半乳糖酞菁光动力治疗结肠癌的实验研究

为了探讨新型光敏剂半乳糖酞菁(T1—T4)对结肠癌细胞CT-26增殖的影响及其相关机制,通过检测T1—T4的水溶性,利用荧光分光光度计检测T1—T4的浓度和孵育时间对CT-26细胞吸收量的影响.MTT(四甲基偶氮唑盐)法检测T1—T4对CT-26的细胞毒作用,利用MDC(单丹磺酰尸胺)染色法和流式细胞术检测结肠癌细胞的自噬、凋亡和坏死情况.结果发现T1—T4的水溶性随半乳糖取代基个数的增加而增强,对CT-26细胞的光动力杀伤作用与其浓度呈正相关并且细胞CT-26对T1—T3的吸收量随着孵育浓度的升高和孵育时间的延长而增加,对T4几乎无吸收.T2可诱导CT-26细胞出现自噬、晚期凋亡和坏死,且有较明显的剂量依赖性.通过以上数据了解到CT-26对T1—T3的吸收随药物浓度和孵育时间的增加而升高,T2介导的光动力疗法对CT-26有明显抑制作用,其机制可能与诱导细胞自噬有关.     

新型水溶性卟啉类光敏剂的体外抗菌作用

为了探讨新型卟啉类光敏剂光动力体外灭菌的活性,体外培养了抗药性金黄色葡萄球菌(MRSA)、大肠杆菌(Escherichia coli)和铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)3种菌株,分别检测3种细菌对5种卟啉化合物(PA1—PA5)的吸收量,菌落计数法检测PA1—PA5对3种细菌的光反应、暗反应浓度曲线;激光共聚焦显微镜检测细菌吞噬光敏剂的情况.结果发现,5种卟啉类化合物均具有较缓慢的光漂白率和较强的单线态氧产生能力.激光共聚焦显微镜的检测结果也表明,3类菌株可以选择性地吸收化合物PA1—PA5.相比于其他4种光敏剂,PA1表现出明显的杀菌性能,当PA1浓度增加为31.25μmol/L时,光照PA1对3种细菌的灭活率达100%.PA1对3种细菌的光动力灭菌效果最好,未来具有良好的使用前景.     

洋地黄毒苷诱导小细胞肺癌NCI-H446细胞增殖和凋亡的影响

应用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测洋地黄毒苷对NCI-H446细胞增殖的抑制效果;用AO-EB染色、DNA凝胶电泳分析以及AnnexinⅤ检测法检测细胞凋亡;用碘化丙啶(PI)染色测定其周期变化,利用激光共聚焦显微镜观察细胞内活性氧(ROS)和钙离子(Ca2+)的变化.结果显示洋地黄毒苷明显抑制NCI-H446细胞增殖,AO-EB染色、DNA电泳及AnnexinV检测法显示细胞有明显的凋亡现象,PI染色显示处于S期的细胞增多,激光共聚焦显微镜观察表明细胞内活性氧和钙离子浓度均升高.表明洋地黄毒苷能明显抑制NCI-H446细胞增殖,且细胞被阻滞在S期.细胞内活性氧和钙离子浓度的增加可能与其诱导细胞凋亡有关.     

葡萄籽原花青素诱导人肝癌HepG2细胞凋亡及自噬性死亡

目的:探讨原花青素对肝癌HepG2细胞的抑制作用及其可能的作用机制.方法:改良MTT法(WST-8法)及克隆形成抑制实验观察原花青素对肝癌HepG2细胞的生长抑制作用,碘化丙锭(PI)单染色检测细胞周期改变,Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡水平,激光共聚焦显微镜观察和Western blot...     

特异性siRNA对大鼠肝星状细胞TIMP-1表达的影响

观察金属蛋白酶组织抑制因子-1（TIMP-1）小干扰RNA真核表达载体转染肝星状细胞株HSC-T6后TIMP-1基因表达的情况。构建携带绿色荧光蛋白（GFP）基因的小干扰RNA真核表达载体pGCsi-U6／TIMP-1 shRNA,利用该载体介导四个特异性和一个非特异性的TIMP-1 shRNA,分别为TIMP-1 shRNA1、TIMP-1 shRNA2、TIMP-1 shRNA3、TIMP-1 shRNA4和TIMP-1 shRNA—NON。采用阳离子脂质体介导法转染HSC-T6细胞,激光共聚焦显微镜观察GFP表达,荧光实时定量PCR方法检测TIMP-1 mRNA表达情况。质粒转染HSC—T6细胞后,激光共聚焦显微镜观察转染组细胞内均见绿色荧光,未转染组未见绿色荧光;mRNA水平检测显示：与正常对照组相比,TIMP-1 shRNA1、TIMP—1 shRNA2和TIMP-1 shRNA4对TIMP-1基因表达较强的抑制作用,尤TIMP-1 shRNA1抑制作用最强（P〈0．01）。pGCsi—U6介导的TIMP-1 shRNA1能更加有效的抑制肝星状细胞中TIMP—1的表达。     

龙葵碱对HepG2细胞内[Ca2+]i的影响

探讨龙葵碱对HepG2细胞形态及细胞内[Ca~(2 )]i的影响,揭示龙葵碱诱导细胞凋亡的机制.以人肝癌细胞HepG2为研究对象,采用AO/EB双染HepG2细胞,激光共聚焦扫描显微镜观察细胞形态学改变,Fluo-3/AM单染HepG2细胞,激光共聚焦扫描显微镜观察细胞内[Ca~(2 )]i的改变.结果发现龙葵碱作用于HepG2 48h后,细胞形态出现典型的细胞凋亡形态;细胞内[Ca~(2 )]i浓度明显升高.表明龙葵碱升高细胞内Ca~(2 )浓度启动细胞凋亡机制.     

姜黄素联合光照对BGC -823细胞膜通透性及线粒体膜电位的影响

为了研究在光照和避光条件下姜黄素(CUR)对人胃腺癌BGC - 823细胞膜通透性及线粒体膜电位的影响,探讨CUR抑制BGC - 823细胞生长的机制,在体外培养的BGC - 823细胞加CUR后光照或避光处理24h,利用激光共聚焦显微镜(LSCM)检测线粒体膜电位变化,利用流式细胞仪(FCM)检测细胞膜通透性改变.结...     

工频磁场对离体细胞胞浆钙离子浓度的影响

研究了50 Hz工频均匀强磁场(0.097 T)对人低分化胃腺癌细胞株-SNU细胞和人淋巴细胞胞浆钙离子浓度的影响.将体外培养的SNU细胞和人淋巴细胞,施加50 Hz工频均匀强磁场(0.097 T),处理不同时间后,应用共聚焦显微镜检测胞浆内钙离子浓度.实验表明,给予工频均匀强磁场处理后,SNU细胞和人淋巴细胞胞浆内钙离子浓度均升高.     

佛手叶挥发油对HeLa细胞形态与结构的影响

探讨了佛手叶挥发油对HeLa细胞形态与结构的影响.采用噻唑蓝(MTT)法检测细胞活力,倒置显微镜、荧光显微镜和电子显微镜观察细胞形态与结构的变化,免疫荧光结合激光共聚焦显微镜观察微管的分布.结果表明:佛手叶挥发油能够抑制HeLa癌细胞的增殖,呈剂量和时间依赖性;不同浓度的佛手叶挥发油处理HeLa癌细胞24 h后,低剂量(200μg/mL)佛手叶挥发油使HeLa细胞皱缩,染色质凝集,出现凋亡小体,微管解聚,表现为典型的凋亡特征;中、高剂量(400和800μg/mL)佛手叶挥发油使HeLa细胞膜裂解,内容物外泄,细胞碎片增多,表明细胞已坏死.     

洛铂抑制鼻咽癌CNE-2细胞增殖及其机制的初探

目的:观察洛铂(LBP)对鼻咽癌CNE-2细胞增殖和凋亡的影响,并探讨其中机制.方法:将不同浓度的洛铂加入对数生长期的CNE-2细胞,采用倒置显微镜观察各细胞生长状态;四甲基氮唑蓝(MTT)法观察其对细胞的增殖抑制;共聚焦显微镜观察洛铂促凋亡作用;Western blot方法分析CNE-2细胞内Bcl-2蛋白表达变化.结果:共聚焦显微镜下观察洛铂作用CNE-2细胞后出现明显的凋亡学形态特征.MTT法显示洛铂能抑制细胞增殖,并呈浓度及时间依赖关系.Western blot结果显示洛铂能使CNE-2细胞Bcl-2蛋白表达水平下降.结论:洛铂能明显抑制CNE-2细胞增殖,诱导凋亡,可能与调节Bcl-2蛋白表达水平相关.     

血啉甲醚-光动力学疗法去除大鼠前列腺增生的实验研究

以丙酸睾酮诱导的大鼠前列腺增生为研究对象,观察光动力学疗法(PDT)对大鼠前列腺增生的治疗作用.研究结果表明:单纯激光照射或单纯注射光敏剂对大鼠前列腺增生无显著影响(P>0.05);大鼠经各PDT治疗组治疗后,前列腺体积均明显减小,前列腺指数明显下降,与动物模型组存在明显差异(P均小于0.01),说明光动力疗法对前列腺增生细胞具有杀伤和抑制生长作用.     

葡萄糖饥饿对HeLa细胞形态与结构的影响

为了探究葡萄糖饥饿对HeLa细胞形态与结构的影响,采用噻唑蓝法检测了细胞活力;用倒置显微镜、荧光显微镜和电子显微镜观察了细胞形态与结构的变化;采用激光共聚焦免疫荧光技术观察了细胞微丝与微管的分布.结果表明:葡萄糖饥饿能够抑制HeLa细胞增殖,破坏细胞骨架,改变细胞形态;使细胞皱缩、染色质凝集,出现凋亡小体,微丝微管解聚,表现出典型的凋亡特征,且细胞凋亡程度呈葡萄糖浓度依赖性和处理时间依赖性.总之,葡萄糖饥饿能抑制HeLa细胞活性,改变细胞形态,诱导细胞凋亡.     

小鼠T细胞发育相关基因RS21-C6的表达谱及其编码蛋白的细胞内定位

研究了小鼠T细胞发育相关基因RS21-C6的表达谱及其在细胞内的定位.提取小鼠8种组织及处于5个发育阶段的胸腺细胞总RNA,逆转录成cDNA后,利用RS21-C6基因特异性引物,观察了RS21-C6基因的表达;同时构建pEGFP-N3/RS21-C6重组表达载体,在激光共聚焦荧光显微镜下观察了细胞内荧光分布.RT-PCR结果表明RS21-C6基因在所检测的组织和细胞中除骨骼肌和CD4SP胸腺亚群外均有不同程度的表达.激光共聚焦荧光显微镜观察结果表明,RS21-C6-GFP(绿色荧光蛋白)融合蛋白表达在胞浆内,RS21-C6-GFP融合基因的瞬间和稳定表达均获得了相同结果.     

激光共聚焦扫描显微镜观测自噬小体变化的应用

文章探讨激光共聚焦扫描显微镜技术在检测低氧诱导小鼠心肌细胞损伤自噬小体变化的应用价值.在无菌条件下,取胚胎型小鼠心肌细胞备用.采用低氧环境+缺氧液方法诱导心肌细胞损伤并发生自噬现象作为实验组,正常环境下培养细胞的方法作为对照组.待心肌细胞长到一定程度后,分别利用激光共聚焦扫描显微镜和正置荧光显微镜对免疫荧光染色的自噬小体表达的LC3A/B蛋白情况进行观测并比较2种检测方法的优缺点.结果显示利用低氧环境+缺氧液方法诱导小鼠心肌细胞损伤并自噬小体形成是可行的.与正常对照组比较,低氧缺氧诱导小鼠心肌细胞损伤组(实验组)自噬小体呈高表达状态.与普通型正置荧光显微镜比较,激光共聚焦扫描显微镜成像速度快,一次可以获得多副图像且图像清晰.激光共聚焦扫描显微镜技术具有成像速度快、灵敏度高和精确度高等优点,可以实时、准确观测低氧诱导小鼠心肌细胞损失自噬小体的表达情况,具有重要临床应用价值.     

吴茱萸碱调控微管蛋白聚集阻滞HepG -2细胞周期

研究吴茱萸碱对人肝癌细胞HepG-2的细胞周期阻滞作用及其机制.MTT法检测吴茱萸碱(Evodiamine)对人肝癌HepG-2细胞的细胞毒作用;流式细胞仪分析吴茱萸碱对HepG-2细胞周期的影响;免疫荧光染色法,经激光共聚焦显微镜( CLSM)观察检测吴茱萸碱对HepG-2细胞内微管蛋白α-tubulin聚合形态的影...     

酞菁光敏剂抗小鼠宫颈癌的光动力学实验

探究可溶性酞菁光敏剂五聚赖氨酸-β-羰基酞菁锌对人宫颈癌细胞Hela和荷瘤小鼠的抗肿瘤效果.在670 nm、 1.5 J·cm~(-2)的光照条件下,五聚赖氨酸-β-羰基酞菁锌对人宫颈癌细胞具有明显杀伤作用(半抑制浓度IC_(50)为(30.5±3.1)nmol·L~(-1)),且该光敏剂在肿瘤细胞中的摄取与其孵育时间呈正相关;建立Hela宫颈癌小鼠模型,在670 nm、 30 J·cm~(-2)的激光照射条件下,该光敏剂在低剂量(0.84μg/20 g体质量, 0.3μmol·L~(-1))即对荷瘤小鼠的瘤体具有明显抑制作用;该光敏剂浓度为1.0μmol·L~(-1)时,荷瘤小鼠的瘤体几乎消失.研究为五聚赖氨酸-β-羰基酞菁锌进一步开发应用于临床宫颈癌的治疗提供依据.     

转铁蛋白-阿霉素复合物与HepG2细胞的作用机制

利用转铁蛋白受体介导的内吞作用,使转铁蛋白-阿霉素复合物(Tf-DOX)靶向作用于肿瘤细胞具有深远意义.文章利用荧光光谱确定了阿霉素对转铁蛋白具有荧光猝灭作用,且为静态猝灭.利用激光共聚焦显微镜观察到Tf-DOX可以靶向进入活的人肝癌细胞(HepG2)内,且5h时位于细胞质,24h时DOX解离进入细胞核.而同样条件,单独阿霉素5h已进入细胞核.利用流式细胞仪法检测了Tf-DOX进入细胞的转运机理,结果表明Tf-DOX是通过网格蛋白(Clathrin)介导、转铁蛋白受体决定的内吞机制进入细胞,具有温度、能量依赖性.体外培养条件下,利用MTT比色法检测Tf-DOX对HepG2细胞活力的影响,结果表明转铁蛋白-阿霉素体系保持较好的活性,相对单独阿霉素对细胞的杀伤力较强.这些结果表明转铁蛋白-阿霉素复合物具有明显的生物效应和潜在的生物医药价值.     

GGT1基因的真核表达载体构建及其表达定位

构建GGT1重组真核表达载体,观察GGT1在COS7细胞中的定位.利用PCR技术扩增GGT1全长基因,经HindⅢ和EcoR Ⅰ酶切后连接入pEGFP-N1真核表达载体.将构建完成的重组表达质粒转染入COS7细胞,利用激光共聚焦显微镜观察GGT1在细胞中的定位.构建载体经双酶切和序列测定证实重组载体包含有正确的GGT1编码序列.激光共聚焦显微镜观察到,整个细胞内弥散绿色荧光,绿色荧光分布于COS7细胞浆中,提示GGT1定位于细胞浆中.成功构建人pEGFP-N1-GGT1真核表达载体,检测到GGT1定位于哺乳细胞的细胞浆中,为GGT1的功能研究提供了线索.     

亚铁螯合酶抑制诱导细胞内原卟啉Ⅸ积聚的肿瘤荧光成像

目的:探讨靶向FECH的siRNA在肿瘤荧光成像中的作用.方法:设计并合成靶向FECH的siRNA,用脂质体转染剂Lipofectamine2000携带后转染H08910PM细胞,用RT-PCR半定量检测细胞中FECHmRNA的表达用荧光显微镜和激光共聚焦显微镜在体外检测H08910PM细胞的荧光强度.结果:siRNA...     

人脐静脉内皮细胞中C-型瞬时型感受器电位通道3RNA干扰质粒构建及筛选

为了探讨C-型瞬时型感受器电位通道3(TRPC3)在人脐静脉内皮细胞(HUVEC)中的作用,本实验针对GenBank中人TRPC3的cDNA序列设计合成短发卡RNA(shRNA),将其转染到HUVEC中,在激光共聚焦显微镜下观察细胞的转染效率,实时定量PCR和免疫印记检测TRPC3mRNA和蛋白表达及转染后的干扰效率。结果显示:(1)激光共聚焦显微镜下观察到绿色荧光,说明已成功将shTRPC3转入到HUVEC中;(2)转染48h后用G418进行稳定筛选后,TRPC3mRNA和蛋白表达均降低(P<0.05),干扰效率分别为71%和74%。由此可知,在HUVEC中成功构建了TRPC3干扰质粒。