鹅脱氧胆酸诱导细粒棘球蚴原头节凋亡作用机制的初步研究

目的初步探究鹅脱氧胆酸(chenodeoxycholic acid,CDCA)诱导细粒棘球蚴原头节凋亡的作用机制。方法采用鹅脱氧胆酸体外处理细粒棘球蚴原头节,0.1%伊红染色,倒置显微镜观察原头节的活力;Caspase-3试剂盒检测其酶活性变化;采用DCFH-DA染色法利用荧光酶标仪检测鹅脱氧胆酸作用2、4 d后原头节内活性氧(Reactive oxygen species,ROS)的荧光强度的变化;western blot技术检测Nrf2蛋白的表达;生物化学法测定细胞中谷胱甘肽过氧化物酶(Glutathione peroxidase,GSH-Px)和硫氧还蛋白过氧化物酶(thioredoxin peroxidase,TPx)酶活性的变化。结果体外应用500、1000、2000、3000μmol/L鹅脱氧胆酸能够抑制原头节体外生长,随着时间的延长,抑制作用逐渐增强;不同浓度鹅脱氧胆酸作用原头节24、48 h后caspase-3酶活性升高,随着时间的延长caspase-3酶活性增加越明显;不同浓度鹅脱氧胆酸作用原头节2、4 d后观察到原头节内活性氧(Reactive oxygen species,ROS)的水平升高(F=1631.77,P0.05),同时western blot检测发现Nrf2蛋白的表达降低(P0.05),并检测到抗氧化物酶谷胱甘肽过氧化物酶(F=756.033,P0.05)和硫氧还蛋白过氧化物酶(F=608.848,P0.05)的活性降低。结论鹅脱氧胆酸诱导细粒棘球蚴原头节凋亡可能是通过氧化应激途径起作用。     

AZD2014对体外细粒棘球绦虫原头蚴活性影响的研究

目的探讨双TOR抑制剂AZD2014在体外对细粒棘球绦虫原头蚴活性的影响。方法细粒棘球绦虫原头蚴分成6组进行体外培养,其中四组加入AZD2014使其浓度分别为200、100、50、25μmol/L;继续培养10 d,期间利用伊-红染色方法在倒置显微镜下观察原头蚴的活力,实验重复3次后,绘制原头蚴活力曲线;Western-blot检测100μmol/L的AZD2014培养原头蚴4 d后的p-Akt1、p-4EBP1、p-S6K1的表达量;Caspase-3试剂盒检测100μmol/L的AZD2014培养原头蚴4 d后的Caspase-3酶活性。结果 100μmol/L的AZD2014作用4 d后,原头蚴活性开始下降,存活率为(75.93%±7.28%);体外培养10 d后,100μmol/L组原头蚴活力仅为(24.03%±1.01%),200μmol/L组原头蚴活力为(2.40%±1.14%);100μmol/L的AZD2014培养4 d后,原头蚴蛋白因子p-Akt1、p-4EBP1、p-S6K1表达量明显下降;在100μmol/L的AZD2014培养原头蚴4 d后,其Caspase-3酶活性下降。结论 AZD2014在体外具有抗细粒棘球蚴原头蚴的作用,理论上,可做为临床上抗包虫的新型药物。     

多频聚焦超声波对细粒棘球蚴囊壁药物通透性的影响

将人工接种感染的小鼠腹腔细粒棘球蚴包囊90个,随机分为A~E 5组,分别用多频聚焦超声不同功率和组合方式进行超声照射.多频聚焦超声辐照后的各组包囊置于含1 00μg/mL阿苯达唑的RPMI 1640培养液中,经不同时间培养后,高效液相色谱法测定细粒棘球蚴囊内的药物质量浓度,以评价不同功率及辐照次数、辐照后含药培养液中不同培养时间对囊壁药物通透性的影响.结果显示:多频聚焦超声照射可以改变细粒棘球蚴囊壁的药物通透性.三频联合与单频相比,以及两次以上照射与单次照射相比,细粒棘球蚴囊内药物质量浓度差异均具有统计学意义.照射后包囊继续在含药培养基中培养,可进一步提高囊内药物质量浓度.本研究证实多频聚焦超声照射可使细粒棘球蚴囊壁药物通透性持续增加.多频联合超声作用的效果明显优于单频、多次照射优于单次照射.多频多次照射、适当延长包囊在药物中的培养时间能够最大程度地提高囊内药物质量浓度.     

胆汁对体外培养人细粒棘球蚴原头蚴生长发育的影响

目的探讨胆汁对体外培养人细粒棘球蚴原头蚴生长发育的影响。方法将人细粒棘球蚴原头蚴分别加入纯胆囊胆汁组(Ⅰ组)、RPMI-1640+肝内胆汁(2:1)组(Ⅱ组)及RPMI-1640组(Ⅲ组)中体外孵育。0.1%伊红染色在倒置显微镜下观察原头蚴的形态变化、活动度、顶泡形成情况、头节外翻及成囊发育等生长情况。结果Ⅰ组中95%原头蚴在第9天其外观及内部结构完全破坏;其在胆汁的刺激下第1天活动度达60%,约过半数的头节外翻,随着作用时间的延长,在第7天活动度逐渐降低,原头蚴在第6天后其头节外翻处于停滞状态,大部分原头蚴死亡。Ⅱ组中80%原头蚴在第14天仍能观察到清晰的外观及内部结构;该组原头蚴的活动度在第7天开始下降;头节外翻率随培养时间的增加逐渐增加。Ⅲ组中的原头蚴第14天仍可观察到具有较好的外观及清晰的内部结构;活动度随培养时间的延长而逐渐增加;该组中的原头蚴在第4天开始出现顶泡并随时间的延长出现顶泡的原头蚴数量逐渐增加;头节外翻率逐渐增加。通过连续培养观察,Ⅰ组中的原头蚴无成囊发育;Ⅱ组培养的大部分原头蚴体积缩小,头节内陷,仅少量培养的原头蚴成囊发育,大部分原头蚴随培养时间的延长走向死亡;Ⅲ组中原头蚴逐渐向囊方向发育,且数量逐渐增多。结论 (1)纯胆汁不能在短时间内灭活原头蚴,但随着作用时间的延长原头蚴的活性降低;(2)胆汁可以抑制原头蚴的成囊发育,但在胆汁存在环境下仍有原头蚴成囊。     

3-取代苯硫醚氮唑新衍生物的合成及体外抗真菌活性研究

以间二氟苯为起始原料,经傅-克酰基化、取代、环氧化和环氧乙烷开环四步反应,合成了22个3-取代苯硫醚氮唑新衍生物4a~4v,结构均经ESI-MS和1H NMR确证.采用微量液基稀释法筛选了4a~4v对7株临床常见真菌的体外抑菌活性.结果表明,大部分化合物对7株临床真菌均表现出较好的抑制活性.其中,4o和4p对白念球菌(Y0109)的抑制作用最好(MIC80为0. 125μg/m L),是特比萘芬(TBF,32μg/m L)的256倍,是氟康唑(FCZ,16μg/m L)的128倍.     

儿茶素、槲皮素和葡萄籽原花青素的协同抗辐射作用

通过建立体外AHH-1淋巴细胞辐射损伤模型,研究儿茶素、槲皮素和葡萄籽原花青素之间的协同抗辐射作用.结果表明:当儿茶素质量浓度为10μg/mL和槲皮素质量浓度为5μg/mL时,儿茶素质量浓度为10μg/mL和原花青素质量浓度为15、25、30μg/mL时,槲皮素质量浓度为5μg/mL和原花青素质量浓度为25μg/mL时,槲皮素质量浓度为10μg/mL和原花青素质量浓度为20、25μg/mL时,两物质间皆具有协同抗辐射作用.当儿茶素质量浓度为10μg/mL时,槲皮素质量浓度为15、20μg/mL以及原花青素质量浓度为10、20μg/mL时,儿茶素分别与槲皮素、原花青素存在拮抗作用.当槲皮素质量浓度为5μg/mL和原花青素质量浓度为20μg/mL时,当槲皮素质量浓度为10μg/mL和原花青素质量浓度为15μg/mL时,当槲皮素质量浓度为15μg/mL和原花青素质量浓度为15、20、25μg/mL时,原花青素与槲皮素皆存在拮抗作用.因此,在适量浓度范围内儿茶素、槲皮素和原花青素之间具有协同、拮抗抗辐射作用,这一研究发现对开发抗辐射功能食品具有指导意义.     

抗氧化剂对小鼠腔前卵泡及其卵母细胞体外发育的影响研究

通过使用改良的TCM199无血清培养系统,在96孔细胞培养板中,每孔放入一个腔前卵泡等条件下,探索添加物抗氧化剂维生素C对小鼠腔前卵泡卵母细胞体外生长发育的影响,旨在摸索一套适合小鼠腔前卵泡体外生长发育的培养体系.结果表明:随着浓度的增加,卵泡和卵母细胞的直径都不同程度地有所增长,其中50μg/m L浓度组在卵泡培养相同时间下,卵泡和卵母细胞的增长值相对于其他浓度组略大些,但各浓度组之间无论是卵泡直径增长值还是卵母细胞直径增长值都不存在显著性差异(P0.05).培养到第6天时,50和100μg/m L浓度组卵泡存活率最高,为59.5%,且50μg/m L浓度组第一极体排出率最高,为2.38%,但发生生发泡破裂率次于150μg/m L浓度组.可得结论:在改良的TCM199无血清培养系统中,添加50μg/m L维生素C有利于腔前卵泡卵母细胞的生长,而添加150μg/m L维生素C有利于生发泡破裂.     

黄秦艽活性提取物对雪上一枝蒿所致PC12细胞毒性的保护作用研究

目的探讨黄秦艽中活性成分D1对雪上一枝蒿总生物碱(CFA)所致的PC12细胞损伤的保护作用及机制。方法用噻唑蓝(MTT)比色法测定细胞活力,试剂盒测定乳酸脱氢酶(LDH)活力,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测Bcl-2表达水平。结果 CFA孵育24 h可剂量依赖性降低PC12细胞存活率。D1(6.25~25μg/m L)预孵育2 h可显著抑制CFA所致的PC12细胞损伤和LDH释放,当D1浓度为6.25μg/m L和25μg/m L时,Bcl-2蛋白表达水平明显上升。结论 D1可通过修复损伤的线粒体及调节相应凋亡蛋白表达保护CFA所致的PC12损伤。     

苯唑西林分子印迹聚合物的制备及其分子识别特性研究

为获得β-内酰胺类抗生素多残留检测样品净化和富集预处理所需选择性固相萃取填料,本文对采取沉淀聚合方法制备苯唑西林印迹微球进行研究,并对合成的微球进行分子识别特性研究。在反应温度60℃,反应时间24h条件下,优化的合成反应参数是:模板苯唑西林、功能单体丙烯酰胺与交联剂二甲基丙烯酸乙二醇酯的用量分别为1、4和20mmol(物质的量比为1∶4∶20),溶剂甲醇100mL,引发剂偶氮二异丁腈5mg。合成出的苯唑西林印迹微球具有两类性质不同的吸附位点,低亲和性吸附位点平衡常数K和最大表观吸附量Q分别为10.846mmol/L和418.23μmol/g,高亲和性吸附位点平衡常数K和最大表观吸附量Q分别为2.627mmol/L和137.68μmol/g。印迹聚合物重复使用次数不少于9次,对β-内酰胺类抗生素青霉素-G、头孢哌酮和头孢唑林的吸附量达模板吸附量的95%、58%和96%,对加标牛奶样品的净化效果表明其具有直接用作固相萃取柱填料的潜力。     

紫杉醇对体外大鼠肝细胞影响的实验研究

目的:在通过观察紫杉醇对体外培养大鼠肝细胞的影响来探讨紫杉醇自身毒副作用.方法:采用四唑盐(MTT)比色法及形态学方法观察紫杉醇在不同质量浓度下作用不同时间对肝细胞的影响;采用Hoechst 33258荧光染色法观察紫杉醇作用后,肝细胞的形态变化.结果:质量浓度分别为5、10、20、40、80μg/L的紫杉醇分别作用24、48、72 h后,随着质量浓度的增加、作用时间的延长对体外培养的肝细胞损伤加大、抑制率增加;相同质量浓度的紫杉醇不同作用时间的抑制率无时间效应关系;24 h的IC50质量浓度为28.5μg/L,并能诱导肝细胞发生凋亡.结论:紫杉醇在一定的质量浓度和长时间作用下对肝细胞有细胞毒作用.     

白桦脂酸对Cx32组成的细胞缝隙连接功能的影响

目的:体外观察白桦脂酸对天然表达缝隙连接蛋白32(Cx32)的BRL-3A细胞的细胞缝隙连接(GJ)功能及Cx32蛋白表达水平的影响.方法:SRB法检测不同质量浓度白桦脂酸对BRL-3A细胞的毒性;细胞接种荧光示踪法观察不同质量浓度白桦脂酸对GJ功能的影响;Western blot方法检测白桦脂酸影响GJ功能的质量浓度对Cx32蛋白表达水平的影响.结果:白桦脂酸在0~1μg/m L质量浓度对BRL-3A细胞无毒性作用;白桦脂酸(0.01~1μg/m L)质量浓度依赖性地降低GJ功能,但对Cx32表达无影响.结论:白桦脂酸在0.01~1μg/m L质量浓度范围内,降低BRL-3A细胞的GJ功能;这种作用与Cx32蛋白的表达水平无关.     

大肠埃希菌对细粒棘球蚴活性影响的体外研究

目的 研究细粒棘球蚴与特定浓度大肠埃希菌体外共培养的条件下活性、形态随时间的变化，以及部分参与通路。方法 将羊源性原头蚴重悬计数，分为空白组、0.5麦氏浓度大肠埃希菌组(实验组),并以12、24、48、72、96 h为时间节点，使用0.1%伊红染液按照体积1∶1的比例染色2 min后显微镜下观察并计算两组原头蚴的存活率；使用活性氧试剂盒在上述时间点检测两组原头蚴体内ROS水平；在12、48、96 h分别检测Caspase-3、9;Bax、Bcl-2、Nrf2蛋白的表达水平。结果 实验组原头蚴存活率随时间延长降低，在96 h降至为0%;两组原头蚴体内活性氧检测显示：实验组ROS水平明显提高，12 h最高，差异具有统计学意义(T=11.638,P<0.05),在72 h ROS水平与空白组相近；Western blot实验表明，凋亡蛋白Bax(T=4.997,P<0.05)、Caspase-3蛋白(T=6.118,P<0.05)、Caspase-9蛋白(T=3.435,P<0.05),实验组的蛋白水平大于空白组，有统计学意义。抗凋亡蛋白Bcl-2,实验组的蛋白水平小...     

烯菌酮对小鼠前列腺癌细胞增殖及其脂质过氧化物含量和抗氧化物酶活性的影响

为研究烯菌酮对小鼠前列腺癌(RM-1)细胞增殖及其脂质过氧化物和抗氧化物酶的影响,实验采用了四唑盐法(3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide,MTT)检测了RM-1细胞增殖活力,采用比色法测定了其细胞内抗氧化物酶活性和脂质过氧化物(Maleic Dialdehyde,MDA)含量的改变。结果表明,0.01μmol/L、1μmol/L和100μmol/L三个浓度的烯菌酮作用24和48 h,RM-1细胞增殖活力均明显低于对照组。100μmol/L烯菌酮作用48 h,小鼠前列腺癌细胞中脂质过氧化物含量明显高于对照组及0.01μmol/L和1μmol/L两个浓度组。烯菌酮作用24、48和72 h,RM-1细胞中总超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(Glutathione peroxidase,GSH-PX)活性随烯菌酮浓度增加而增加,具有浓度依赖性。0.01μmol/L、1μmol/L和100μmol/L烯菌酮作用24 h时,RM-1细胞中过氧化氢酶(Catalase,CAT)活性明显低于对照组,但随着烯菌酮浓度增加,CAT活性明显增加。100μmol/L烯菌酮作用48和72 h时,RM-1细胞中CAT活性明显高于其他三组。这说明,烯菌酮能抑制RM-1细胞增殖活力,促进其细胞内脂质过氧化物的含量和抗氧化物酶的活性。     

不同杀菌剂对小麦赤霉病菌的毒力测定与田间药效试验

测定了6种杀菌剂对小麦赤霉病菌的毒力与田间病害防效,结果表明:氰烯菌酯和多菌灵对小麦赤霉病菌的毒力强,抑制中浓度EC50分别为0.23μg/m L和0.25μg/m L;戊唑醇的抑菌作用也较强,EC50为0.54μg/m L,甲基硫菌灵和三唑酮的抑菌作用明显较差.田间药效试验结果显示,25%氰烯菌酯500倍稀释液初花期喷雾对小麦赤霉病的防效达到83.84%,小麦千粒重比对照增加72.29%;50%多菌灵800倍稀释液处理防效达到79.43%,千粒重比对照增加74.87%.氰烯菌酯和多菌灵对小麦赤霉病的防效和保产效果均明显高于甲基硫菌灵、三唑酮、戊唑醇和嘧菌酯.     

3，4-二羟基氰苯对蘑菇酪氨酸酶的抑酶和抑菌作用

研究3,4-二羟基氰苯对酪氨酸酶的抑制作用和对几种微生物的效应.结果表明:3,4-二羟基氰苯对蘑菇酪氨酸酶活力有明显的抑制作用,其效应除了对稳态酶活力有较强的的抑制作用外,对酶促反应的迟滞时间也有延长作用.10.0μmol/L的3,4-二羟基氰苯可使稳态酶活力下降53.5%,并使迟滞时间从18 s延长到225 s.3,4-二羟基氰苯对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌3种细菌和真菌白色假丝酵母均有明显的抑制作用,其对细菌的最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC)均分别为500和1 000μg/mL,对白色假丝酵母的MlC和MFC分别为1 000和2 000 μg/mL.本研究为3,4-二羟基氰苯在酪氨酸酶抑制剂中的应用提供实验理论依据.     

纳米二氧化硅对人张氏肝细胞毒性作用研究

目的:以纳米二氧化硅(SiO2)为研究对象,探讨其对人张氏肝细胞(Chang liver cells)的毒性作用.方法:透射电子显微镜观察纳米SiO2粒径、形态及分散性.体外培养人张氏肝细胞,将细胞分为对照组及纳米SiO2暴露组.纳米SiO2暴露浓度分别为12.5、25、50、100、200(mg·L-1),作用外周全血细胞和张氏肝细胞24 h后,倒置显微镜下观察细胞形态及结构;四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞生存率;DAPI染色观察细胞核形态;TRITC-Phalloidin染色观察细胞骨架微丝结构.结果:与正常对照组相比,纳米SiO2引起人张氏肝细胞存活率明显降低(P0.01);细胞胞体产生皱缩、变圆,细胞核固缩并出现空泡化,细胞骨架微丝结构破坏.结论:纳米SiO2作用于人张氏肝细胞会抑制细胞增殖,造成细胞形态改变,并呈现剂量依赖性.     

响应面法优化恩替卡韦微球的制备及体外释药

为了开发抗乙肝病毒药物恩替卡韦长效缓释制剂,采用S/O/W乳化-溶剂挥发法制备恩替卡韦微球,并使用Box-Behnken响应面法对处方参数进行优化。选取PLGA质量浓度、PVA体积分数、水油比作为自变量,以载药量、包封率、粒径为响应。得到的最优处方参数为:PLGA质量浓度为0.13 g·m L-1,PVA体积分数为1.2%,水油比为91∶1,载药量为19.23±0.32%,包封率为76.91±1.28%,平均粒径为84.5μm。对优化后的微球的形貌、体外释药行为进行了评价,扫描电子显微镜显示微球呈球形,结构致密,表面光滑。微球的体外释药行为说明药物是以一级动力学模型释放的,缓释可以达到59 d。结果表明,Box-Behnken响应面法可提供合适的恩替卡韦微球处方,制备的微球具有很好的缓释效果,明显延长药物作用时间。     

高结晶度聚酰胺6多孔微球的制备及其表征

以聚酰胺6/间甲酚为溶液,无任何添加剂条件下,通过热致相分离(TIPS)法制备了高结晶度聚酰胺6多孔微球,微球由中心向外辐射生长的纤维组成。研究萃取剂、聚合物浓度、淬火温度和淬火时间等因素对材料形貌影响。实验结果表明:水为萃取剂得到粗纤维或颗粒,乙醇为萃取剂得到多孔微球。偏光显微镜表明该多孔微球为球晶。淬火时间0～15 min得到了直径为(0.413±0.074)μm纤维,淬火时间60～240 min得到了多孔微球。随着淬火时间延长,微球变得更加均一、规整,且微球直径由(19.14±3.62)μm增加到(30.53±3.71)μm。聚酰胺6多孔微球的孔隙率和比表面积高达95.53%和31.26 m~2/g。5℃和10℃淬火得到纤维状、芽片状或捆束状,而15℃淬火得到多孔微球。浓度从3wt%增加到7wt%时,多孔微球的直径由(15.54±2.11)μm增加到(23.21±3.32)μm。聚酰胺6多孔微球的结晶度最高达62.1%。独立形态球晶(多孔微球)为多孔材料增加了一种新形态,并可为其他结晶或非结晶性高分子独立形态的纳米纤维球晶材料的构建提供机理和技术参考。     

复方党参多糖提取液对成纤维细胞SOD活性的影响

目的探讨复方党参多糖提取液对成纤维细胞SOD活性的影响.方法应用水提醇沉法制备复方党参多糖提取液,应用苯酚-硫酸法测定多糖含量.将不同浓度的复方党参多糖药液加入成纤维细胞中进行体外培养,并测定细胞培养液中超氧化物歧化酶的活力.结果复方党参多糖(m(党参)∶m(茯苓)∶m(黄精)=3∶2∶1)浓度为0.25 g/L时,对体外培养的成纤维细胞SOD活力有显著影响(P0.01).结论复方党参多糖提取液具有一定的抗氧化活性,可为探讨其体内抗氧化作用机制提供依据.     

青风藤正丁醇萃取物对肝癌细胞增殖影响的研究

为验证青风藤正丁醇萃取物(BESA)体外抗肝癌活性,研究了BESA对人肝癌细胞株HepG2、SMMC-7721形态变化、细胞周期、细胞凋亡和细胞增殖的影响。结果显示BESA对HepG2、SMMC-7721肝癌细胞均有抑制作用,其半数抑制浓度(IC50)分别为18.23μg/m L,23.45μg/m L,且呈剂量效应关系;经BESA处理后,HepG2细胞形态变化很大,细胞出现核皱缩、贴壁性差、细胞裂解等现象,以20μg/m L的BESA处理HepG2细胞48 h后,流式细胞术检测到BESA对HepG2细胞周期的干预能力不强;但在诱发HepG2细胞发生凋亡方面效果明显,说明BESA能诱导HepG2细胞的凋亡达到抑制肿瘤细胞增殖的作用。