pH值对甲肝减毒活疫苗后处理得率的影响

在甲肝减毒疫苗生产工艺中不同pH对疫苗得率有一定的影响，为提高疫苗的产量，在传统的氯仿抽提条件下，使用不同pH值（pH1．0－12．0）的磷酸盐缓冲体系进行氮仿抽提，检测抽提后甲肝病毒（Hepatitis A Virus,HAV)抗原滴度和感染性滴度，结果表明：经氯仿抽提后，HAV抗原滴定和感染性滴度均在pH8．0－9．0时最高，相对得率也比常规处理的得率有显著的提高。说明改进pH抽提条件对甲型肝炎减毒活疫苗后处理工艺效率的提高，成品疫苗产量的增加具有实际应用价值。     

用加速热稳定试验筛选甲型肝炎减毒活疫苗热稳定保护剂

为筛选具有良好热稳定保护效果的甲肝减毒活疫苗（H2株）保护剂,利用正交设计和加速热稳定试验,将不同配比的保护剂和液体疫苗混合后,封入安瓿,分别置37度和45度,不同时间取样,检测其感染性滴度,结果表明无保护剂的对照疫苗在45度条件下感染性滴度仅能维持2D不变,第3天开始下降,至4天已下降1．27logCCID50.mL^-1,而有保护剂的5批疫苗在45度条件下感染性滴度能维持5天无显著变化,在37度条件下无保护剂的对照疫苗感染性滴度仅能维持7天无显著变化,10天显著变化,下降1．0－1．1logCCID50.mL^-1,而有保护剂的5批疫苗在37度条件下感染性滴度能维持10天无显著变化,研究表明0．1mol.L^-1MgSO4,ω=5％,乳糖,0．01mol.L^-1精氨酸,0．01mol.L^-1甘氨酸组成的保护剂具有最佳保护效果,其热稳定保护效果明显优于现在使用的对照疫苗。     

2株甲型肝炎病毒(L8 株、H2株)蛋白酶2A在大肠杆菌中的表达

首次把生长特性有显著差异的 2株甲型肝病毒 (L8株、H2 株 )的蛋白酶 2A基因分别用基因工程技术克隆到大肠杆菌表达载体 pGEX -KG上 ,重组质粒转化至大肠杆菌 (E .coliBL - 2 1和DH5α)中 ,表达的结果显示 :2株甲型肝病毒的蛋白酶 2A均得以表达 ;表达量占菌体总蛋白 2 0 %以上 .为进一步纯化该蛋白酶、研究其生物学功能和与真核细胞代谢的关系奠定了基础 .     

pH值对甲肝减毒活疫苗后处理得率的影响

在甲肝减毒疫苗生产工艺中不同pH对疫苗得率有一定的影响，为提高疫苗的产量，在传统的氯仿抽提条件下，使用不同pH值(pH1.0～12.0)的磷酸盐缓冲体系进行氯仿抽提，检测抽提后甲肝病毒(HepatitisAVirus，HAV)抗原滴度和感染性滴度，结果表明经氯仿抽提后，HAV抗原滴度和感染性滴度均在pH8.0～9.0时最高，相应得率也比常规处理的得率有显著的提高.说明改进pH抽提条件对甲型肝炎减毒活疫苗后处理工艺效率的提高，成品疫苗产量的增加具有实际应用价值.     

2株甲型肝炎病毒蛋白酶2A核苷酸序列的测定与比较

从甲型肝炎病毒２个不同株感染的ＫＭＢ１７细胞中提取总ＲＮＡ,经ＲＴ－ＰＣＲ特异性扩增出此２毒株病毒蛋白２Ａ基因,将２个２Ａ基因克隆到ｐＧＥＭ－Ｔ载体上,经ＤＮＡ序列测定,得到２个２Ａ基因的核心苷酸序列,序列比较发现它们及与ＨＡＶ野毒株相对应序列有突变存在,Ｈ２株与ＨＭ１７５相比有一个点突变,同源性为９９．７２％;与ＨＭ１７５比较,Ｈ２株和Ｌ８株第３１９７位核苷酸均由Ａ突变为Ｇ,相应的氨基酸由丝氨酸     

2株甲型肝炎病毒（L8株,H2株）蛋白酶2A在大肠杆菌中？…

首次把生长特性有显著差异的２株甲型炎病毒的蛋白酶２Ａ基因分别用基因工程技术克隆到大肠杆菌表达载体ｐＧＥＸ－ＫＧ上，重组质粒转化到至大肠杆菌中，表达的结果显示：２株甲型肝炎病毒的蛋白酶２Ａ均得以表达；表达量占菌体总蛋白２０％以上。为进一步纯化该蛋白酶、研究其生物学功能和与真核细胞代谢的关系奠定了基础。     

甘油-3-磷酸对甲肝疫苗诱导的体液免疫影响*

目的 研究甘油-3-磷酸对甲肝疫苗诱导的小鼠体液免疫应答的影响。方法 选取49只雌性ICR小鼠,分7组,每组7只,这7组小鼠分别为阴性对照、单纯抗原组、铝佐剂组和4组甘油-3-磷酸组,分别在免疫之后的第4、8、12、16、20周用酶联免疫法(ELISA)测定小鼠血清中的特异性的anti-HAV IgG水平。结果 在小鼠免疫之后的第4、8、12、16、20周单纯抗原组、铝佐剂组和4组不同剂量甘油-3-磷酸组均能检测到特异性抗HAV抗体,并且趋势为先升高后降低,且在免疫后的第8周最高;第4周和第8周的甘油-3-磷酸实验组的结果均高于单纯抗原组,且差异均具有统计学意义(P<0.05),并且第4周甘油-3-磷酸组抗体水平均超过铝佐剂组,并具有统计学意义(P<0.05),其中甘油-3-磷酸2 mg为最佳剂量组,其抗体水平在免疫后的第4、8、12、16、20周均高于单纯抗原组,且在第8周抗体水平达到峰值,抗HAV IgG水平为lg(3.064±0.07851),铝佐剂的也是在第8周抗体水平达到峰值,抗HAV IgG水平为lg(3.150 ±0.1382)。结论 甘油-3-磷酸有免疫佐剂的作用,能够有效、迅速地增强HAV诱导的体液免疫应答,是一种潜在、安全有效的新型疫苗佐剂。