MS进行结构鉴定.结果表明:木瓜蛋白酶水解产物的DPPH清除活性明显高于碱性蛋白酶、风味蛋白酶、中性蛋白酶和复合蛋白酶,产物质量浓度为1 mg·mL-1时,DPPH清除率为55.74%;以DPPH清除率为筛选指标,对木瓜蛋白酶酶解产物进行逐级分离,得到4个具有抗氧化活性的目的肽段,氨基酸序列分别为LNFNLEKSR(1120.3 u)、SWLRPR(814.4 u)、RIGNIISQY(1063.3 u)和LNFNLEK(877.2 u).     

3种环境因素对叶片山海绵海区移植效果的影响

海绵动物是重要的药源生物,由于自然海区生物量较少,限制了它的开发以及应用,海绵的人工增殖被认为是最有效解决海绵药源供给的途径.本研究以福建沿海广泛分布的山海绵属(Mycale)的种类为研究对象进行了初步的海区增殖研究.叶片山海绵(Mycale phyllophila)属于寻常海绵纲(Demospongiae),繁骨海绵目(Poecilosclerida),山海绵科(Mycalidae),山海绵属.研究了养殖深度,海水流速,附着基大小等3种因素对叶片山海绵在自然海区生长速度的影响.结果显示,不同移植环境中叶片山海绵成活率均为100%,且都具有较快的生长速度.最快的生长速度出现在水深2.0m,流速较缓,附着基面积为75cm2的实验组,2个月平均增长率达472.1%.环境因子的多重方差分析结果显示,水深和水流对叶片山海绵的生长速度影响显著(p<0.05),较浅的水深、较缓的水流更有利于叶片山海绵的生长.叶片山海绵未全部覆盖附着基前,附着基的大小对叶片山海绵生长速度的影响不显著.     

海洋来源活性肽及其抗炎活性研究进展

海洋生物因为其特殊的栖息环境,蕴藏着极其丰富的天然产物,随着对海洋探索的不断发展,越来越多具有抗炎作用的天然产物被发现,其中活性肽类具有靶向性强、活性高、毒性低等特点,药物开发前景良好。本文综述了近几十年来具有抗炎活性的海洋来源活性肽的研究进展,为开发高效安全的抗炎药物提供借鉴。     

玉米源活性肽的分离纯化及清除DPPH自由基的活性

以脱脂醇溶蛋白为底物进行酶水解反应,获得了玉米源活性肽组分,经葡聚糖凝胶和离子交换等方法对产物进一步分离纯化.以α-生育酚为阳性对照,研究了活性肽及其分离纯化组分对2,2-二苯基-1-苦基苯肼(DPPH)自由基的清除活性及其浓度的关系.结果表明:活性肽及其分离纯化组分均具有清除DPPH自由基的活性;经CM-纤维素弱阳离子交换层析分离所得组分2对DPPH自由基的清除活性最强,且清除效果与其浓度及作用时间呈正相关,分子量主要集中在400～700.     

以组织工程技术构建活性双层人工皮肤

用冷冻干燥胶原凝胶方法制备胶原海绵,经戊二醛交联处理,作为活性双层人工皮肤的支架;以幼儿包皮为细胞来源获得真皮成纤维细胞和皮肤角质细胞,体外扩增后作为种子细胞;在胶原海绵上接种成纤维细胞和角质细胞,体外构建活性双层人工皮肤。研究结果表明,人工真皮内的成纤维细胞生长良好,并且有人纤粘连蛋白类生物活性物质存在,活性双层人工皮肤表皮层有类似干天然皮肤表皮层的组织结构。     

海绵共附生放线菌HNS054菌株的鉴定及发酵液抑菌活性研究

海绵共生微生物是海洋活性化合物的重要来源之一,从广泛分布于福建沿海的山海绵(Mycale sp.)中分离可培养共附生微生物,并对其进行抑菌活性筛选,发现能产生抑菌活性物质的微生物,寻找具有潜在应用价值的化合物.从分离的64株细菌和21株放线菌海绵共附生微生物中,筛选到一株具有强烈拮抗革兰氏阳性菌的放线菌菌株HNS054,结合其培养特性、生理生化指标测定、孢子形态学观察及16SrRNA基因序列,看家基因atpD、recA、rpoB和trpB多基因联合分析,初步鉴定该菌为Streptomyces labedae.对该菌活性产物抑菌效价进行分析,结果表明:发酵液粗提物(1mg/mL)的抑菌能力略低于四环素(1mg/mL)和氨苄青霉素(1mg/mL),同万古霉素(1mg/mL)和环丙沙星(1mg/mL)相当,高于链霉素(1mg/mL).该活性物质对温度敏感,最高耐受温度为60℃;活性物质在碱性条件下稳定,酸性条件(pH≤3)下失活,分子排阻层析所得物质经全波段扫描,发现它在230nm有较高的吸收值.研究结果将为后续活性物质的进一步分离纯化奠定基础.     

牛心朴子提取物对地红蝽毒杀活性的研究

以牛心朴子(Cynanchum komarovii)的水、无水乙醇和甲醇等3种溶剂的粗提物为材料,以地红蝽为测试对象,研究牛心朴子对刺吸式口器昆虫的毒杀作用.胃毒活性采用改进的药剂浸渍法,触杀活性采用微量点滴法.结果表明:(1)牛心朴子的3种粗提物对地红蝽均有较强的胃毒作用,其中,无水乙醇粗提物的毒杀效果最好,质量浓度为15 g/L时,72 h的校正死亡率达到73.3%;(2)在触杀实验中,甲醇粗提物的效果最好,质量浓度为15 g/L时,72 h的校正死亡率为83.3%,与无水乙醇粗提物触杀效果相差不大;(3)牛心朴子水粗提物的毒杀效果均低于其他2种提取物.     

叶片山海绵的滤水率及其影响因素的研究

叶片山海绵(Mycale phyllophila)在福建近海分布广泛,生长迅速,活性物质含量丰富,是新近发现的具有开发潜力的一种重要海洋药源生物.为了大面积推广养殖,寻找最佳养殖条件,本研究设计了四因素三水平的正交试验,以叶片山海绵的滤水率为指标,研究了温度、盐度、流速、饵料密度对叶片山海绵滤水率的影响,结果显示饵料密度、温度和流速对叶片山海绵滤水率有显著影响,盐度的影响不显著.在温度20℃,盐度22,流速为0.156m/s,饵料密度为20×104mL-1时叶片山海绵滤水率达到最高.海绵出现较高滤水率时,其所处的环境因子也就是较适宜的,此结果可应用于海绵的实验和生产养殖实践.     

处理因素对龙须菜藻红蛋白抗氧化活性的影响

比较多种细胞破碎方法、不同硫酸铵浓度对龙须菜藻红蛋白的提取、分离效果,探讨不同光照、温度、pH等处理条件对藻红蛋白粗提物抗氧化活性的影响.结果表明,采用组织捣碎破壁细胞,50%饱和度硫酸铵沉淀藻红蛋白提取效果较好;温度、光照和不适宜pH均会导致藻红蛋白粗提物清除.OH自由基能力降低甚至起促氧化作用.因此对龙须菜原料的保存、加工及藻红蛋白的提取分离等必须在低温、避光、中性环境下进行,以保证藻红蛋白的稳定性.     

黑鲷抗菌肽hepcidin在毕赤酵母中的表达及其抗菌活性

鱼类抗菌肽hepcidin具有广谱抗菌活性.利用PCR技术扩增获得了黑鲷抗菌肽hepcidin (AS-hepc2)的前体肽和成熟肽 cDNA 序列,片段大小约250 bp.将其与毕赤酵母(Pichia pastoris) pPIC9K 质粒连接,构建了分泌表达载体pPIC9K/AS-hepc2 .电击法转化重组表达载体,经过G418筛选和选择性培养基以及PCR鉴定,得到的克隆子都为Mut+.以甲醇诱导pPIC9K/AS-hepc2,分泌表达上清中获得10 ku左右的表达产物,与预期的目的蛋白黑鲷hepcidin的前体肽和成熟肽的大小相符.表达试验证明,随时间的延长,表达产物量增多,至120 h 达到高峰.表达产物具有很强的热稳定性.用抑菌圈法测定重组蛋白Pro-AS-hepc2 的抗菌活性,发现能抑制革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌的生长.     

黑苦荞黄酮类化合物的提纯及抑菌活性研究

【目的】研究黑苦荞(Fagopyrum tataricum)乙醇提取物中黄酮类化合物的提纯和抑菌活性。【方法】在体积分数为80%的乙醇溶液作为萃取剂、料液比为1 g∶5 mL的条件下得到粗提物;以三氯化铝比色法测定粗提物中黄酮类化合物含量;用AB-8大孔吸附树脂对粗提物进行纯化;采用打孔法分别测定粗提物和纯化物样品液形成的抑菌圈直径和最小抑菌浓度。【结果】粗提物干膏平均得率为6.26%,黄酮类化合物的平均提取率为2.52%;通过AB-8型大孔吸附树脂纯化,黄酮类化合物的平均吸附率、平均回收率分别为79.37%,42.23%;粗提物对大肠杆菌(Escherichia coli)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)和枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)均有抑菌活性,对上述细菌的最小抑菌浓度分别为2.5,1.25和2.5 mg·m,对黑曲霉(Aspergillus niger)无抑菌活性;纯化物对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌的最小抑菌浓度分别为250,500和250 μg·m,对黑曲霉无抑菌活性。【结论】黑苦荞黄酮类化合物的对枯草芽孢杆菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌均有抑菌活性,对黑曲霉无抑菌活性。相比粗提物,纯化物对大肠杆菌和枯草芽孢杆菌的抑菌活性明显提高。     

具有抗凝血活性的聚氨基酸的合成及性能研究

通过亲核试剂三乙烯四胺(TETA)引发L-酪氨酸和L-谷氨酸的α-氨基酸N-环内酸酐(NCAs)的活性可控开环聚合(ROP),并进行氯磺酸酯化修饰,制备了一种具有抗凝血活性的磺酸酯化聚(L-酪氨酸-co-L-谷氨酸)(PTG-SO_3),并对PTG-SO_3的结构、酶促降解性能、细胞毒性以及血液相容性等进行了测试.结果表明,合成产物为PTG-SO_3,具有良好的生物降解性(16 d后可降解约65%)、低细胞毒性(培育72 h后,细胞活性约为70%)、良好的抗凝血性能和血液相容性(活化的部分凝血活酶时间延长约37 s).该聚合物有望应用于生物医学领域.     

新生牛牛脑活性肽NBBP-1对人神经母细胞瘤SK-N-SH细胞凋亡的诱导作用

应用新生牛牛脑活性肽NBBP-1处理人神经母细胞瘤SK-N-SH细胞,通过细胞计数、流式细胞仪、琼脂糖凝胶电泳、Hoechst染色、HE染色和电子显微镜检测等方法,研究新生牛牛脑活性肽NBBP-1对人神经母细胞瘤SK-N-SH细胞凋亡的诱导作用.实验结果显示,60 μg/mL新生牛牛脑活性肽NBBP-1能有效抑制人神经母细胞瘤SK-N-SH细胞增殖活动,生长抑制率高达88.84%;细胞周期检测出现亚G1细胞凋亡峰,细胞凋亡率达19.20%;琼脂糖凝胶电泳显示出现细胞凋亡典型的DNA梯状条带;Hoechst染色显示细胞核内出现浓染致密的固缩形态或颗粒状荧光;光学显微镜和电子显微镜下可见典型的细胞凋亡特征:细胞核固缩、染色质凝聚与凋亡小体等典型的细胞凋亡形态和超微结构特征.因此,新生牛牛脑活性肽NBBP-1能够有效诱导人神经母细胞瘤SK-N-SH细胞的凋亡.     

涠洲岛珊瑚礁海洋真菌的分离鉴定及其抗MRSA活性筛选

本研究从广西涠洲岛礁栖珊瑚、海绵和海藻等样品中挖掘海洋真菌资源,旨在筛选发现潜在的具有抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）活性的菌株。研究首先采用稀释分离法从采集的珊瑚、海绵和海藻等样品中分离纯化出真菌,基于内转录间隔区（ITS）序列和系统发育树分析对菌种进行鉴定;然后采用大米培养基对分离得到的单一菌株进行小量发酵,利用乙酸乙酯提取浓缩获得提取物;最后采用薄层色谱（TLC）、高效液相色谱（HPLC-DAD）等方法分析菌株提取物中代谢产物的丰富度,并采用滤纸片琼脂扩散法对菌株粗提物进行抗MRSA活性初步筛选。结果从样品中分离获得40株海洋真菌,以曲霉属（Aspergillus）和木霉属（Trichoderma）为主,其中A.terreus MF01、A.flavus MF07、T.asperellum HP01、Fusarium equiseti HP08和A.unguis HP17等菌株具有丰富的代谢产物及抗MRSA活性。本研究发现的菌株MF01、MF07、HP01、HP08和HP17具有潜在的抗MRSA活性,为后续开展活性代谢产物研究提供基础资料。     

高效液相色谱法分离测定农抗2507

农用抗生素 2 50 7是广东省农科院新近从土壤微生物的代谢产物中筛选出来的 ,对植物卵菌病害有很好的防治效果 ,同时对炭疽病菌也有较好的抑制作用[1,2 ] ;其活性组份是一个由 8个氨基酸组成的小肽 ,经国家知识产权局查新证明该物质是一种新化合物 (另文报道 ) .为便于优化发酵工艺以及菌种诱变 ,我们建立了用高效液相色谱仪分离测定 2 50 7活性组份的方法 .1　材料与方法1 .1　材料2 50 7粗提物由课题组从发酵菌丝体经溶媒萃取获得 ;2 50 7标准品由粗提物纯化获得 ,经ＨＰＬＣ分析证明其含量在 99%以上 .1 .2　仪器与试剂仪器 :ＨＰ1 0 50…     

北冬虫夏草多肽分离纯化及活性研究

目的对北冬虫夏草活性多肽进行分离纯化,并测定其抗氧化活性.方法优选北冬虫夏草多肽的提取方法;通过体外抗氧化DPPH清除率测定北冬虫夏草多肽的抗氧化活性;通过大孔树脂HP-20对北冬虫夏草多肽产物进行分离纯化,并分别测定洗脱后各浓度产物的蛋白含量和抗氧化活性,经Tricine-SDS-PAGE电泳法初步鉴定北冬虫夏草中多肽的分子量.结果 Tris-HCl作为提取液时DPPH清除率最高可达88.68%;经大孔树脂HP-20洗脱并分离纯化后,25%浓度的乙醇溶液和去离子水可作为洗脱剂; Tricine-SDS-PAGE结果显示:北冬虫夏草中富含小分子肽.结论此研究确定了北冬虫夏草多肽的最佳提取工艺,提高了初步提取多肽的产量;北冬虫夏草中的多肽具有一定的抗氧化活性.     

南海圆鮀鲣肌肉组织酶解产物抗疲劳活性的初步研究

圆鮀鲣是我国南海高产低值的一类金枪鱼。对其肌肉组织的普通肉和暗色肉进行了酶解及氨基酸组成分析,并进行了抗疲劳活性动物实验评价。圆〖XCTUO-K.tif,+3.8mm。3.8mm;%110%110〗鲣的普通肉酶解产物冻干粉和暗色肉酶解产物冻干粉的氨基酸质量分数分别为57.06%和58.90%,其中支链氨基酸含量占总氨基酸的约18%。普通肉酶解产物冻干粉和暗色肉酶解产物冻干粉中分子质量5000Da以下肽的质量分数均达到70%以上,700Da以下的肽占20%以上。与空白对照组相比,圆鮀鲣的普通肉酶解产物冻干粉和暗色肉酶解产物冻干粉的各剂量组均具备显著延长小鼠负重游泳时间,增加小鼠肝糖原储备和降低运动后小鼠血清尿素氮含量的作用,表明2种酶解产物均有显著的抗疲劳活性,且二者无显著差异。研究结果表明,圆鮀鲣的普通肉和暗色肉组织均可作为抗疲劳保健产品潜在的开发对象。