重组草酸青霉生淀粉糖化酶的酶学特性鉴定

【目的】了解在毕赤酵母中表达的来源于草酸青霉(Penicillium oxalicum)GXU20的重组生淀粉糖化酶的酶学特性。【方法】用3,5-二硝基水杨酸法测定pH值、温度、金属离子和化学试剂对纯化的重组生淀粉糖化酶的活力的影响,同时测定酶的底物特异性、酶对生淀粉的吸附能力以及酶对不同生淀粉的水解效率等,用高效液相色谱法对该酶水解生木薯淀粉的产物进行分析鉴定,用扫描电子显微镜观察重组酶对不同生淀粉颗粒的水解方式。【结果】重组生淀粉糖化酶rPoGA15A的最适pH值为4.5,最适温度为65℃,在pH值为2.0~10.0时,重组酶具有较好的pH耐受性,温度小于50℃时,酶的稳定性好。除Ag~+、Cu~(2+)和SDS之外,其他大部分金属离子和化学试剂对重组酶的酶活力影响不大。重组生淀粉糖化酶对大米和玉米生淀粉的活性较高,对木薯和马铃薯生淀粉的活性次之,重组生淀粉糖化酶rPoGA15A对不同生淀粉的吸附能力与其对相应不同生淀粉的水解活性大小呈正相关。扫描电子显微镜观察表明重组生淀粉糖化酶对不同生淀粉颗粒的降解作用明显,水解方式各有特点。高效液相色谱分析表明该重组生淀粉糖化酶水解生木薯淀粉的产物仅有葡萄糖。重组生淀粉糖化酶rPoGA15A在40℃下对大米和玉米生淀粉水解72h后水解率分别达到86.5%和71.9%。【结论】重组生淀粉糖化酶具有广泛的pH耐受性,对生淀粉具有高水解活性,在生淀粉的水解和生料同步糖化发酵生产酒精中有一定的应用潜力。     

生淀粉结合域SBD及糖化酶基因在毕赤酵母中的融合表达

【目的】研究生淀粉结合域SBD及糖化酶基因在毕赤酵母中的融合表达,提高酶的表达量和水解生淀粉的能力。【方法】利用In-fusionTM PCR克隆技术将淀粉结合域SBD无缝隙插入到黑曲霉糖化酶基因glu的5′端构建融合表达质粒pPIC9K-psg,实现融合酶基因psg在毕赤酵母GS115中的高效表达,并进行酶学性质研究。【结果】融合酶的最适作用条件及热稳定性均与原始酶无明显差别,但反应温度及pH值的范围更为宽泛,在反应温度60~70℃,pH值为4.0~7.0时均较稳定;融合酶PSG降解生淀粉的能力较原始酶PG提高29.6%,比原始菌株提高86.5%。【结论】淀粉结合域SBD的融合提高了糖化酶水解生淀粉的能力。     

产生淀粉糖化酶菌株的分离以及酶性质的初步研究

从霉变物、土壤、醋曲、醋醅等分离出四株产生淀粉糖化酶且酶活较高的菌株,选取酶活最高的菌株vin-1作为出发菌株,初步鉴定为Aspergillus niger,其生淀粉糖化酶活力达到342U/g(干曲),酶最适作用温度为55℃,酶在pH值3．5～4．5之间有较高的酶活,最适pH值为4．0,Ca~(2+)、Mg~(2+)对酶有一定的激活作用,而Fe~(2+)、K~+、Fe~(3+)、Cu~(2+)、Mn~(2+)都有较强的抑制作用,Mn~(2+)抑制作用最大,达到近50%。     

响应面法优化木薯生料发酵酒精的工艺条件

以生木薯为原料,通过单因素实验和响应面实验,对37℃下酒精发酵工艺进行优化.结果表明:在生淀粉糖化酶用量为173.00U·g-1、pH值为4.60和发酵时间为68.90 h的最佳工艺条件下,酒精体积分数可达到9.95％,与常温发酵相比,酒精体积分数降低1％,但发酵时间缩短39h;影响酒精发酵的3大主要因素为生淀粉糖化酶...     

纤维素降解菌的分离及单菌株与菌群纤维素酶活性质

从实验室保存的5号菌群中，分离筛选出四株具有纤维素酶活力的细菌F1、F2、F3和F4．经形态学观察并进行16SrDNA序列分析，鉴定F1、F2、F3、F4分别是苏云金芽孢杆菌、生淀粉糖化酶产生菌、粪产碱菌和蜡样芽孢杆菌．通过分别测定四株细菌、5号菌群以及四株菌混合菌群的CMC酶活．进行比较分析，说明分离筛选单菌株，了解了菌群主要成分，同时有利于克服5号菌群活性不稳定，无法保存等缺点．混合单菌株形成新的菌群，利于后续对菌群内部各组分之间相互作用的研究．     

比色法快速测定糖化酶活力的新方法

本文介绍了比色法测定糖化酶活力新方法。糖化酶水解淀粉产生葡萄糖，生成的葡萄８糖与３，５－二硝基水杨酸钠盐（ＤＮＳ）作用，发生颜色改变，颜色变化的多少与葡萄糖含量成正比。因此糖化酶水解液与ＤＮＳ反应后，在５５０ｎｍ处测定吸光度，由吸光度看出葡萄糖含量，并计算出糖化酶的活力。比色法简单、快速、准确度和标准法相当，是仪器分析测定糖化酶活力的理想方法。     

比色法快速测定糖化酶活力新方法

本文介绍比色法测定糖化酶活力新方法。糖化酶水解淀粉产生葡萄糖，生成的葡萄糖与３，５—二硝基水杨酸钠盐（ＤＮＳ）作用，发生颜色改变，颜色变化的多少与葡萄糖含量成正比。因此糖化酶水解液与ＤＮＳ反应后，在５５０ｎｍ处测定吸光度，由吸光度看出葡萄糖含量，并计算出糖化酶的活力。比色法简单、快速，准确度和标准法相当，是仪器分析测定糖化酶活力的理想方法。     

根瘤菌属生物学特性的研究

作者对不同类型根瘤菌的生物学特性进行了较为系统地研究，结果表明：所有测试菌株的３－酮基乳糖反应，明胶液化，纤维素水解，柠檬酸盐利用，淀粉水解及酪蛋白水解均呈阴性；蛋白胨肉汤中唯有苜蓿根瘤菌和快生型大豆根瘤菌能生长；石蕊牛奶反应中所有慢生型菌株均产碱，不产血清环，快生型菌株产酸，具血清环，唯独苜蓿根瘤菌产碱；快生型菌株能利用１４种以上不同碳源，而慢生型菌株仅能利用７～９种碳源．     

糖化酶的分批发酵动力学研究

用国内常规糖化酶生产菌株黑曲霉ＵＶ－１１,利用５升全自动发酵罐培养,在以淀粉为碳源,ＮＨ４Ｃｌ为氮源的合成培养基中,３３℃,ｐＨ４．５条件下进行分批发酵,菌体比生长速率为０．０２～０．０３１／ｈ时,糖化酶的比生产速率可达最大,为１５００～１８００ｕ／ｇ．ｈ,酶活力为２１９０ｕ／ｍｌ。     

利用紫外线诱变原生质体选育糖化酶高产菌株的研究

利用紫外线诱变原生质体选育糖化酶高产菌株的研究苟兴华（生物工程系）在原生质体形成及再生的最佳条件下制备Ａ．ｎｉｇｅｒＵＶ—ＧＧ原生质体，然后对原生质体进行紫外线诱变处理。经再生培养原生质体和发酵筛选再生菌株，获得了高产稳定株Ｐ＿（４７）—３。其糖化酶...     

凝胶组成和结构对淀粉糖化酶固定化效果的影响

以凝胶作为酶的固定化载体,淀粉糖化酶为模型酶,考查不同组成和结构的凝胶对淀粉糖化酶的固定化效果.测定结果表明,聚丙烯酰胺凝胶中引入环氧基团和微粒复合结构可提高酶的固定量并改善固定化酶重复使用中的稳定性.具有复合结构的聚丙烯酰胺凝胶比小分子交联剂共价交联的常规凝胶有利于提高淀粉糖化酶的固定量和重复使用活性.     

酒曲根霉的纯化筛选初报

从恩施州５家酒曲厂采得五个酒曲样，经分离纯化，获得１４个根霉菌株，对其生长量，糖化酶和液化酶的比较研究，从中筛选出了两个霉产量大，糖化酶和液化酶活性高的纯化菌株。     

生淀粉糖化菌NL—3的发酵条件

以黑曲霉（Ａｓｐｅｒｇｉｌｕｓｎｉｇｅｒ）５２３原生质体为对象,经激光、紫外线和亚硝基胍复合诱变,选育出高产生淀粉糖化酶突变株黑曲霉ＮＬ３,其生淀粉酶活力为１５６Ｕ／ｍｌ．产酶最适培养条件为：起始ｐＨ４５,３０℃,９６ｈ产酶量达最高．Ｋ＋,Ｍｇ２＋对ＮＬ３产生淀粉糖化酶有促进作用;Ｚｎ２＋对产酶有抑制作用．酶的最适作用条件为：以玉米淀粉为底物的最适温度５０℃,最适ｐＨ４５;以甘薯淀粉、马铃薯淀粉为底物时最适温度６０℃,最适ｐＨ４０～４５．酶在６０℃保温１５ｍｉｎ,玉米淀粉为底物时酶剩余活力为８０％;甘薯淀粉、马铃薯淀粉为底物时酶剩余活力为９８％．     

玉米生粉酒精发酵的研究

利用无蒸煮工艺，探讨玉米生粉酒精发酵的最佳工艺条件：原料加水比为１∶２．５，α－淀粉酶用量为１０μ／ｇ原料，糖化酶用量为４００μ／ｇ原料，青霉素用量为１６００μ／Ｌ。在３０℃，ｐＨ４．２条件下，２１４１菌株发酵１２０ｈ后，酒精度达９．６％，残还原糖０．２２％，淀粉利用率８２．５４％     

白酒发酵过程中常见酵母菌扣囊复膜酵母的研究进展

扣囊复膜酵母(Saccharomycopsis fibuligera)是白酒曲和酒醅发酵前期的优势酵母菌,可分泌淀粉酶(α-淀粉酶、葡糖淀粉酶、生淀粉糖化酶)、蛋白酶、β-葡萄糖苷酶等水解酶类,降解大分子底物,为酿酒酵母等其他白酒发酵微生物的生长提供营养。扣囊复膜酵母与其他微生物的协同作用,对酒精的生成和白酒风味的形成都具有重要贡献。本文总结了扣囊复膜酵母的基本特征、产酶特性及其对白酒风味物质的影响,有助于优化白酒发酵条件,筛选优良菌株,提高白酒品质。     

玉米多孔淀粉的制备

以玉米淀粉为原料,研究了玉米多孔淀粉制备过程中各种因素对产物成孔效果的影响,探讨了酶解成孔的机理,并对制备工艺进行了初步优化.在糖化酶和耐高温α-淀粉酶混合成的复合酶作用下,玉米淀粉水解制备玉米多孔淀粉的最佳工艺为:加酶量为按照理论水解55%淀粉的30倍加入量,糖化酶与耐高温α-淀粉酶的配比7:1,反应体系pH值5.6,酶解温度60℃,淀粉浓度60%,反应时间20h.反应后玉米淀粉的吸油率由16.15%提高到了47.59%.     

“温度、pH对酶促反应速度的影响”实验的改进

以糖化酶为材料，设计了一个“温度、pH对酶促反应速度的影响”的定量实验，采用硫代硫酸钠滴定法精确测定不同条件下的糖化酶活力单位，代替原来的碘液法定性检测唾液淀粉酶对淀粉的水解程度，实验结果准确，方法易操作。学生能在一次实验课的时间内做出酶的温度、pH曲线，加深对理论知识的理解。     

汾酒大曲根霉糖化酶的研究——Ⅰ、菌种选育与产酶条件的初探

糖化酶[葡萄糖淀粉酶(Glucoamylase)或淀粉葡萄糖苷酶(Amyloglucosidase)EC 3.2.1.3]可水解多糖类(淀粉、糖元和其他低聚糖类)中的α—1.4—葡萄糖苷键,同时亦可作用于α—1.6—葡萄糖苷键。有关曲霉(Aspergillus sp.)、红曲霉(Monascus sp.)和根霉(Rhizopus sp.)产生的糖化酶用于葡萄糖生产和酒精发酵已有详尽的评述。有关根霉糖化酶的研究报导也陆续出现,但目前国内则偏     

高糖化酶和高酯化能力的红曲霉菌株筛选

红曲霉除了药用价值外,其发酵产物还有糖化酶、酯化酶,在酿酒和酿醋生产中起到糖化和生香等有益作用。本实验从25株红曲霉菌种中筛选出了具有较高糖化酶、高酯化能力的红曲霉菌株f2,f7,f8,f13,f14,经过进一步筛选,确定f13的糖化酶活力和酯化能力都较高。高糖化酶、高酯化能力红曲霉菌株的获得可为今后人工强化产酯大曲的生产,提高原料的利用率,改进产品风味,提高产品品质提供菌种资源。     

白曲霉Aspergillus Kawachii工程菌转化酒精废液的研究

将白曲霉Aspergillus Kawachii基因工程菌株TR12，用于添加了少量的NH4NO3以补充氮源酒精废液的转化，经过3d的分批好氧发酵，得到糖化酶活较高的发酵液。