卵母细胞减数分裂和受精过程中MPF和MAPK的作用和相互调节

在卵母细胞减数分裂成熟和受精过程中,MAPK级联信号途径和MPF起着关键性的作用.这两种蛋白激酶信号途径以及它们之间协调的相互作用影响着整个动物界卵母细胞减数分裂成熟和受精过程,包括促进生发泡破裂、抑制减数分裂过程中的DNA复制、调节染色体的分离、维持MII期阻滞、诱发第二次减数分裂恢复等.文中对卵母细胞减数分裂和受精过程中MPF和MAPK的作用和相互调节进行了综述.     

富勒烯及其衍生物对小鼠卵母细胞成熟和激活的作用

为探索富勒烯及其水溶性衍生物对哺乳动物卵母细胞减数分裂的作用,使用富勒烯膦酸衍生物(2P)、富勒烯-PVP和富勒醇作用于体外培养的小鼠GV期卵母细胞和超排卵母细胞,通过观察第一极体排出率和原核形成率以判断卵母细胞的成熟和激活,并探讨光照对这一作用的影响.结果表明,在光照和非光照下,富勒烯的PVP水溶液、富勒醇对卵母细胞的成熟没有明显影响,而2P在光照下对卵母细胞的成熟和孤雌激活具有明显抑制作用,其作用有浓度依赖性.     

合浦珠母贝受精细胞学观察

用醋酸－地衣红染色制片的方法对合浦珠母贝卵子减数分裂和受精过程进行了详细的细胞学观察。精子入卵前，卵子停留于第一次减数分裂中期。精子入卵后，卵子开始成熟分裂，在海水温度２２℃的条件下，授精后２２ｍｉｎ及３９ｍｉｎ绝大部分卵子分别完成第一次减数分裂和第二次砬数分裂，排出第一极体和第二极体，雌雄原核分别形成，其染色体逐渐凝集，形成两组染色体，最后在卵裂的赤道板上联合，７１ｍｉｎ后，大部分卵子完成第一次     

北京油葫芦卵子发生的观察

对北京油葫芦(Teleogryllus emma Ohmachi & Matsuura)卵子发生过程进行了系统观察和研究.结果表明,成虫期卵子发生可明显的分为卵母细胞分化、生长及卵黄形成三个时期,并可分为七个阶段.第一阶段,卵母细胞位于卵原区,进行第一次减数分裂的前期.第二阶段,卵母细胞核内核仁消失,滤泡上皮细胞开始分化.第三阶段,滤泡上皮细胞有丝分裂形成单细胞层包围在卵母细胞外,之后滤泡上皮细胞形成双核的柱状体.第四阶段,卵母细胞胞质的周缘有泡状小体出现,随后卵黄小颗粒开始在胞质周缘沉积.第五阶段,卵母细胞积累大量卵黄物质,胚泡膜界限变的模糊.第六阶段,卵黄积累完成,胚泡消失,滤泡上皮细胞又成为扁圆形.第七阶段,卵黄膜和卵壳形成,卵子发育成熟.     

第一次减数分裂期小鼠卵母细胞的化学去核

过免疫荧光染色法确定了小鼠第一次减数分裂的进程,在此基础上分别用脱羧秋水仙碱和放线菌酮处理成熟培养的小鼠卵母细胞,抑制其纺锤体极间微管的延长和降低成熟促进因子的浓度,使其核物质随极体全部排出.结果表明:(1) 卵母细胞从有腔卵泡中分离时处于生发泡期,可见核仁;成熟2h内则全部发生生发泡破裂;培养5h,90%到达第一次减数分裂的前中期;培养8h,则33.3%处于中期;71.4%的细胞在成熟12h后发育为后期;第二次减数分裂的中期则于成熟培养15h发生.(2) 于成熟的不同时间取卵母细胞-卵丘细胞复合体进行去核处理后发现,体外成熟培养5h(即卵母细胞处于第一次减数分裂前中期时进行处理),其去核率最高,达85.6%;成熟5h之前各组随成熟培养时间的延长而去核率升高,之后各组则降低.(3) 比较卵母细胞-卵丘细胞复合体与自然裸卵去核率,后者效率为56%,显著低于前者(p＜0.05),因此该方法在卵母细胞-卵丘细胞复合体的完全去核率与传统的物理去核方法相当.     

中华蚱蜢卵子发生的观察

对中华蚱(Acrida chinensis)卵子发生过程进行了形态观察及描述．根据卵母细胞体积及核的变化、卵黄形成、滤泡细胞的形态变化等特征指标显示，可将卵子发生划分为八个阶段．第一阶段：卵母细胞位于原卵区，处于第一次减数分裂的前期．第二阶段：卵母细胞进入生长阶段，滤泡细胞零星地在其周围．第三阶段：卵母细胞体积变大，滤泡细胞呈单层均匀包围卵母细胞．第四阶段：进入卵黄形成准备期．第五阶段：卵黄形成开始．第六阶段：卵母细胞内充满卵黄，卵母细胞核膜消失．第七阶段：卵壳出现，滤泡细胞呈扁平状．第八阶段：卵子发育成熟．     

"两步法"体外培养山羊卵母细胞的初步研究

体外成熟培养的卵母细胞经本外受精后，囊胚发育率远低于体内成熟卵母细胞，原因之一是由于体外成熟卵母细胞的不充分获能造成的，有假说认为：卵母细胞在体外培养过程中，如果延长GV期，可促进卵母细胞进一步获能，从而提高发育潜能。本文以山羊卵子为研究对象，探讨了山羊卵泡各种成分以及异种家畜卵泡液对山羊卵母细胞核成熟抑制以及抑制解除后减数分裂的影响，结果显示，山羊50％Q卵泡液、100％卵泡液、半卵泡、打孔整体卵泡以及完整卵泡对山羊卵母细胞的核成熟抑制率分别为：0.00%、9.38%、60.47％、78.26%和70.09%，随后，对经山羊半卵泡、打孔整体卵泡、完整卵泡抑制培养后的卵子进行恢复培养发现，卵子核成熟率分别为：64.29%、3.49%和4.13%，山卵母细胞与半卵泡共培养24h后进行0h、12h、20h、24h和30h的恢复培养，核成率分别为：0.00%、20.00%、61.90%、64.29%和43.75%，表明山羊半卵泡可以有效抑制山羊卵母细胞使之处于GV期，并且这种抑制作用可以恢复，恢复培养时间以20h和24h较为适宜，初步研究异种家畜卵泡液对山羊卵母细胞核成熟抑制的影响发现，50％牛卵泡液、1005牛卵泡液、50％绵羊卵泡液、100％绵羊卵泡液对山羊卵母细胞核成熟抑制率分别为3.7%、21.88%、10.00%、58.82%，表明，100％绵羊卵泡液对山羊卵母细胞核成熟抑制效果较好。     

合浦珠母贝卵子成熟的细胞学观察

用细胞学的方法对合浦珠母贝卵子在体内和体外的成熟过程进行了观察，结果发现：性腺内发育的卵子大多停留于第一次减数分裂的前期，处于排卵状态时，性腺内卵子进一步发育至第一次减数分裂的前中期，解剖性腺取出的卵子能在海水中继续发育达到第一次减数分裂中期，氨海水能够促进这一发育过程。自然排放的卵子在刚刚接触到海水时仍处于第一次减数分裂的前中期，它们的进一步成熟，即发育至第一次减数分裂中期是在海水中完成的，文中     

斑马鱼受精过程中原核的时空规律

斑马鱼的成熟卵子处于第2次减数分裂中期,精子通过受精孔进入卵内,精子入卵后,卵子被激活;受精后3 min,精核位于卵质膜内侧边缘,处于凝集状态;受精后5 min精核开始解凝;受精后8 min,精核明显解凝,受精卵出现明显的精子星光.同时进入第2次减数分裂后期,之后排出第二极体;受精后10 min,雄原核形成,具有双星光,此时,雄原核已位于胚盘中部;受精后15 min雌原核已形成,雌、雄原核向胚盘中央靠近;受精后20 min,雌雄原核开始接触;受精后30 min,雌雄原核完全融合成为1个合子核;35 min时,受精卵开始第1次卵裂;45 min后分裂形成2个子核;50 min时分裂为2细胞,60 min时分裂为4细胞.     

促减数分裂甾醇（MAS）对猪卵母细胞体外成熟及其胚胎发育能力的影响

利用促减数分裂甾醇(MAS)合成代谢过程中的抑制剂AY9944累积FF-MAS的原理,在猪卵母细胞体外成熟过程中添加AY9944,间接地研究了内源性MAS对猪卵母细胞体外成熟质量的影响.猪卵丘卵母细胞复合体(cumulus oocyte complexes,COCs)培养在NCSU23成熟培养液中,并添加不同浓度(0,10,20,40μmol/L)的AY9944培养44h.培养结束后,成熟的卵母细胞进行孤雌激活和以胎儿成纤维细胞为核供体重构胚胎,分别于48和144h观察胚胎发育情况,统计卵裂率和囊胚率及囊胚/2-细胞胚比率.结果如下:(1)随着AY9944添加浓度的增加,退化的卵母细胞增多,40μmol/L AY9944处理的退化卵显著,卵母细胞成熟率显著下降.(2)成熟培养液添加20和40μmol/L AY9944处理的孤雌激活胚胎的囊胚形成率和2-细胞胚发育到囊胚的比率显著增加(P<0.05).(3)以对照组(0μmol/L AY9944)和20μmol/L AY9944处理的卵母细胞为胞质受体,发现20μmol/L AY9944处理的克隆胚的发育能力囊胚率和2-细胞胚发育到囊胚的比率有所提高,但无显著差异(P>0.05).以上结果表明,猪卵母细胞体外成熟过程中添加AY9944提高了猪卵母细胞体外成熟的胞质质量,胚胎的发育能力提高.     

卵母细胞成熟过程中一些重要分子的作用

在卵母细胞成熟过程中,质膜蛋白表现出多态现象和高度保守性,G-actin转变成F-actin,CG转移至皮质区,线粒体迁移至卵的内质区域.Cyclin B1的翻译控制MⅠ期定时过渡到后Ⅰ期.层粘连蛋白A和B1链mRNA出现去腺苷化.PDE3在减数分裂恢复的信号通路中起关键作用.Mos是卵母细胞成熟的一种起始物,并与MⅡ期停顿有关.NO是卵母细胞减数分裂的一个关键调节分子.在卵母细胞成熟过程中,胞内钙浓度增长.ATP在卵丘细胞中诱导的钙信号通过缝隙连接引起卵母细胞中出现钙波动.     

锯缘青蟹受精过程核相变化的研究

用光镜和组织切片技术研究了锯缘青蟹受精过程核相变化的特征．锯缘青蟹刚排出的成熟卵子为初级卵母细胞．核相处于第1次成熟分裂的中期．在卵子产出后30min内第1极体排出并分裂成两个小极体;第2极体随着受精膜的形成和举起而排放。在卵子产出后50～60min内排出;第1．2极体分别位于受精膜的内外两侧．雄性原核形成早于雌性原核;雌雄原核形成后向卵子中央移动。最后发生联合形成联合核．排卵后的6～7h内。合子核才开始第1次核分裂．锯缘青蟹为数精人卵．单精受精．     

动物受精过程中卵子Ca2+释放机制

Ca^2＋是动物受精过程中卵内重要的第二信使，它对于皮质颗粒的排放、减数分裂的恢复、原核形成等过程具有重要的作用，受精过程中Ca^2＋的释放机制研究是当今受精生物学研究的热点之一，已有的研究结果表明动物卵子在受精过程中有三种Ca^2＋释放机制：由1，4，5，三磷酸肌醇引发内质网中储存的Ca^2＋释放、由环腺苷酸二核苷酸磷核糖引发与其相关联的钙库Ca^2＋释放和烟酸腺嘌呤二核苷酸磷酸引发的与其相关联的钙库Ca^2＋释放．     

褪黑素对小鼠卵母细胞体外自发成熟的影响

本文通过卵母细胞自发成熟体外培养模型研究了褪黑素(MT)对小鼠如母细胞成熟的影响。结果表明:0.1mg/ml、0.02mg/ml、0.004mg/mg及0.0008mg/ml浓度的MT均能显著抑制小鼠卵丘卵母细胞复合体(CEO_s)自发成熟过程(P<0.01)。但对裸卵(DO_s)自发成熟,没有影响。结论:MT是调节哺乳动物卵母细胞成熟的重要激素之一,其作用机制可能是通过卵丘细胞实现的。     

近江牡蛎受精细胞学研究

用醋酸－地衣红染色的方法对近江牡蛎人工授精的卵子减数分裂和受精过程进行了详细细胞学观察。精子入卵前，卵子处于第一次减数分裂的前期（胚泡期），精子入卵后，胚泡消失，然后进行两次减数分裂，在海水温度为２８．８℃的情况下，授精后３３ｍｉｎ和４５ｍｉｎ，绝大部分受精卵已排出第一极体和第二极体，雄原核可在第一极体排出后及第二极体排出前任何时期内形成，雌雄原核以联合的方式将两组染色体合并，授精后１ｈ，大部分卵     

羔山羊卵巢卵母细胞超微结构及核质成熟分析

以ＦＳＨ－ＬＨ进行超排处理所得的羔山羊卵母细胞为材料，首次对羔山羊卵母细胞在体外成熟过程中的超微结构进行了探讨，并进行了细胞核质成熟的分析．结果表明：１）卵母细胞经体外培养０ｈ．１８～２０ｈ后，分别有１１．２％、７５．０％的卵发育至第二次减数分裂中期（ＭⅡ），表明羔羊超排卵泡卵母细胞在体外培养１８～２０ｈ以后，绝大部分卵子的细胞核已成熟；２）透射电镜（ＴＥＭ）结果表明，０ｈ卵母细胞内皮质颗粒（ＣＧｓ）分散于细胞质内，但有时也以簇的形式存在．体外培养１８～２０ｈ后，ＣＧｓ数量增多，大多都定位于接近质膜的胞质中，呈单层排列，根据这种ＣＧｓ迁移现象判断的体外成熟卵母细胞质成熟率５０％，３）羔山羊卵母细胞内线粒体基质密度较浅，嵴很少，但经体外培养后部分线粒体中出现小嵴．细胞质中的内质网数目很少，通常以单个囊池形式存在；４）在部分卵母细胞质中脂滴和空泡数量增多，皮质颗粒消失．据此分析，体外培养０ｈ，１８～２０ｈ以后，分别有２５．０％和３１．３％卵子已出现退化现象．     

椭圆背角无齿蚌卵子发生的研究

作者通过石蜡切片技术与苏木精－伊红染色的组织学方法及超薄切片技术和透射电镜观察，较系统地研究了椭圆背角无齿蚌卵细胞的发生、发育与成熟过程的细胞学特征：原始生殖细胞在滤泡壁上分裂增殖，成为卵原细胞、卵原细胞发育、膨大成为卵母细胞而排入滤泡腔。在滤泡腔中卵母细胞不断地进行卵黄的合成与积累，体积继续增大。最后成熟的卵母细胞，在未完成减数分裂的情况下直接排入外鳃叶腔，与随水流入的精子相遇而受精，在观察的基础上，作者比较分析了双壳纲淡水贝类生殖过程中所具有的一般特征，着重讨论了卵子发生过程中的双核仁现象与卵黄发生，成熟卵母细胞减数分裂的阻断与重新起始。     

动物卵母细胞透明带与受精的关系

阐述对哺乳动物卵母细胞透明带(ZP)在卵母细胞受精过程中的作用,指出卵母细胞ZP厚度、弹性、显微结构及理化结构是影响卵子受精过程的重要因素。     

受精的分子生物学研究

随着分子生物学的发展，人们在揭示受精现象的分子生物学机理方面，有新的发现，例如，在小鼠卵子外层鉴定出一种特异的分子结构，即精子受体蛋白，它在整个受精的过程中起着非常重要的作用，人类的受精过程与其它哺乳动物很相似，其基本模式是初期大量精子在卵子表面疏松的粘附，其次是与外层受体结合，卵子表面的精子受体蛋白是位于卵子外层一种透明的非细胞性糖蛋白结构中，称之为卵透明带结构，而每一精子表面，也具有一种特异的卵子结合蛋白，这种特异的卵子结合蛋白与卵表面的精子受体蛋白结合，即精卵结合，它是有种类特异性的，卵表…     

体外受精过程中多精受精发生机制

对哺乳动物体外受精(IVF)过程中多精受精的发生原因进行了阐述,指出多精受精的发生是影响各种哺乳动物体外受精效率的重要原因,其中在猪和人的IVF中表现得尤为突出.大量研究表明,除了物种的特异性以外,不完全的卵母细胞胞质成熟、异常透明带、高精子浓度、受精培养基中不适当的添加物以及在受精过程中的其他一些异常因素都与多精受精密切相关.