碱裂解提取质粒DNA的改进方法

实验室中常用的质粒提取方法是碱裂解法.一般碱裂解法提取质粒相对耗时长,而且需要冰浴,条件较为严格,本文尝试对碱裂解法进行改进,即在控制菌体量的前提下连续加入溶液Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ,进行质粒提取,简化了操作步骤,缩短了实验时间(由150 min左右缩短为110 min以内),质粒收率和质量不变.     

枯草芽孢杆菌突变株IA857高效转化方法的研究

【目的】研究比较枯草芽孢杆菌突变株IA857高效转化的最优方法。【方法】以质粒pHCMC04(大小为8089bp)转化突变型枯草芽孢杆菌IA857,分别用电转化法、原生质体法、电击法诱导的原生质体法、Spizizen低盐环境感受态转化法(简称S法)、低盐环境形成饥饿感受态法及其改良方案在其它突变菌株的试验方法(简称C法)进行实验,通过比较优化得出最优转化方法。【结果】采用S法转化枯草芽孢杆菌突变株IA857,质粒加入量为70ng时,转化后直接摇床培养1h转化率最高达到1.2×104 CFU/μg DNA,可以满足枯草芽孢杆菌高效转化的要求。【结论】得出了枯草芽孢杆菌突变株IA857最优转化方法并提出转化枯草芽孢杆菌的基本框架。     

大肠杆菌质粒DNA不同提取方法的比较

实验采用简化的碱法少量提取法、简便快速的煮沸法及试剂盒法提取质粒 p CB30 2 -3.并通过一对特异引物对质粒 DNA进行 PCR(聚合酶链式反应 )扩增 ,分别对各种方法所提取的质粒 DNA及其 PCR扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳分析 ,结果表明碱法少量提取法和试剂盒法所提取的质粒 DNA纯度和产量高 ,且重复性好 ,达到了分子生物学实验要求 .其中简化的碱法少量提取法具有结果稳定和经济的特点 ,非常适合大多数实验室使用 .     

一株耐盐细菌的鉴定及其耐盐性的初步研究

从皖北砀山盐碱地中分离到一株耐盐细菌,该菌在肉汤培养基上可耐盐至7％,在基本培养基上可耐至3％．革兰氏阳性杆菌,具芽孢,芽孢表面有明显纵状突起。孢囊膨大,周生鞭毛,接触酶阳性,65℃不生长,可以葡萄糖为底物产酸产气,G C含量为52．7mol％,根据以上特性,检索鉴定该菌为浸麻芽孢杆菌(B．macerans)并对其质粒进行了提取和消除实验,证明质粒大小约为t3Kb。耐盐性状与质粒关系不大．同时对菌体裂解物作了SDS—PAGE凝胶电泳,证实在高盐(5％)情况下比低盐(0．5％)情况下的电泳图谱多出一条蛋白质带．此外还研究了耐盐性与培养基成分之间的关系．     

碱裂解法提取质粒DNA方法的改进

对碱裂解法提取质粒DNA的方法进行了一些改进 ,在室温下裂解菌体和变性DNA ;用NH4 Ac和LiCl同步沉淀除去样品中的蛋白质和RNA ,降低了对超螺旋质粒的剪切作用 ,得到高质量的质粒DNA。     

大蒜、洋葱提取液在防治香菇常见病害细菌的应用研究

为研究大蒜、洋葱提取液在香菇常见病害细菌防治中的应用。采用溶剂提取法提取大蒜、洋葱抑菌活性物质，测定提取液及其混合液的抑菌效果并应用于香菇菌种探究其对香菇生长的影响。结果显示，大蒜提取液和大蒜、洋葱提取混合液对枯草芽孢杆菌、蜡样芽孢杆菌、荧光假单胞菌均有抑菌作用，洋葱提取液对枯草芽孢杆菌、蜡样芽孢杆菌有抑菌作用，对荧光假单胞菌无抑菌作用，提取液抑菌效果为大蒜提取液>大蒜、洋葱提取混合液>洋葱提取液；大蒜提取液对3种香菇生长均有抑制作用，洋葱提取液在高浓度时才对3种香菇有明显抑菌作用，在1.25～20 mg/mL时，对香菇CICC14900有促生长作用。试验结果表明，大蒜、洋葱提取液均有抑菌作用，可作为天然抑菌剂开发应用；洋葱提取液具有改良香菇生长培养基的潜力。     

嗜碱芽孢杆菌NTT89启动子的克隆及其表达

报导了启动子探测质粒ｐＫＫ２３２－８为载体克隆嗜碱芽孢杆菌ＮＴＴ８９启动子的研究，用限制性内切酶ＨｉｎｄⅢ分别消化嗜碱芽孢杆菌ＮＴＴ８９染色体ＮＤＡ和质粒ｐＫＫ２３２－８，在体外重组，转化大肠杆菌ＤＨ５α感受态细胞，在含氨苄青霉素和氯霉素的选择性性平板上筛选转化子，结果从ＮＴＴ８９染色体ＤＮＡ中克隆到一系列带有启动子活性的ＤＮＡ片段，并在大肠杆菌中得到表达，这些转化子抗氯霉素水平在３４－５００ｍｇ     

黔产生黄精多糖的抑菌活性研究

目的:探究贵州生黄精多糖的体外抑菌作用.方法:采用石油醚脱脂后超声提取再纯化得到黄精多糖,以白色念珠菌、金黄色葡萄球菌、蜡样芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌为抑菌试验对象,通过纸片法,探究黔产生黄精多糖对这五种菌的抑菌效果.结果:实验表明黔产生黄精多糖对五种供试菌株均有明显的抑菌作用,抑菌效果:巨大芽孢杆菌＞解淀...     

硫酸软骨素提取工艺优化及抑菌活性研究

实验以硫酸软骨素得率为指标选择超声波提取时间、碱质量浓度、碱性蛋白酶添加量和胰蛋白酶添加量4个因素结合响应曲面优化设计最佳提取方案,并选取大肠杆菌、枯草芽孢杆菌进行抑菌实验,采用平板计数法,确定其抑菌效果以及最低抑菌浓度.研究结果显示,超声波辅助碱-双酶法提取硫酸软骨素的最佳工艺条件为:料液比为1∶15(g/m L),碱添加量为30 g/L,提取温度50℃,超声时间为40.6 min、碱性蛋白酶添加量为3.01‰、胰蛋白酶添加量为3.53‰,硫酸软骨素得率为18.88%.抑菌实验表明硫酸软骨素对大肠杆菌、枯草芽孢杆菌有抑制作用,最低抑菌浓度均为200 mg/m L.     

含α-乙酰乳酸脱羧酶基因重组酿酒酵母的啤酒发酵

利用E .coli和酿酒酵母的穿梭质粒pYES2为载体 ,将地衣芽孢杆菌α 乙酰乳酸脱羧酶基因导入酿酒酵母中 ,构建了重组质粒pYEA ,实现了α 乙酰乳酸脱羧酶基因在酵母菌中的表达 .α 乙酰乳酸脱羧酶基因在酵母菌中的表达与菌体生长有关 .pYEA质粒在无选择压力的发酵条件下 ,仅能保持一定的稳定性 ,并具有降解α 乙酰乳酸的能力 ,但丢失率比较高 .     

建立吸附动力学方程的"多化一"方法

建立吸附动力学方程的关键是求出吸附动力学方程(如Elovich方程qt=A B lnt)中的参数A和B.该文提供了一种建立吸附动力学方程的新的"多化一"方法,即用作图软件GRAPHER对不同浓度时的数据进行拟合,求出各浓度时的吸附动力学方程中的参数A1,A2,A3,A4和B1,B2,B3,B4;再分别用这两组数据对浓度作图,求出用浓度表示的A和B,代入所选取的吸附动力学方程中即得最终所要建立的吸附动力学方程.以某放射性废物处置预选场址土壤对锶的吸附动力学方程的建立为例,与常用的最小二乘法比较可见,该方法更简单易行,准确度也较高.     

A simple, economical method of converting gene expression products of insulin into recombinant insulin and its application

A method, by which the gene expression product of recombinant single chain insulin can be converted into insulin by directly digesting with trypsin, has been established. This method has been used in process of porcine insulin precursor (PIP), [B16Ala]PIP and [B26Ala]PIP into (desB30)insulin, (desB30)[B16Ala]insulin and (desB30)[B26Ala]insulin, respectively, and all of them retain full biological activity of that of their corresponding parent, recombinant human insulin, [B16Ala]insulin and [B26Ala]insulin. The results further demonstrate that the C-terminal residue of B chain is not necessary for insulin's biological activity. Compared with the method of transpeptidation, this method is simple, with a high yield, and avoids the use of organic reagents, and in comparison with the trypsin/carboxypeptidase method, it omits the use of carboxylpeptidase. Besides, (desB30)[B16Ala]insulin and (desB30)[B26Ala]insulin still remained without self-association property as that of their parents, which demonstrate that they are monomeric insulin. So they can be used for substituting for monomeric insulin, [B16Ala]insulin and [B26Ala]insulin, in clinical applications.     

用矢量合成法测量流动控制结晶器的磁场

由霍尔效应基本关系式,磁感应强度B可以分解为坐标轴向量Bx和By·利用这个原理和传统的磁场测试仪器CT3型特斯拉计,开发出一种新型的磁场测试方法矢量合成法·与传统的磁场测试方法相比,该法不仅能测试出磁场磁感应强度的大小,而且能同时测出其方向·测试结果表明,用该法所测得的流动控制结晶器磁场分布特性,很好地描绘了磁感应强度的实际分布情况·该法适用于测试恒稳磁场·     

8B／10B解码器设计

介绍了8B／10B解码技术，提出了一种简单、实用的8B／10B解码器的实现方法。它能把接收到的10B数据还原为原始的8B数据或特殊字符，还加入了数据输出通路选择电路、特殊字符判定电路、数据极性运算电路、校验数据电路和违规码类型判定电路。为得到高速的解码处理速度，电路设计中采用数据解码并行处理的拓扑结构来实现。     

乙基罗丹明B萃取光度法测定痕量镓

系统研究了乙基罗丹明Ｂ萃取光度法测镓的条件，并与罗丹明Ｂ和丁基罗丹明Ｂ法进行了比较，拟定了钒钛磁铁矿及其冶炼渣中痕量镓的分析新方法。     

碳化硼颗粒表面化学镀镍

对非金属B4CP表面化学镀镍前的活化工艺进行了研究,提出了NaCl活化工艺,在B4CP表面制备了镀镍层.镀层能谱分析及扫描电镜图片表明:在B4CP表面上得到了均匀、致密的镍包覆层,镀覆层含镍和磷元素.     

一种基于B方法和构件技术的形式化开发方法

构件技术和形式化方法是解决软件危机和提高软件开发效率问题的关键。在分析了构件技术、B方法、XML和XSLT后,本文提出了一种基于B方法和构件技术进行形式化开发的方法,并示例说明。     

面向截面测量数据B样条曲面光顺拟合及其精度计算

分析了B样条曲线的光顺拟合方法，针对按截面测量所得数据，将B样条曲线的光顺拟合方法拓展到B样条曲面的光顺拟合，该方法能够适应各截面曲线上数据点数的不同，方法简单、易行．给出了曲面拟合精度分析的数学模型，数值计算表明，该方法效率较高．     

一类组合群论问题

利用组合的方法对一类B(n,k)群进行刻画, 得到了B(6,22),B(6,23),B(6,24),B(7,29),B(7,30)和B(8,37)群的描述.     

基于模糊数学和AHP法的B2B平台服务链研究

在知识流理论的基础之上,明确了B2B平台服务链上的各节点企业,进而创造性地构建了B2B平台服务链模型。在专家访谈的数据支持下,利用模糊数学思想形成了一种B2B平台服务链上的节点企业知识合作伙伴优化选择方法,最后,利用AHP法对B2B平台服务链服务水平的影响因素进行层次分析,结果表明:资源强度、权威性、操作性对服务水平的影响作用最为显著,设计性、响应速度的影响作用较为明显。