4种提取水稻基因级DNA方法的比较

对于含有大量硅质及多糖如酚、酯、萜等其它次生代谢产物的水稻,要从其组织中提取高质量的基因组DNA,一般比较困难,作者以水稻叶片为材料,分别采取了简易提取法,CTAB法,QIAGEN公司Dneasy Plant Mini Kits法,Shanghai Sangon公司Genomic DNA Isolation Kits法4种方法提取水稻基因组DNA;并通过质量分数为0．8％琼脂糖凝胶电泳和PCR扩增的方法所提取的DNA样品进行检测,将它们在DNA的产量、质量和耗费等方面进行简要比较,并根据分子生物学研究工作的实际特点,确定了CTAB沉淀法为最佳方法。     

甘薯幼苗叶片基因组DNA提取方法的比较研究

以甘薯幼苗叶片为材料,分别采用CTAB法和SDS法对DNA的提取方法进行研究。结果表明,CTAB法更适合甘薯幼苗叶片基因组DNA的提取,所得DNA质量好,纯度高。     

南极土壤微生物宏基因组文库构建及其抗肿瘤活性初探

微生物代谢产物是药物的重要来源之一，然而采用传统的分离培养筛选的手段仅能对不到1%的微生物资源进行研究开发.通过构建环境样品微生物宏基因组文库能突破人工培养的瓶颈，直接克隆到完整的次级代谢产物合成基因簇，并从中寻找新的药物和活性次生代谢产物.实验直接提取南极中山站排污口土壤样品中微生物总基因组DNA，以黏粒(SuperCos 1)为载体，构建了宏基因组文库，获得了约27 000个克隆子，平均插入片段在35kb以上，覆盖了至少946Mb的微生物基因组信息.通过差异性DNA修复试验(DDRT)法对该文库进行筛选，获得13个具有抗肿瘤活性的克隆子，并采用MTT法对其中活性较高的克隆子进行细胞毒活性测定，表明克隆子AE3对卵巢癌细胞具有明显的生长抑制作用.     

黄连木叶片基因组DNA提取方法

黄连木叶片中酚类化合物、色素、多糖和其它次生代谢物质含量较高,这给黄连木基因组DNA提取带来困难。为了从黄连木叶片中提取高质量基因组DNA,本文运用CTAB法和改良CTAB法提取黄连木基因组DNA,通过定性、定量及PCR分析检测所提取DNA的质量。结果表明:改良CTAB法提取的DNA电泳条带清晰无RNA等污染,OD260和OD280比值在1.8左右,RAPD扩增条带清晰、无弥散现象、亮度均一。说明改良CTAB法提取的DNA纯度较高,适用于PCR扩增反应。     

一种适用于地衣总DNA提取的改进方法

目的:针对地衣初生、次生代谢产物丰富的特点,提出了一种适于地衣总DNA的提取方法。方法:应用改良的CTAB法,对3种常见地衣进行了总DNA提取,经过琼脂糖电泳、紫外吸收分析DNA质量。结果:3个样本DNA的A260/A280值均在1.8～2.0之间,琼脂糖电泳图像清晰。结论:改良的CTAB法简便、省时、价廉,适合于地衣总DNA的提取,获得的DNA含量高,纯度好。     

改良Zigenhagen法提取南方红豆杉总DNA

将Pierre和Haurence建立的Zigenhagen法加以适当改进,用以从富含多糖、酚类化合物和一些次生代谢产物的南方红豆杉叶片中提取总DNA,所获DNA样品的A260/A280比值在1.750-2.050范围内,琼脂糖凝胶电泳图谱显示每一样品均具有单一明亮的条带,并能成功地用于trnL-trnF非编码区序列扩增,为基于trnL-trnF非编码区序列数据的南方红豆杉分子系统发育研究打下基础。     

岩陀DNA提取方法研究

以岩陀植物嫩叶为材料,用不同方法对岩陀叶片DNA进行提取,比较提取的质量差异,寻找适合岩陀叶片总DNA的提取方法,以满足多基原民族药岩陀DNA条形码识别系统构建的研究需要。采用十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)法、改良的CTAB法、十二烷基硫酸钠(SDS)法及碱裂解法提取岩陀叶片总DNA,利用琼脂糖凝胶电泳、紫外分光光度法及PCR扩增效果检查DNA提取的质量。结果显示四种方法均能从岩陀植物叶片中提取到基因组DNA,改良CTAB法提取的DNA纯度和完整性明显好于其他方法,且采用此法进行PCR扩增获得的目标条带明亮单一,扩增效率达到100%。改良的CTAB法是岩陀叶片总DNA的提取中最为合适的提取方法,能够满足后续DNA条形码的研究需要。     

试剂盒法提取蓖麻基因组DNA的条件优化

利用DNA提取试剂盒提取蓖麻叶片DNA,对其过程进行改良优化,从而获得一种快速、简便的提取蓖麻高质量基因组DNA的方法.在原试剂盒的操作基础上,对乙醇是否冰预冷、消化时间、洗脱液用量、材料用量等条件进行了优化,并对所提取的基因组DNA的浓度、纯度进行了检测.优化后的方法提取到了较高质量的蓖麻基因组DNA.     

木麻黄小枝基因组DNA的快速提取研究

提取介质中加入2.5% β-巯基乙醇, 能有效去除次生物质对木麻黄基因组DNA提取的影响.用新建方法所提DNA产率比用前人方法提的高出0.8倍左右.鉴定结果表明:鲜小枝、干小枝的DNA样品皆为48kb左右,适于限制性酶切和RAPD反应; 同时发现同一株树的鲜小枝、干小枝,基因组DNA RAPD扩增可得到相同的产物.     

菠菜基因组DNA提取方法与条件的研究

分别采用CTAB、SDS、高盐低pH三种方法从菠菜叶片中提取基因组DNA,通过A260/A280值、A260/A230值和琼脂糖凝胶电泳对所提取的DNA进行定量、定性分析和综合比较。研究提取缓冲液用量、水浴时间、蛋白质沉淀剂(氯仿-异戊醇)用量、DNA沉淀剂(异丙醇)用量等条件对DNA提取效率和纯度的影响。并对CTAB法的提取条件进行了正交试验,优选出菠菜基因组DNA提取的适宜条件。     

不同生长期的柚子叶的挥发性成分分析

对柚子的老叶和嫩叶的挥发油化学成分进行研究,并探讨其差异,为柚子叶的开发利用提供科学依据.采用无溶剂微波萃取法提取柚子老叶和嫩叶的挥发油,利用气相色谱-质谱联用技术(GC-MS)对其化学成分进行分析,并以面积归一化法测定各个成分的相对含量.从柚子老叶和嫩叶的挥发油中分别分离鉴定出了59、51个化合物,分别占其挥发油总量的91.29%、87.45%,且2个部分的挥发性成分及含量差异性较大.柚子叶中的挥发性成分非常丰富,其中,许多化学成分具有芳香性或药理药效作用,在香精香料或医疗领域具有一定的利用价值.另外,柚子老叶的得油率比嫩叶高,其挥发性成分也比嫩叶的丰富,故柚子叶的采收宜在生长后期.     

火炭母组织培养灭菌方法探索

针对火炭母组织培养中的污染问题,以火炭母带腋芽茎段为外植体,设计多种灭菌方法,进行组织培养.以求找出降低污染的方法.实验结果表明:用洗涤剂处理、紫外线照射、75%碱化乙醇、1%次氯酸钠组合的灭菌方法,能有效降低火炭母组织培养污染率,同时还可提高腋芽萌发率,是火炭母的组织培养比较理想的灭菌方法.     

温州地区植物分布新纪录

本文报道了温州地区分布的植物新纪录计十种及一亚种．     

胡卢巴基因组DNA提取及RAPD引物筛选

以胡卢巴叶片为材料,利用改良CTAB法提取基因组DNA并进行质量检测和含量测定,在优化RAPD反应体系的基础上,对100条RAPD随机引物进行了筛选.结果表明,采用改良CTAB法能从胡卢巴叶片中提取到高质量的DNA,可以用于RAPD分析;从100条随机引物中筛选出了16条显示胡卢巴遗传差异的多态性引物,为胡卢巴遗传多样性研究提供分子依据.     

模拟酸雨对3种本地草本植物的胁迫效应

研究了不同pH值的模拟酸雨对3种本地草本植物华泽兰（Eupatorium chinense Linn.）、鸡矢藤[Paederia scandens (Lour.) Merr.]和蟛蜞菊[Wedelia chinensis （Osbeck.）Merr.]的光合生理生态的胁迫效应. 结果表明，重度酸雨（pH 2.5）对3种草本植物均造成伤害，其中华泽兰和鸡矢藤叶片受害明显，受害叶面积约5%~10%左右，而蟛蜞菊叶片受害最轻，受害叶面积＜5%. 随着酸雨pH值的降低，华泽兰叶片叶绿素（Chl）含量和净光合速率（Pn）逐渐降低；鸡矢藤Chl没有显著性变化，但其Pn受到抑制；蟛蜞菊Chl和Pn则呈上升的趋势. 酸雨胁迫下，3种草本植物超氧化物歧化酶（SOD）和过氧化物酶（POD）活性均有不同程度的提高. 上述结果表明，华泽兰和鸡矢藤受酸雨胁迫的影响较蟛蜞菊更大，蟛蜞菊是一种抗酸雨胁迫较强的本地草本植物.     

克隆植物珠芽蓼基因组DNA的提取及RAPD鉴定

高原植物体内所含有的酚类、多糖、色素等次生代谢物质严重影响提取其基因组DNA的得率和纯度,是导致后续分子操作失败的主要原因.运用一种新改进的CTAB法对变色硅胶保存的高原植物珠芽蓼(Polygonumviviparum)叶片进行基因组DNA的提取,采取常温下沉淀DNA,增加洗涤沉淀的体积分数为70%乙醇用量和洗涤时间等措施,有效地去除了酚类、多糖、色素等物质的干扰,减少了褐化现象的发生.样品检测所得DNA片段均在48 kb左右,电泳谱带呈线状,无拖尾现象;紫外分光光度计检测,A260nm/A280nm值在1.7~1.9之间.RAPD扩增结果表明,此方法提取的DNA无论在质量和纯度上都较理想.     

一种改良的水稻总DNA提取方法

在植物DNA提取“SDS法”基础上,提出了一种改良的DNA提取方法,称“剪切法”.采用“剪切法”、“液氮法”和“钢珠法”3种方法提取水稻幼叶总DNA并进行了电泳分析和PCR检测,同时首次选择了以幼穗为提取材料,用“剪切法”分别提取水稻幼穗、幼叶和老叶的总DNA并进行比较,结果表明:“剪切法”是一种简易、经济、高质的DNA提取方法,对于以F2极端分离群体作为基因定位群体,取幼穗为提取水稻总DNA的材料是一种经济便捷的途径.     

31种园林植物对重金属的富集研究

采集南京市不同功能区的土壤和31种园林植物,分析了Cd、Cr、Cu、Pb和Zn在土壤和植物中的含量,计算了31种园林植物不同器官的重金属富集系数。结果表明,南京市各功能区均不同程度的有重金属累积现象,表现为复合污染。在研究的31种园林植物中,黑松、国槐和杜鹃对Cd、Cu和Zn污染土壤有较强的修复能力;雪松和南天竹对Cd和Zn污染土壤有较强修复能力;栾树和宽叶十大功劳对Cd和Zn污染土壤有较强修复能力。另外,南天竹、桂花、红花继木、侧柏、法国冬青和杜鹃对Pb污染土壤有较强的修复能力;桂花、侧柏、梧桐、马褂木、法国冬青和宽叶十大功劳对Cu污染土壤有较强的修复能力;黄杨对Cr污染土壤等有较强的修复能力。对Zn污染土壤修复的园林植物较多,有水杉、香樟、龙柏、悬铃木、女贞、夹竹桃、黄杨、紫叶李、侧柏、柳杉、马褂木、法国冬青、垂柳、加拿大杨和栾树。特别值得注意的是宽叶十大功劳的根、茎、叶对Zn的富集系数分别为2.04、0.84和1.73,同时对土壤Cd也有较强富集能力,是理想的修复城市Cd、Zn复合污染土壤的园林植物。     

河南蓼属(Polygonum Linn.)增补与订正

报道了《河南植物志》中未记录的河南产蓼属植物2种1变种，其中长箭叶蓼(Polygonum hastato-sagittatum Mak.）为河南分布新记录，订正了一些分类群的学名。     

薇甘菊叶片水提液对土壤钾素活化及酶活性的影响

为探究薇甘菊(Mikania micrantha H.B.K.)的化感作用, 通过盆栽实验, 研究了不同质量浓度的薇甘菊叶片水提液对薇甘菊及其伴生植物火炭母(Polygonum chinense)根际土壤钾素活化及土壤酶活性的影响.研究结果显示:薇甘菊叶片水提液显著提高了薇甘菊根际土壤的脱氢酶与β-葡糖苷酶活性; 在薇甘菊单种中, 当叶片水提液质量浓度为15.00 g/L时, 薇甘菊的根际土壤速效钾的质量分数是对照(0 g/L)的2.53倍; 而薇甘菊叶片水提液也显著增加了火炭母根际土壤的脱氢酶与β-葡糖苷酶活性; 当叶片水提液质量浓度为15.00 g/L时, 火炭母根际土壤速效钾的质量分数增加了2.03倍, 但其火炭母的地上部分生物量及其钾的质量分数显著下降.上述结果表明:薇甘菊叶片水提液能增强自身根际土壤的酶活性, 并且加速土壤钾养分活化; 但薇甘菊叶片水提液的化感物质可能对火炭母的生长具有抑制作用.这表明薇甘菊化感作用对其入侵具有重要作用.