弓形虫pcDNA3-ROP1 DNA疫苗免疫小鼠诱导体液免疫应答及保护性的初步观察

目的 观察弓形虫pcDNA3-ROP1 DNA疫苗免疫BALB/C小鼠诱导其体内产生的体液免疫应答及抗虫感染的免疫保护作用.方法 重组质粒用生理盐水稀释后,肌注免疫BALB/C小鼠.分别于免疫后5周和10周用ELISA法测定IgG抗体滴度;免疫鼠腹腔注射弓形虫速殖子攻击感染.结果 经两次检测,均可测到特异性IgG抗体,且抗体的滴度随免疫时间的延长而增高;弓形虫速殖子腹腔攻击感染免疫组小鼠的平均存活时间较对照组延长,统计学有显著性差异(P<0.01).结论 弓形虫pcDNA3-ROP1质粒 DNA疫苗能诱导BALB/C小鼠产生特异性体液免疫应答及部分抗虫免疫保护作用.     

饮用水中隐孢子虫的紫外线灭活

介绍了隐孢子虫的生活形态以及隐孢子虫病的传播情况，通过对欧美等国爆发的隐孢子虫病的分析，指出传统的水处理工艺不能有效地去除侵入水中的隐孢子虫卵囊，应该对现有的处理系统进行改造．紫外线灭活隐孢子虫研究的进展情况表明，紫外线对其的灭活率达到99％和99．99％时，紫外线剂量分别为11mJ/cm^2和19mJ／cm^2．最后建议确定简单合理的检测方法，并加强紫外线灭活污水中隐孢子虫的研究．     

猴接种狂犬病毒核糖核蛋白诱生抗狂犬病保护性免疫

本文研究了猴体内狂犬病毒核糖核蛋白(RNP)诱生抗狂犬病保护性免疫及诱导病毒中和抗体(VNA)产生的能力。猴子经两次接和狂犬病毒RNP后产生强烈的抗RNP免疫应答并能抵抗致死量狂犬病毒的攻击而不受感染。先接种RNP再免疫一剂狂犬病毒人二倍体细胞疫苗(HDCV)后所产生的VNA滴度与未接种RNP而经两次接和HDCV疫苗后产生的VNA滴度相当。本文就狂犬病毒RNP对人类狂犬病在暴露前的预防作用进行了讨论。     

南昌地区腹泻儿童粪便隐孢子虫卵囊的检查

取江西省儿童医院132名腹泻住院儿童粪便,经处理和抗酸染色后,发现17份有类似隐孢子虫卵囊.后取17份中的2价标本,经人工感染小鼠,未能证明其致病性.后又分别将17份可疑阳性的粪便样品接种于沙堡弱琼脂平板上,室温培养24h,结果以感染小鼠粪便及沙堡弱琼脂上均分离出酵母菌.培养出的酵母菌经抗酸染色,发现少数酵母菌也可呈现阳性,故以抗酸染色法检查粪便中的隐孢子虫卵囊时要注意与酵母菌相区别.这次132例中未能证实其中有隐孢子虫.     

弓形虫SAG1,ROP1基因及其复合抗原基因的核酸免疫研究

目的 检测混合SAG1和ROP1编码基因真核表达质粒疫苗诱导小鼠的免疫应答,评价其抗弓形虫感染的保护性免疫效果.方法 将SAG1和编码基因片段克隆入pEGFP-N3表达载体,构建重组质粒;RT-PCR体外验证重组质粒在NH3T3细胞中的表达;通过检测抗体、抗体分型及细胞因子来评价体液免疫和细胞免疫;腹腔内注射毒性株弓形虫速殖子攻击免疫小鼠.结果 RT-PCR结果显示重组质粒能在哺乳动物细胞内表达;SAG1和ROP1混合重组质粒疫苗诱导小鼠产生很强的体液免疫和细胞免疫,对于毒性株弓形虫感染攻击具有保护作用.结论 不同候选抗原编码基因重组质粒能够诱导小鼠产生抗弓形虫感染保护性免疫,提示含有多种成分的混合DNA疫苗的研制可作为核酸免疫研究的策略之一.     

基因免疫研究进展

1990年WolffJA等意外发现小鼠骨骼肌细胞能直接摄取病毒裸露的DNA ,并表达其编码的蛋白质 ,这种表达可持续数月 ,这一发现为开创基因疫苗的研究奠定了基础。 1992年Tang等将带有人生长激素的质粒DNA通过基因枪导入小鼠表皮细胞 ,几周后 88%被接种的小鼠产生了特异性抗体。 1993年Ulmer等发现小鼠肌肉注射编码甲型流感病毒相对保守的核心蛋白的质粒载体后 ,可有效的保护小鼠抵抗另一亚型流感病毒的攻击 ,从而证明了注射不但能在体内表达抗原蛋白 ,并且可以诱导产生具有显著保护作用的免疫应答。从此继全菌弱毒苗和亚单位疫苗后 ,出现了…     

汉滩病毒G1重组腺病毒的表达及其免疫学特性研究

将汉滩病毒(HTNV)囊膜糖蛋白G1重组腺病毒(Adeno-G1)感染VeroE6细胞,用IFA法检测其表达产物;并进一步将其免疫Balb/c小鼠。结果可检测到HTNV糖蛋白G1在VeroE6细胞中表达;用该重组腺病毒免疫小鼠,结果表明免疫小鼠体内可诱导产生抗汉滩病毒G1特异性抗体,同时微量细胞培养中和实验结果表明重组腺病毒还可刺激机体产生低水平的中和抗体,但淋巴细胞增殖反应不明显。说明Adeno-G1免疫小鼠后,主要刺激机体产生特异性的抗HTNV体液免疫应答,但刺激机体产生特异性的细胞免疫应答不明显,为HTNV基因工程疫苗的研究提供了实验基础。     

重组IL-5质粒pVAX1-mIL-5增强卵透明带DNA避孕疫苗黏膜免疫效能

目的:探讨利用白细胞介素5作为DNA疫苗佐剂增强黏膜免疫反应,提高卵透明带DNA避孕疫苗抗生育效能的可行性。方法:用pVAX1-m IL-5和卵透明带避孕疫苗pVAX1-pZP3α壳聚糖纳米微粒口服免疫雌性小鼠,共设3组,每组6只。A组单独用50μg pVAX1-pZP3α免疫;B组用疫苗加等量的pVAX1-m IL-5质粒为佐剂共免疫;C组为空白对照组。每组动物接受3次免疫(第0、3、6周)。采用ELISA法检测小鼠血清及阴道冲洗液中抗pZP3 IgA抗体。第10周雌雄交配,统计雌鼠怀孕情况;第16周取双侧卵巢作石蜡连续切片,光镜观察卵巢病理学变化。结果:B组全部小鼠血清抗体呈阳性反应,A组只有3只小鼠血清抗体呈阳性反应,且B组小鼠的抗体滴度水平均高于A组小鼠;抗生育率B组小鼠为100%,A组小鼠为50%,C组小鼠为0%,2检验分析结果表明各组间的差异有统计学意义,抗生育效能与交配时抗pZP3 IgA抗体的强度有关;卵巢切片的组织病理学观察结果表明,有抗生育效能的小鼠卵巢组织可观察到各级形态正常的卵泡,无淋巴细胞浸润,与对照组及无抗生育效能的小鼠卵巢结构无差异。结论:利用重组质粒pVAX1-m IL-5与卵...     

用猪卵透明带55KDa糖蛋白抗原（ZP3）免疫恒河猴的初步研究

用猪卵透明带５５ＫＤａ糖蛋白抗原（ＺＰ３）和胞壁酰肢二肽佐剂（ＭＤＰ）免疫３只雌性恒河猴，研究猪ＺＰ３免疫的抗生育作用及其对卵巢正常结构与功能的影响，评价用恒河猴作卵透明带生育调节疫苗研究动物模型的合适性。实验观察持续４４０天，三只免疫猴中，两只产生高滴度抗ＺＰ３抗体并导致不孕（免疫组怀孕率为３３％，对照组为８０％）．血清Ｅ＿２和Ｐ测定结果表明，抗体滴度高的两只猴Ｅ＿２和Ｐ的水平极低，且不呈周期性变化，组织学观察表明两只不孕猴的卵巢缺乏生长卵泡和成熟卵泡，揭示ＺＰ３免疫阻断了卵泡的发育，这些结果与用猪ＺＰ３免疫其它灵长类动物报导的相似，它进一步证实ＺＰ３免疫的抗生育作用，并支持用恒河猴作动物模型，研究用合成肽段或基因重组产物作免疫原的卵透明带生育调节疫苗。     

鸡补体因子C3d对禽流感病毒M2蛋白免疫应答反应的增强作用

M2蛋白是禽流感病毒中具有交叉保护性的结构蛋白，但其抗原性差，难以诱导高水平的免疫反应.分别将一个鸡补体因子C3d，2个C3d基因同禽流感sM2基因（缺失跨膜区的M2基因）以柔性肽链Linker串联连接，构建了4个重组质粒并在大肠杆菌中表达出4种带有谷胱苷肽硫转移酶（GST）的融合蛋白：GST-C3d-sM2，GST-C3d-L2-sM2，GST-C3d-L1-C3d-sM2，GST-C3d-L1-C3d-L2-sM2.将纯化后的4个融合蛋白及对照GST-sM2蛋白免疫BALB/c鼠4次（每组10只），结果在三免后，4个融合蛋白免疫的BALB/c鼠体内抗sM2抗体滴度与对照组相比均差异显著（p<0.05），并且GST-C3d-L1-C3d-L2-sM2组的抗体滴度最高.另外，分别构建重组质粒pcDNA-sM2和pcDNA-C3d-L1-C3d-L2-sM2，然后以这两种DNA疫苗与蛋白GST-C3d-L1-C3d-L2-sM2和GST-sM2同时接种14日龄SPF鸡3次（每组15只）.结果表明，蛋白GST-C3d-L1-C3d-L2-sM2 和对照组GST-sM2的抗sM2抗体滴度差异明显（p<0.01），而pcDNA-C3d-L1-C3d-L2-sM2平均sM2抗体滴度也明显高于对照组pcDNAsM2（p<0.05）.分别以脂多糖（LPS）和刀豆蛋白（ConA）作为致裂原对SPF鸡的外周血淋巴细胞进行淋巴细胞转化试验 （MTT法）.结果以LPS刺激的淋巴细胞的增殖程度在融合蛋白GST-C3d1-L1-C3d2-L2-sM2免疫组与对照组GST-sM2之间以及pcDNA-C3d-L1-C3d-L2-sM2免疫组与对照组pcDNA-sM2之间均差异极显著（p<0.01），而Con A刺激的淋巴细胞各组之间则无显著差异.所有这些结果证实，鸡补体因子C3d无论是在原核系统表达的融合蛋白，还是插入DNA疫苗中均可以增强禽流感病毒M2蛋白引起的免疫应答反应.     

A DNA vaccine induces SARS coronavirus neutralization and protective immunity in mice

Public health measures have successfully identified and contained outbreaks of the severe acute respiratory syndrome (SARS) coronavirus (SARS-CoV), but concerns remain over the possibility of future recurrences. Finding a vaccine for this virus therefore remains a high priority. Here, we show that a DNA vaccine encoding the spike (S) glycoprotein of the SARS-CoV induces T cell and neutralizing antibody responses, as well as protective immunity, in a mouse model. Alternative forms of S were analysed by DNA immunization. These expression vectors induced robust immune responses mediated by CD4 and CD8 cells, as well as significant antibody titres, measured by enzyme-linked immunosorbent assay. Moreover, antibody responses in mice vaccinated with an expression vector encoding a form of S that includes its transmembrane domain elicited neutralizing antibodies. Viral replication was reduced by more than six orders of magnitude in the lungs of mice vaccinated with these S plasmid DNA expression vectors, and protection was mediated by a humoral but not a T-cell-dependent immune mechanism. Gene-based vaccination for the SARS-CoV elicits effective immune responses that generate protective immunity in an animal model.     

Effects of hydrogen peroxide on in vitro infection of Cryptosporidium parvum

The effect of hydrogen peroxide (H2O2) on Cryptosporidium parvum infection and the protective function of free radical scavengers were studied in cultured bovine fallopian tubes epithelial cells. H2O2 treatment at 500 μmol/L and 1 mmol/L significantly inhibited excystation of bleach-treated oocysts (p ＜ 0. O1 ). At 48 h postinoculation,H2O2 at 500 and 750 μmol/L resulted in a significant (p ＜ 0.01) decrease of C. parvum infection by 35.77% and 58.16% respectively in the cultured cells, when compared with the untreated control. Surprisingly, the infection was significantly increased from 22.21% to 39.33 % ( p ＜ 0.05) with lower concentration of H2 O2 (50 ～ 200 μmol/L). The inhibitory and stimulatory effects of H2O2 treatment on C. parvum infection were, to a certain extent, abolished in the presence of reduced glutathione or mannitol. These observations indicate that reactive oxygen species, such as H2O2, may play an important role in C. parvum infection.     

甲型H1N1流感患儿免疫球蛋白水平变化

目的探讨甲型H1N1流感患儿免疫球蛋白水平变化及临床意义。方法采用放射免疫法检测51例甲型H1N1流感患儿（其中非危重组31例,危重组20例）急性期和恢复期以及对照组25例健康儿童外周静脉血的Ig,A、IgG、IgM、C3水平,并对结果进行分析。结果非危重组急性期和恢复期及对照组血清IgA、IgG、C3水平两两比较,差异均无统计学意义（P〉0．05）;危重组急性期血清IgA、IgG、C3水平低于非危重组急性期和对照组（P〈0．05）,恢复期血清IgA、I如、C3水平上升,与急性期比较差异有统计学意义（P〈0．05）;危重组和非危重组恢复期血清IsA、Is,G、C3水平比较,差异无统计学意义（P〉0．05）。非危重组、危重组及对照组血清IgM两两比较,差异无统计学意义（P〉0．05）。结论甲型H1N1流感患儿免疫球蛋白水平变化与病情严重性有关,危重患儿表现为急性期血清IgA、IgG、C3水平降低,恢复期恢复正常,提示危重甲型H1N1患儿体液免疫抑制是暂时的、可逆的。     

用酶联免疫吸附试验诊断蓝氏贾第鞭毛虫病免疫价值的研究

用蓝氏贾第鞭毛虫纯培养虫株和超声粉碎可溶性虫体部分作为抗原,采用ELISA方法检测人体感染蓝氏贾第鞭毛虫血清免疫抗体并讨论其寄生虫学诊断价值．检测65份成人贾第虫病血清,其中55份IgG和／或IgA阳性,阳性率84．62％．20份10岁以下儿童贾第虫病人血清无1份阳性．结果提示蓝氏贾第鞭毛虫感染产生的体液免疫反应存在有年龄依赖性,酶联免疫吸附试验用于蓝氏贾第鞭毛虫病免疫诊断具有局限性．     

以减毒猪霍乱沙门菌为载体的抗O型口蹄疫病毒重组活菌苗在家兔体内免疫应答的初步研究

将含有口蹄疫病毒疫苗基因的真核表达质粒pBO1经过中间宿主鼠伤寒沙门菌LB5010修饰后,电转化到减毒的猪霍乱沙门菌C500中,构建成抗O型口蹄疫病毒的重组活菌苗pBO1／S．cho．血清凝集实验验证,筛选到的转化菌仍然具有猪霍乱沙门菌的血清学特性,即具有免疫原性．采用口服方式免疫家兔,检测重组菌在家兔体内诱导的免疫应答．家兔免疫后8周,分离脾脏T细胞,检测T细胞增殖情况．结果显示,口服DBO1／S．fho的家兔T细胞在FMDV特异性抗原的刺激下有明显的增殖反应,刺激指数SI〉11;免疫后2周和8周分别取家兔静脉血,用液相阻断ELISA法检测血清中针对FMDV的特异性抗体,pBO1／S．cho组家兔产生的抗体效价为1／32。     

健身气功易筋经对血清免疫球蛋白及补体活性的影响

为了研究健身气功易筋经对老年人机体免疫分子免疫球蛋白与补体活性的影响,以30名健康老年为研究对象,随机分为易筋经组和对照组各15人,经过6个月的健身气功易筋经锻炼分别测定实验前后血清IgG、IgM、IgA含量及C3、C4含量．结果显示血清IgG、C3、C4含量与对照组相比增高,且具有显著性差异（P〈0．05或P〈0．01）,而IgM、IgA含量与对照组相比无明显变化．认为长期坚持健身气功易筋经锻炼能提高老年人免疫球蛋白和补体含量,提高机体免疫功能．     

乙肝病毒核酸疫苗诱导小鼠细胞免疫应答的研究

研究利用核酸疫苗诱生乙型肝炎病毒 (HBV)表面抗原 (S)细胞免疫应答的作用 .免疫前于BALB/C小鼠股四头肌注射 75 %盐酸布比卡因 ,三天后同样部位注射包含HBsAg基因片段的重组质粒pcDNAHBs .采用3H -TdR掺入法测定免疫小鼠脾细胞增殖能力 ;XTT法测定其脾细胞分泌IL 2活性 .结果表明注射乙肝核酸疫苗可以使小鼠脾细胞增殖 ,小鼠脾细胞分泌上清中可检测到IL - 2活性     

痤疮丙酸杆菌对小鼠抗胸膜肺炎放线杆菌血清7型9型的免疫保护

为明确痤疮丙酸杆菌(PA)对具有抗胸膜肺炎放线杆菌(APP)血清7型和血清9型的异源免疫保护作用,对小鼠免疫PA分离株S14后,分别用APP血清7型(CCVC-265)和血清9型(CCVC-267)攻毒。结果表明,免疫保护率达60%和70%;而用猪抗PA血清免疫小鼠后以APP血清7型和血清9型攻毒,免疫保护率达100%。血清特异性抗体效价检测显示,PA免疫小鼠后,可诱导小鼠产生特异性的抗APP血清7型和9型的抗体,ELISA方法检测特异性抗体平均效价为1 800和2 800。PA对APP血清7型和9型的感染具有良好的保护作用。     

甘油-3-磷酸对甲肝疫苗诱导的体液免疫影响*

目的 研究甘油-3-磷酸对甲肝疫苗诱导的小鼠体液免疫应答的影响。方法 选取49只雌性ICR小鼠,分7组,每组7只,这7组小鼠分别为阴性对照、单纯抗原组、铝佐剂组和4组甘油-3-磷酸组,分别在免疫之后的第4、8、12、16、20周用酶联免疫法(ELISA)测定小鼠血清中的特异性的anti-HAV IgG水平。结果 在小鼠免疫之后的第4、8、12、16、20周单纯抗原组、铝佐剂组和4组不同剂量甘油-3-磷酸组均能检测到特异性抗HAV抗体,并且趋势为先升高后降低,且在免疫后的第8周最高;第4周和第8周的甘油-3-磷酸实验组的结果均高于单纯抗原组,且差异均具有统计学意义(P<0.05),并且第4周甘油-3-磷酸组抗体水平均超过铝佐剂组,并具有统计学意义(P<0.05),其中甘油-3-磷酸2 mg为最佳剂量组,其抗体水平在免疫后的第4、8、12、16、20周均高于单纯抗原组,且在第8周抗体水平达到峰值,抗HAV IgG水平为lg(3.064±0.07851),铝佐剂的也是在第8周抗体水平达到峰值,抗HAV IgG水平为lg(3.150 ±0.1382)。结论 甘油-3-磷酸有免疫佐剂的作用,能够有效、迅速地增强HAV诱导的体液免疫应答,是一种潜在、安全有效的新型疫苗佐剂。     

结核分支杆菌Ag85B DNA疫苗构建、免疫原性及其保护效力

构建结核分支杆菌分泌蛋白Ag85B编码基因的DNA疫苗,研究其免疫原性和保护效力.构建该DNA疫苗并经鉴定后,应用Qiagen试剂盒大量纯化无内毒素的质粒DNA.将C57BL/6小鼠随机分为4组,分别3周间隔3次用生理盐水（A）、载体质粒（B）、卡介苗（C）、Ag85B DNA疫苗（D）免疫小鼠,通过ELISA方法检测血清中抗Ag85B抗体及其亚型.第三次免疫后28 d用结核分支杆菌H37Rv攻击,观察小鼠体重变化,攻击4周后检测细胞因子IFN-γ、IL-12,进行肺组织病理检查及菌落计数等.经Ag85B DNA疫苗免疫的小鼠特异性抗体IgG均显著高于对照组,而且IgG2b均高于IgG1和IgG2a.结核分支杆菌攻击后各组小鼠体重变化呈现不同趋势,A、B组小鼠体重从第3周开始下降;C组体重总体呈上升趋势;D组体重第2周开始下降,之后维持不变.MTT法检测脾淋巴细胞增殖实验中D组的刺激指数显著高于其它组;D组小鼠脾淋巴细胞转化率也显著高于A、B组.肺组织菌落计数C组最低,其次是D组.大体病理结果显示C组和D组肺组织病变较A、B组轻.A、B组肺泡腔内有较多渗出液,肺泡壁充血、水肿.C组肉芽肿数目最多.上述结果表明Ag85B DNA疫苗具有较强的免疫原性,呈TH1型细胞介导的免疫应答.Ag85B DNA疫苗的免疫保护效力不如BCG,有待进一步研究其应用价值.