大肠杆菌质粒DNA不同提取方法的比较

实验采用简化的碱法少量提取法、简便快速的煮沸法及试剂盒法提取质粒 p CB30 2 -3.并通过一对特异引物对质粒 DNA进行 PCR(聚合酶链式反应 )扩增 ,分别对各种方法所提取的质粒 DNA及其 PCR扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳分析 ,结果表明碱法少量提取法和试剂盒法所提取的质粒 DNA纯度和产量高 ,且重复性好 ,达到了分子生物学实验要求 .其中简化的碱法少量提取法具有结果稳定和经济的特点 ,非常适合大多数实验室使用 .     

桑树遗传转化技术中抗生素的浓度优化研究

调查了抗生素对根癌农杆菌介导的桑品种“新一之濑”遗传转化不同培养阶段外植体生长、分化或生根的影响及其对农杆菌的抑制效果 ,并确定 :在叶盘 (或茎尖 )转化筛选培养阶段 ,Kan (卡那霉素 )和 Cab (羧苄青霉素 )适宜浓度分别为 3 0～ 40 mg/ L和 2 0 0～40 0 mg/ L (或 6 0～ 80 mg/ L和 2 0 0～ 6 0 0 mg/ L ) ,在抗性芽继代 (或生根 )培养阶段 ,Kan和Cab分别为 40～ 5 0 mg/ L和 1 0 0～ 2 0 0 mg/ L (或 5～ 1 0 mg/ L和 5 0～ 1 0 0 mg/ L) .Cef(头孢霉素 )对桑树各种外植体的影响效果与 Cab相似 ,但两者的抑菌效果因农杆菌菌株、外植体类型以及培养阶段的不同而存在差异 ,用含 Kan、Rif(利福平 )和 Str(链霉素 )的 LB培养基浸渍叶盘则出现分化率下降、褐化死亡较严重的现象 .