β－半乳糖苷酶基因在HeLa细胞中瞬时表达的动态研究

本文研究了由ＳＶ４０早期启动子和增强子启动的β－半乳糖苷酶基因在ＨｅＬａ细胞瞬时表达的动态情况．外源β－半乳糖苷酶基因经磷酸钙方法导入受体细胞５０ｈ后其酶活性为６０ｍｉｌｌｉｕｎｉｔｓ，该酶活性维持一段时间后呈下降趋势，经转染２７０ｈ后，该酶活性降为０．此外本文结果还表明，携带有β－半乳糖苷酶基因的质粒对受体细胞ＨｅＬａ具有较高的转染效率．     

酿酒酵母可诱导启动子功能特性的研究

把大肥杆菌β－半乳糖苷酶基因克隆到带有ＧＡＬ１启动子的酶母诱导表达质粒ｐＹＥＳ２中，研究了酵母半乳糖诱导启动子ＧＡＬ１控制下的基因表达特性，研究表明，β－半乳糖苷酶基因的表达明显地受培养基中碳源的调节，产生的β－半乳糖苷酶可达细胞总蛋白含量的１０％左右，从而为利用可调控表达系统在酵母菌中实现外源基因较高水平表达打下了一定基础。     

酿酒酵母可诱导启动子功能特性的研究

把大肠杆菌β－半乳糖苷酶基因克隆到带有ＧＡＬ１启动子的酵母诱导表达质粒ｐＹＥＳ２中，研究了酵母半乳糖诱导启动子ＧＡＬ１控制下的基因表达特性．研究表明，β－半乳糖苷酶基因的表达明显地受培养基中碳源的调节，产生的β－半乳糖苷酶可达细胞总蛋白含量的１０％左右，从而为利用可调控表达系统在酵母菌中实现外源基因较高水平表达打下了一定基础．     

HCV多表位抗原基因与β—半乳糖苷酸基因融合表达,产物纯化及酶活性分析

设计一个２７０ｂｐ的丙型肝炎病毒复合多表位抗原基因,与β－半乳糖苷酶基因融合后,在高浓度肉汤培养其中,于转接１％量后３．２５ｈ,     

β—半乳糖苷酶基因在小鼠乳腺细胞表达的研究

构建了以乳清酸蛋白（ＷＡＰ）５′区２．６ｋｂ为调控序列,指导β－半乳糖苷酶基因的真核表达质粒,采用直接注射质粒于乳腺的方法在小鼠乳腺中表达出β－半乳糖苷酶活性,证实ＷＡＰ基因调控序列的功能正确性,可以用于转基因动物乳腺表达研究,同时证实该方法可以作为一种暂时性表达载体的验证方法．     

乳酸克鲁维酵母（Kluveromces lactis）β—半乳糖苷酶的稳定性 …

探讨了乳酸克鲁维酵母（Ｋ．Ｌａｃｔｉｃ）β－半乳糖苷酶金属离子稳定性和热稳定性。证明某些金属离子对β－半乳糖苷酶具激活作用,另一些金属离子对β－半乳糖苷酶活性影响不大,但是在高浓度的条件下均地酶活性不同程度的抑制作用。Ｃａ＾２＋对酶的抑制到盐,脱脂乳以及Ｍｇ＾２＋,Ｍｎ＾２＋所恢复。     

伪狂犬病毒表达载体的构建

利用伪狂犬病毒湖北地方株胸腺核苷激酶基因和ｇＧ糖蛋白基因启动子，构建了ＰＲＶ基因转移载体。通过β－半乳糖苷酶基因确定了ＰｇＧ控制下外源基因的表达并筛选出表达β－半乳糖苷酶的ＰＲＶ重组病毒。     

几种环境因子对龙须菜α—半乳糖苷酶活性的影响

红藻中的α－半乳糖苷酶是一种重要的红藻糖苷水解酶。以龙须菜的三个品系为材料，研究了几种环境因子如光暗周期、盐度、温度及氮浓度发迹对该酶活性的影响。发现α－半乳糖苷酶活性有显显的日变化规律：光周期内开始光照６ｈ酶活达到峰值，在随后的境周期酶活性维持在较低水平且变化缓慢。３３盐度下培养的藻移到高盐培养３ｄ后测得酶活性降低，而移到低盐培养的则酶活性升高。温度对该酶活性也有显著影响，在１５℃或３０℃培养的     

大肠杆菌β－半乳糖苷酶基因在小菜蛾细胞中的表达

用携带大肠杆菌β－半乳糖苷酶（β－ｇａｌ）基因的杆状病毒转移载体．ｐＡｃ３６０－β－ｇａｌ与苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒（ＡｃＮＰＶ）ＤＮＡ经钙磷沉淀法共转染小菜蛾细胞系（ＢＣＩＲＬ－ＰＸ２－ＨＮＵ２,Ｐｘ）,利用Ｘ－ｇａｌ空斑检测分析,β－ｇａｌ基因成功地插入ＡｃＮＰＶ基因组中,得到重组病毒Ａｃ－β－ｇａｌ,重组病毒在Ｐｘ细胞中表达出受ＡｃＮＰＶ多角体蛋白基因启动子控制的具有生物活性的外源基因表达产物──β－ｇａｌ．     

乳酸克鲁维酵母(Kluveromces lactis)β-半乳糖苷酶的稳定性研究

探讨了乳酸克鲁维酵母（Ｋ．Ｌａｃｔｉｃ）β－ 半乳糖苷酶金属离子稳定性和热稳定性．证明某些金属离子对β－半乳糖苷酶具激活作用,另一些金属离子对β－半乳糖苷酶活性影响不大,但是在高浓度的条件下均表现出对酶活性不同程度的抑制作用．Ｃａ２＋ 对酶的抑制可以被磷酸盐、脱脂乳以及Ｍｇ２＋ ,Ｍｎ２＋ 所恢复．Ｋ＋ 单独存在就可以大大地提高酶的热稳定性,Ｍｎ２＋ 可以增加Ｋ＋ 对β－半乳糖苷酶的热稳定性作用,而Ｍｇ２＋ ,Ｍｎ２＋ 和Ｎａ＋ 自身不能提高酶的热稳定性．甘油、脱脂乳均可以提高酶的热稳定性,脱脂乳成分如乳糖、酪蛋白酸钠对酶的热稳定作用有赖于Ｋ＋ 的存在     

嗜热芽孢杆菌β-半乳糖苷酶发酵条件研究

以嗜热芽孢杆菌为菌种,研究发酵生产β－半乳糖苷酶的条件。应用均匀设计法优化发酵培养基组成,结果为（ｇ／Ｌ）：乳糖０．５、蛋白胨２．０、牛肉浸膏２．０、Ｋ２ＨＰＯ４ ０．０１。在温度５５℃、初始ｐＨ７．０、摇床转速２００ｒ／ｍ ｉｎ 和１０％ 接种量条件下,发酵２４ｈ,β－半乳糖苷酶酶活力达１３．２Ｕ／ｍ Ｌ。在乳糖水解反应中,证实该酶能催化转半乳糖苷反应,合成半乳糖低聚糖。     

鸡痘病毒载体强启动子的构建和筛选

根据痘苗病毒天然启动子Ｐ７．５关键区的结构,人工合成４条寡核苷酸,形成早,晚期启动子,把合成的启动子进行不同组合,得到１０个较有代表性的不同启动子组合ＰＳ１～１０,用Ｐ７．５作对照构建成表达ＬａｃＺ基因的表达载体ｐＦＢＳ１～１０以及ｐＦＢＳ７．５。利用脂质体介导转染鸡痘病毒中国疫苗株２８２Ｅ４,获取重组病毒,经纯化后,分别测重组欠代ＣＥＦ后１０,２４,３６,４８,７２ｈ,表达β－半乳糖苷酶的活性,     

嗜热芽孢杆菌β—半乳糖苷酸发酵条件研究

以嗜热芽孢杆菌为菌种,研究发酵生产β－半乳糖苷酸的条件,应用均匀设计优化发酵培养基组成,结果为：服糖０．５、蛋白胨２．０、牛肉浸膏２．０、Ｋ２ＨＰＯ４ ０．０１。在温度５５℃、初始ＰＨ７．０、摇床转速２００ｒ／ｍｉｎ和１０％接种量条件下,发酵２４ｈ,β－半乳糖苷酸酶活力达１３．２Ｕ／ｍＬ。在乳糖水解反应中,证实该酶能催化转半乳糖苷反应,合成半乳糖低聚糖。     

HCV多表位抗原基因与β-半乳糖苷酶基因融合表达、产物纯化及酶活性分析

设计一个270bp的丙型肝炎病毒（HCV）复合多表位抗原基因（PCX）,与β－半乳糖苷酶（GZ）基因融合后,在高浓度肉汤培养基中,于转接1％量后3．25h,用终浓度为1mmol／LIPTG诱导4h发酵表达,其表达量最高,约占50％总蛋白量,表达产量GZ－PCX以包含体形式存在．利用改良的包含体纯化及溶解方法,可获得溶解率＞90％,纯度为96．2％的产物GZ－PCX,且包含体溶解产物较好保存其蛋白酶活．对PBS／EDTA透析,GZ－PCX蛋白的β－半乳糖苷酶活性可升高4倍,对H2O／EDTA透析其活性则明显下降．     

聚离子亚基化合物介导的基因转移方法可用于外源基因？…

利用聚离子亚基化合物介导的基因转移方法，研究了外源β－半乳糖苷酶报告基因的瞬时表达。结果表明，聚离子亚基化合物介导的基因转移方法可用于外源基因的瞬时表达研究。而且在相同的条件下，用该方法在ＮＩＨ３Ｔ３细胞和ＰＡ３１７细胞中对报告基因转移的效率     

耐热β-半乳糖苷酶(Pyrococcus furiosus DSM 3638)活性位点N415S点突变对其酶活性的影响

β-半乳糖苷酶具有将乳糖分解为半乳糖和葡萄糖的能力,也具有把半乳糖聚合成低聚半乳糖的能力。这两种能力在工业生产中具有不同的意义。通过点突变使β-galactosidase[Pyrococcus furiosus DSM 3638]415位天冬酰胺(Asn or N)突变为丝氨酸(Ser or S),突变体构建于毕赤酵母表达质粒载体,并筛选以毕赤酵母为宿主细胞的工程菌种,以此制备β-半乳糖苷酶的突变体酶蛋白。研究发现,该突变体的β-半乳糖苷酶活性在95℃、p H5.5时达到最高酶活,为耐高温乳糖酶,且该突变体水解牛奶的能力较好,可用于低乳糖牛奶及其相关制品加工中。而突变后β-半乳糖苷酶的另一个活性,即产生低聚半乳糖的能力的活性也有所提高,但不够明显。因此该位点突变可用于乳制品的加工,但不能期盼产生更多的半乳糖寡聚体。     

采后河套蜜瓜(Cucumis melo cv.Hetao)软化的生理生化研究

采后河套蜜瓜贮存中,呼吸强度和内源乙烯含量均发生跃变,并都在采后６ｄ达到最大值,分别为７６．６ｍｇＣｏ２ｋｇ－１ｈ－１和１８．５５ｎｍｏｌｍｌ－１．可溶性固形物在采后４ｄ达到最大值１２．８％,至采后６ｄ前基本维持这一含量,表明此时果实品质最佳．对直接软化因素细胞膜透性、淀粉含量及淀粉酶活力、组织含水量、果胶层降解酶ＰＧ及β－半乳糖苷酶活力等的研究表明,ＰＧ和β－半乳糖苷酶对细胞壁果胶层的破坏及组织含水量降低引起膨压降低,是河套蜜瓜采后软化的重要因素．组织膜透性变化,对采后８ｄ前果实软化影响较小;淀粉与糖的转化不是影响采后果实软化的因素     

基因调控的负控制和正控制

1961年Jacob和Monod阐明原核生物基因调控的操纵子模型后,人们发现基因调控有两种不同的方式:(1)lac(乳糖)操纵子的负控制,(2)ara(阿拉伯糖)操纵子的正控制。一个操纵子中包含三种基因:结构基因、操纵基因(o)和启动基因(p)、后者又称启动子。lac操纵子的三个结构基因是:z,β—半乳糖苷酶基因;y,β—半乳糖苷透过酶基因;α,β—半乳糖苷转乙酰酶基因。ara操纵子的三个结构基因是B、A、D,其主要功能是催化L—阿拉伯糖转变成D—木酮糖5—磷酸。操纵基因是操纵子中与抑制物(阻遏蛋白)结合的     

低温处理增强紫外照射诱导HeLa细胞凋亡

报道了紫外照射诱导体外培养的ＨｅＬａ细胞凋亡的研究结果，对亚致死低温处理增强紫外照射诱导细胞凋亡的可能性进行了探讨。结果显示：ＨｅＬａ细胞经紫外线照射１０ｍｉｎ后培养６ｈ，细胞凋亡指数明显升高，并于照射后３０－３６ｈ，达到高峰（４４．８２％－７０．９７％）。     

用番茄半乳糖苷酶使红细胞B型向O型的转化

用纯番茄α－Ｄ－半乳糖苷酶，作用于Ｂ型红细胞及其影泡和水溶性血型物质，均能使它们的Ｂ抗原转化为Ｈ抗原专一性，定量地释放出Ｄ－半乳糖，表明Ｂ型红细胞的血型抗原均匀分布于细胞膜外表面，且全部能被酶转化，番茄α－Ｄ－半乳糖苷酶能将人Ｂ型红细胞转换成Ｏ型红细胞。探索了酶转化完整Ｂ型红细胞的条件，通过对转化前后红细胞渗透脆性，膜乙酰胆碱酯酶活性、高铁血红蛋白浓度、三磷酸腺苷及２，３－二磷酸甘油酸含量的测定，