HCV多表位抗原基因pcxz的三串联表达及其在小鼠体内免疫原性的研究

在本实验室之前合成的多表位抗原基因pcxz的基础上,将之3次串联重复构建了3pcxz,以重组表达的3PCXZ作为抗原,HCV病人血清为检测抗体,作Western blot杂交,结果表明3PCXZ抗原能被HCV阳性血清特异识别,而同正常人的血清无反应.通过对BALB/c小鼠的免疫应答进行检测,发现合成的多表位抗原3PCXZ诱导BALB/c小鼠产生的IgG抗体滴度为5.8×105;IgG亚型分析发现,这一免疫反应主要是基于TH2方式,在细胞免疫应答方面亦能激活特异的CD4+T辅助细胞CTL效应,最高溶解率达到40.54%,在1×106脾淋巴细胞中最多可以产生(698±229)个分泌INF-γ的CD4+T细胞.     

外加菌剂治理含异辛醇废水中菌群组成分析

由外加菌剂对含异辛醇废水处理的实验证明,人工添加的菌剂对废水中异辛醇的降解效果良好.微生物在降解有机物的过程中,不仅会利用污染物中的碳源和氮源,而且会和环境中的化学物质共同形成一个代谢相对稳定的微生态系统.通过对细菌16SrDNAV3可变区序列聚合酶链式反应扩增、变化浓度梯度凝胶电泳等细菌种类的研究,发现微生态中的细菌种类随污水浓度的变化并非呈单一递减的趋势,在一定的浓度条件下,会出现某类微生物优势群体;同时结合气相色谱分析,跟踪观察了异辛醇的降解过程,分析结果表明,降解的中间产物主要为乙醇.     

跳跃基因——细胞内一种普通现象

基因是指存在于生物细胞内有自体繁殖能力的遗传单位。分子生物学的研究表明,基因是具有特定核苷酸顺序的核酸区段,是储存特定遗传信息的功能单位。近几年来,由于分子生物学的突飞猛进,对基因的研究也取得了重大突破,相继发现了“跳跃基因”、“不连续的结构基因”、“重迭基因”等等,强烈地冲击着对基因的传统认识,这一组文章就是这些进展的某些反映。     

乳酸菌表达质粒的构建

粪肠球菌是乳酸菌的一个属．采用生物信息学方法,预测了粪肠球菌AS1．2984基因组中乳酸脱氢酶和三磷酸甘油醛脱氢酶的组成型启动子序列．设计引物通过PCR扩增得到这2段启动子序列,并克隆到乳酸菌一大肠杆菌穿梭质粒pNZ8037上,在启动子下游接上绿色荧光蛋白基因作为标记,构建乳酸菌的组成型蛋白表达质粒．通过电转化将上述改造过的pNZ8037质粒导入粪肠球菌中,在共聚焦显微镜中可以观察到绿色荧光蛋白的表达．在乳酸菌MRS培养基中加入乳酸、盐酸、氢氧化钠等试剂,发现可以调节绿色荧光蛋白的表达量．     

嗜热脂肪芽孢杆菌α-淀粉酶基因的克隆和表达的研究

α-淀粉酶(E.C.3.2.1.1.)是通过内切α-1,4-葡糖苷键降解淀粉而使其粘度下降的一种酶.在商品生产过程中,这种酶有广泛的用途,例如,在酒精、啤酒酿造和制糖工业中淀粉的减薄和液化.在纺织工业中,它用于染色之前的织物退浆.耐热性α-淀粉酶具有良好的热稳定性,反应温度高,因而能充分利用     

基因结构:更加惊人的发展

有关基因表达的知识大多来自诸如细菌之类简单的原核生物的研究。这些细胞的基因表达过程比较简单。首先一只基因的DNA拷贝成一种对应的信使RNA分子(mRNA);然后,mRNA决定蛋白质的合成,这种蛋白质作为细菌的一种酶或结构组份行使它的功能。但是,高等生物的真核细胞远比细菌复杂,因此,对于那些从事研究真核细胞遗传信使表达的人员来说是事倍功半。现在情况正在起变化。研究人员从揭示真核细胞基因表达的奥秘所作出的努力中开始看到了一些进展。他们发现的情况,显然不同于已了解的细菌基因的表达过程。一些研究人员最近发现,真核细胞的许多基因     

用Ames法检测二十二种精神药物的诱变效应

环境污染诱发人类遗传物质变异的课题,是遗传毒理学(genetic toxicology testing)研究的主要方面。由于医学的发展,药物的使用已成为人类生活环境的重要组成部分,因此研     

口服携带细胞因子基因的减毒沙门氏菌对小鼠肿瘤的预防作用

将真核表达载体EGFPN1,pCMVhIL-12,pCMVhGM-CSF,pCMVmIL-12和pMCMVmGM-CSF分别导入减毒鼠伤寒沙门氏菌SL3261中,扩增后经由胃管饲予BALB／c和C57BL/6小鼠,6周后用Lewis肺癌细胞和4T1乳腺癌细胞对上述小鼠进行攻击。在小鼠的肝脏、脾脏、肾脏、小肠和肿瘤等组织器官中均可观察到绿色荧光蛋白的表达和相应真核表达载体的整合。小鼠血清中相应的细胞因子水平升高,CD8^ /CD4^ 比较增大,细胞免疫功能增强。各实验组肿瘤的生长较对照组缓慢,部分小鼠肿瘤消退,小鼠生存时间明显延长。该研究为减毒沙门氏菌作为口服基因治疗载体用于肿瘤的预防和治疗提供了实验依据。     

大肠杆菌 aroL 基因敲除及其对莽草酸合成的影响

以E.coli DH5α基因组为模板克隆莽草酸激酶Ⅱ基因(aroL),构建质粒pMD-aroL,经HpaⅠ、BsaBⅠ酶切后插入卡那霉素抗性基因(kan)得pMD-aroL::kan,利用pKD46的λ重组系统,用该质粒上的kan及两端的aroL同源序列替换E.coli Top10F′基因组上的aroL基因,再运用质粒pCP20编码的FLP重组酶消除kan基因.Southern blot证实基因敲除是成功的,测序结果表明kan已经从基因组上消除,摇瓶发酵显示构建的基因工程菌的莽草酸产量是原始菌株的1.57倍.     

鲨鱼软骨血管生成抑制因子的抗体制备与组织特异性表达的检测

纯化鉴定了鲨鱼软骨血管生成抑制因子(Shark Cartilage-derived Angiogenesis Inhibit ory Factor-Ⅰ, SCAIF-Ⅰ)的纯度及分子质量. 采用新西兰大白兔背部皮下多点注射法制备了SCAIF-Ⅰ的多克隆抗体,测定了抗体的效价. 通过Western blot检测,证明了SCAIF- Ⅰ相关蛋白在哺乳动物中的广泛分布及SCAIF-Ⅰ在鲨鱼软骨中的组织特异性表达.