KMB17细胞培养流感病毒的实验研究

 探讨了流感病毒在KMB₁₇细胞上培养的可行性.将3株不同型别的流感病毒(A/Wisconsin/67/2005H3N2,A/New Caledonia/20/1999 H1N1和B/Malaysia/2506/2004)分别接种于KMB₁₇细胞上,在无血清的条件下于不同pH值和不同胰酶浓度的维持液中35℃培养72 h后收获病毒,测定血凝效价.实验结果表明,所用的3个毒株中的H3N2亚型毒株(A/Wisconsin/67/2005 H3N2)血凝效价明显高于另外的H1N1亚型(A/NewCaledonia/20/1999 H1N1)和B型(B/Malaysia/2506/2004)毒株.因此认为KMB₁₇细胞可作为培养流感病毒的备选培养基质.     

姜黄素体外抗流感病毒H1N1、H3N2实验研究

目的：观察姜黄素提取物体外对流感病毒H1N1、H3N2的抑制作用。方法：用狗肾细胞（MDCK）观察姜黄素体外对A型流感病毒H1N1亚型、A型流感病毒H3N2亚型病毒的直接杀灭作用。结果：姜黄素最大无毒浓度为12．5g／L,对H1N1有效抑制浓度为6．25g／L,对H3N2有效抑制浓度为1．56g／L。结论：姜黄素提取物确有明显的抗H1N1、H3N2复制作用。     

甲型H1N1流感超敏感诊断方法的建立及优化

利用几种助沉剂和核酸纯化方法富集病毒RNA,建立甲型H1N1流感超敏感诊断方法。收集31份甲型H1N1流感确诊病人提取的病毒RNA,稀释至1000分之一倍后分别应用酵母tRNA、糖原、AcrylCarrier助沉剂和磁珠、硅胶颗粒和离心柱的9种组合进行病毒RNA的富集,富集后分别进行RealtimePCR检测。并对检测结果进行统计学分析。利用几种助沉剂和核酸纯化方法的组合时,发现磁珠+AcrylCarrier助沉剂方法是最佳的核酸富集方法,能够大大提高病毒核酸的检出效率。建立了甲型H1N1流感超敏感诊断方法,该方法能够大大提高甲型H1N1流感的检出率。     

2009年甲型H1N1流感临床研究回顾

2009年全球爆发的甲型H1N1流感由一种源于猪流感病毒、致人急性呼吸道疾病的新型流感病毒所致.本文总结了甲型H1N1流感病毒感染病例的临床特征、治疗及研究展望.     

甲型H1N1流感在预防控制措施下的传播数学模型构建

从数学应用的角度,研究甲型H1N1流感的传播规律,将人群分为易感人群、病毒潜伏人群、发病人群、退出者人群四类. 分析了甲型H1N1流感在人群间的转化过程;日接触率和"聚集性突然爆发"事件被数学刻画,尝试性地构建了一个在预防控制阶段的传播数学模型.     

甲型H1N1流感病毒病原学特征

自从2009年3月18日墨西哥发现的首例甲型H1N1流感病例以来,在众多国家科研工作者的共同努力下,这种新流感病毒已经开始慢慢向人们揭开面纱。尤其是2009年4月27日公布从美国加利福尼亚州患者身上获得并分离得到的病毒基因序列后,研究人员陆续获得初步研究成果。研究表明：这种病毒基因组由禽流感、猪流感和人流感病毒基因混合而成,是一种新型的甲型H1N1流感病毒,它所引起的流感具有高度传染、传播迅速、易流行的特点。该病毒既有甲型流感病毒的共有特征,也有其特殊性。本文对该病毒的分类与命名、基因组结构特点与变异、相关蛋白及其功能作一综述以便对甲型H1N1流感的诊断、预防、治疗有所帮助。     

抗甲型流感病毒H1N1亚型单克隆抗体制备及应用

采用快速免疫佐剂免疫小鼠,通过杂交瘤技术获得针对甲型流感病毒H1N1亚型的特异性单克隆抗体杂交瘤细胞株.共获得7株能稳定分泌特异性抗体的细胞株,经腹水诱生和Protein A亲和层析纯化的抗体用于标记荧光量子点,并基于双抗体夹心免疫层析检测用于对甲型流感病毒H1N1亚型的检测.针对甲型流感病毒H1N1亚型,检出限为3.06×10~3TCID_(50)/L,具有较高的灵敏度,所制备的抗体在检测中具有良好的特异性和准确性,可用于对甲型流感病毒H1N1亚型的现场快速检测.     

关于甲型H1N1流感防控的探讨

本文主要介绍甲型H1N1流感的特性,并结合工作实际对甲型H1N1流感的防控作了深入的探讨,对于群发性传染疾病的预防护理给出指导性意见。     

甲型H1N1流感患儿免疫球蛋白水平变化

目的探讨甲型H1N1流感患儿免疫球蛋白水平变化及临床意义。方法采用放射免疫法检测51例甲型H1N1流感患儿（其中非危重组31例,危重组20例）急性期和恢复期以及对照组25例健康儿童外周静脉血的Ig,A、IgG、IgM、C3水平,并对结果进行分析。结果非危重组急性期和恢复期及对照组血清IgA、IgG、C3水平两两比较,差异均无统计学意义（P〉0．05）;危重组急性期血清IgA、IgG、C3水平低于非危重组急性期和对照组（P〈0．05）,恢复期血清IgA、I如、C3水平上升,与急性期比较差异有统计学意义（P〈0．05）;危重组和非危重组恢复期血清IsA、Is,G、C3水平比较,差异无统计学意义（P〉0．05）。非危重组、危重组及对照组血清IgM两两比较,差异无统计学意义（P〉0．05）。结论甲型H1N1流感患儿免疫球蛋白水平变化与病情严重性有关,危重患儿表现为急性期血清IgA、IgG、C3水平降低,恢复期恢复正常,提示危重甲型H1N1患儿体液免疫抑制是暂时的、可逆的。     

KPC-rg1抗H1N1流感病毒活性研究初探

为了研究肉桂提取物KPC-rg1对H1N1流感病毒的抗病毒活性.本研究以C57BL/6近交系小鼠为研究对象,并将小鼠分为3组,分别是健康空白组、对照组和实验组,分别对应给予磷酸缓冲盐(PBS)溶液、H1N1流感病毒溶液和H1N1流感病毒+KPC-rg1混合溶液,饲养28 d,观察实验过程中各组小鼠的存活率,通过红细胞凝集抑制实验(HI)分析KPC-rg1抗H1N1流感病毒的血凝抑制效价,并采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法定量检测病毒载量.与健康空白组相比,对照组小鼠接受H1N1病毒攻击后,体质量急剧下降,并在第3天出现死亡,而实验组小鼠给药后2 d内体质量略微下降,之后恢复到正常增长水平,且无小鼠死亡;小鼠感染28 d后,对照组和实验组小鼠血清中均检测出高滴度的血凝抑制效价(128 HAV);病毒攻击后3 d,对照组和实验组小鼠肺部病毒载量均达到1×10~7 copies/50 mg(1 IU≈5.6 copies);实验终点所有攻毒存活小鼠的肺组织病毒均得到了有效的清除.由此可知,KPC-rg1可有效地灭活H1N1流感病毒,对小鼠有显著的保护预防作用;被灭活的病毒保留了完整的抗原性,形成"原位固化灭活"效应;KPC-rg1可促使小鼠产生强烈的免疫应答反应,使机体产生高滴度的抗病毒抗体.     

Genome evolution of novel influenza A （H1N1 ） viruses in humans

The epidemic situation of A H1N1 flu arose in North America in April 2009, which rapidly expanded to three continents of Europe, Asia and Africa, with the risk ranking up to 5. Until May 13th, the flu virus of A H1N1 had spread into 33 countries and regions, with a laboratory confirmed case number of 5728, including 61 deaths. Based on IRV and EpiFluDB database, 425 parts of A H1N1 flu virus sequence were achieved, followed by sequenced comparison and evolution analysis. The results showed that the current predominant A H1N1 flu virus was a kind of triple reassortment A flu virus： （i） HA, NA, MP, NP and NS originated from swine influenza virus; PB2 and PA originated from bird influenza virus; PB1 originated from human influenza virus. （ii） The origin of swine influenza virus could be subdivided as follows： HA, NP and NS originated from classic swine influenza virus of H1N1 subtype; NA and MP originated from bird origin swine influenza virus of H1N1 subtype. （iii） A H1N1 flu virus experienced no significant mutation during the epidemic spread, accompanied with no reassortment of the virus genome. In the paper, the region of the representative strains for sequence analysis （A/California/04/2009 （H1N1） and A/Mexico/4486/2009 （H1N1）） included USA and Mexico and was relatively wide, which suggested that the analysis results were convincing.     

流感病毒胰酶不依赖性的研究

 在无胰酶条件下将流感病毒在MDCK细胞和Vero细胞上连续传代,研究流感病毒生长对胰酶的依赖性.选择出细胞培养流感病毒的适宜pH值,在无胰酶条件下将流感病毒毒株在Vero细胞和MDCK细胞上连续传代,然后将无效价的病毒收获液与原毒种混合后再进行传代.获得了6株在MDCK细胞上无需胰酶就能扩增的流感病毒毒株.     

TritonX-100裂解流感病毒的研究

 在流感病毒高浓度条件下,寻找TritonX-100裂解流感病毒的适宜条件.在不同条件下用TritonX-100裂解WHO推荐用2007～2008年度流感病毒疫苗毒株制备的3个亚型的流感病毒,用电镜观察裂解程度,通过蔗糖密度梯度离心纯化抗原后免疫动物,以检测疫苗的免疫效果.结果表明当流感病毒的血凝效价是1:16382,裂解时间为24h时,TritonX-100在质量分数为1%可以完全地裂解B型,质量分数达到2%才可以完全裂解流感病毒H1N1和H3N2,这说明TritonX-100对A,B亚型毒株的裂解效果不同.由于每年都要更换毒株工人生产新的流感疫苗,因此应该对使用TritonX-100的裂解不同亚型的流感病毒条件进行研究,以保证裂解疫苗的质量.     

Special features of the 2009 pandemic swine-origin influenza A H1N1 hemagglutinin and neuraminidase

Since the 2009 pandemic H1N1 swine-origin influenza A virus (09 S-OIV) has reminded the world about the global threat of the ever changing influenza virus,many questions regarding the detailed re-assortment of influenza viruses yet remain unanswered.Influenza A virus is the causative agent of the pandemic flu and contains 2 major antigenic glycoproteins on its surface:(i) hemagglutinin (HA);and (ii) neuraminidase (NA).The structures of the 09 S-OIV HA and NA proteins (09H1 and 09N1) have recently been resolved in our laboratory and provide some clues as to why the 09 S-OIV re-assortment virus is highly infectious with severe consequences in humans.For example,the 09H1 is highly similar to the HA of the 1918 influenza A pandemic virus in overall structure and especially in regards to its 5 defined antibody binding epitopes.For 09N1,its most distinctive feature is the lack of a 150-loop active site cavity,which was previously predicted to be present in all N1 NAs,and we hypothesize that the 150-loop may play a important role in the substrate specificity (α2,3 or α2,6 linked sialic acid receptors) and enzymatic mechanism of influenza NA.Combination of the HA and NA with special characteristics for the 09 S-OIV might contribute to its high increased transmissibility in humans.     

注射H5N1亚型禽流感抗体鸡的血清抗体水平消长规律监测

为了解H5N1亚型禽流感纯化抗体(IgG)在鸡体内消长规律,用血凝抑制试验检测了不同注射时间分离的血清样品。结果表明IgG接种后第1至5天,血清抗体滴度恒定在24~26,第8天为23~24,第10天以后几乎检测不到抗体。上述数据表明注射滴度为29的抗体液1mL可有效保护肉鸡免受禽流感病毒的感染,有效期为8天。     

H1N1猪流感病毒感染猪血管内皮细胞后内参基因的筛选

旨在评价H1N1猪流感病毒感染猪血管内皮细胞(PUVEC)后,肽基脯氨酰异构酶A(Ppia)、β-肌动蛋白(Actb)、核糖体蛋白L4(Rpl4)、酪氨酸3/色氨酸5-单加氧酶激活蛋白(Ywhaz)和甘油醛-3-磷酸脱氢酶(Gapdh)等5个内参基因的稳定性.采用Real-time RT-PCR方法测定H1N1 SIV感染PUVEC后3、6、9、12、15、18、24和30h时5个内参基因mRNA的表达水平,未感染PUVEC为对照,采用2-△Ct值对内参基因进行相对定量,应用Genorm软件对其稳定性进行评价.结果表明,5个内参基因的稳定性由高到低分别为Ppia和Rpl4、Ywhaz、Actb、Gapdh,其中Ppia和Rp14稳定性相同.据此可知,Ppia和Rpl4在所选的5个内参基因中是研究H1N1 SIV与机体互作理想的2个内参基因.