KMB17细胞培养流感病毒的实验研究

 探讨了流感病毒在KMB₁₇细胞上培养的可行性.将3株不同型别的流感病毒(A/Wisconsin/67/2005H3N2,A/New Caledonia/20/1999 H1N1和B/Malaysia/2506/2004)分别接种于KMB₁₇细胞上,在无血清的条件下于不同pH值和不同胰酶浓度的维持液中35℃培养72 h后收获病毒,测定血凝效价.实验结果表明,所用的3个毒株中的H3N2亚型毒株(A/Wisconsin/67/2005 H3N2)血凝效价明显高于另外的H1N1亚型(A/NewCaledonia/20/1999 H1N1)和B型(B/Malaysia/2506/2004)毒株.因此认为KMB₁₇细胞可作为培养流感病毒的备选培养基质.     

季节性流感病毒裂解疫苗在小鼠中的 安全性和免疫原性研究

目的 评价季节性流感病毒裂解疫苗在动物体内的安全性和免疫原性。 方法 按《 中国药典》 三部( 2015 版)方法进行 BALB / c 小鼠异常毒性试验。 免疫原性试验将 BALB / c 小鼠随机分为 2 组,试验组每只小鼠肌肉注射 0. 1 mL 测试疫苗,空白对照组注射 0. 1 mL PBS。 接种后连续观察 49 d,每天记录动物的活动、饮食及体质量情况。 分别于接种后 0、14、28、35 和 49 d,采血并分离血清,红细胞凝集抑制试验( hemagglutination inhibition,HI)检测血清 抗体水平。 结果 异常毒性试验结果提示该疫苗的安全性良好,对小鼠的生长无影响,符合《中国药典》 三部( 2015 版)判定标准。 免疫原性试验结果显示,BALB / c 小鼠免疫后 28 d,血清抗 A( H1N1) pam09 和 A( H3N2) HI 抗体阳 转率均达到了 100% ;免疫后 35 d,抗 B( Victoria 系) 的抗体阳转率达到 70% 。 BALB / c 小鼠抗 A( H1N1) pam09、A ( H3N2)和 B( Victoria 系)抗体水平均达到峰值。 结果表明,该季节性流感病毒裂解疫苗对小鼠进行一次性免疫, 即能达到良好的免疫效果。 结论 该流感病毒裂解疫苗在 BALB / c 小鼠中具有良好的安全性和免疫原性。     

猪流感病毒及其人类公共卫生意义

猪流感是目前危害全世界养猪业的重要呼吸道疾病之一.目前猪流感的致病毒株主要有经典性H1N1,类人型流感病毒,类禽型流感病毒,H1N2亚型流感病毒,H5N1和H9N2亚型流感病毒.特别是从猪体分离H5N1和H9N2亚型流感病毒对禽流感的控制及人类公共卫生方面有重要意义.     

郴州市2006年流行性感冒监测结果分析

目的探讨进一步做好流感的网络监测工作。方法采集流感样病例（ILI）的鼻咽拭子标本用狗肾传代（MDCK）细胞进行流感病毒分离，用红细胞血凝抑制试验（ILI）进行流感病毒型别鉴定。，结果全年4所监测哨点医院共报告流感样病例（ILI）3288例，占该监测门诊就诊人数的1.61％；每月均有ILI报告，以6～8月为发病高峰；共采集并检测ILI鼻咽拭子标本665份，分离到流感病毒株40株（6.02％），经分型鉴定A（H1N1）亚型35株，B型5株。ILI暴发疫情3起，共采集并检测ILI鼻咽拭子标本29份，分离到B型流感病毒株18株（62.07％）.结论2006年郴州市全年均有流感流行，流行的优势毒株是A（H1N1）亚型和B型毒株。     

这个春天,我们预防禽流感

流感病毒是流行性感冒病毒的简称，在分类上流感病毒属正粘病毒科，包括甲、乙、丙(也称A、B、C)3个型别。流感病毒可引发人类、禽类和动物类的“流行性感冒”，其中禽流感病毒是甲型流感病毒中的某些亚型(如H2N1、H9N2、H7N7等)。它们以鸡、鸭等禽类病毒贮存，宿主可以感染人类，早年已有若干先例。而此次出现的禽流感病毒主要为甲型流感病毒中的H5N1亚型。     

河南重大科技专项“甲型H1N1流感病毒裂解疫苗”实施取得圆满成功

近日,由华兰生物疫苗有限公司承担的河南省重大科技专项“甲型H1N1流感病毒裂解疫苗”项目通过了由河南省科技厅组织的专家组验收。专家组一致认为,该项目为华兰生物疫苗有限公司自主开发,拥有自主知识产权,技术达到了国内领先水平,并建成了年产16000万剂的甲型H1N1流感病毒裂解疫苗生产线,其生产储备能力达到全国最大,为国家甲流防控工作做出了贡献。     

H5N1亚型禽流感病毒M基因的克隆与分子进化分析

以一株H5N1亚型禽流感病毒RNA为模板,用RT-PCR方法,扩增M基因全长,将PCR产物克隆于pMD18-T载体,测序结果表明所克隆的982个核苷酸的片段包含了M1和M2基因的完整阅读框架,通过软件推导M1和M2基因分别编码252和97个氨基酸,将M全长序列与Genbank收录的10株H5N1亚型流感病毒M基因序列进行比较,病毒株之间M基因核苷酸序列同源性为92.3%～99.3%,编码的两个蛋白M1和M2氨基酸序列间同源性分别为为96.0%～98.8%和92.9%～99%,分子进化分析揭示了病毒株间的亲源关系.     

H5亚型禽流感病毒HA基因昆虫/杆状病毒系统的表达及对BALB/c小鼠的免疫保护

经RT-PCR扩增了禽流感病毒A/Goose/Guangdong/1／96 H5N1亚型1．7kb HA基因的cDNA,将其克隆到pMD18-T中并测序。亚克隆到杆状病毒转移载体pMelBacA的蜜蜂蜂毒素分泌信号下游中,测序正确后与线性化的杆状病毒DNA(Bac-N-BlueTM DNA)共转染Sf9昆虫细胞。将重组杆状病毒感染HFive细胞,72h左右收获细胞,超声波裂解,SDS—PAGE结果表明HA基因在重组杆状病毒感染的HFive细胞中获得表达。蛋白胶薄层扫描分析显示:表达的HA蛋白占重组杆状病毒感染细胞总蛋白含量的17．1％。Western-blot 及血凝实验结果显示,表达的禽流感H5N1亚型病毒HA蛋白具有生物学活性。表达的H5 HA蛋白定量乳化后,皮下多点注射免疫SPF 级BALB/c雌性小鼠,免疫后产生了H5 HA特异抗体,并在三免前后达到并保持较高水平。用致死剂量的HPAIV H5N1攻击小鼠,免疫组小鼠提供了100％的保护力,而对照组小鼠先后发病且死亡:为研制禽流感H5N1亚型病毒亚单位疫苗,防制禽流感奠定了基础。     

搜新吧

我国甲型H1N1流感疫苗批量生产6月8日,北京科兴生物制品有限公司拿到来自美国CDC的甲型H1N1流感疫苗生产用毒株,这意味着我国甲型H1N1流感疫苗"盼尔来福"的批量生产正式启动。为达到疫苗的保护效果,并节省抗原,北京科兴这次甲型H1N1流感疫苗采用了佐剂疫苗的生产工艺。顺利的话,第一批疫苗将在7月底生产出来。     

中国大陆H9N2亚型禽流感病毒HA基因遗传分析及抗原相关性研究

为研究我国大陆H9N2亚型禽流感病毒血凝素(HA)基因的分子进化及抗原相关性, 本研究对来自15个省、市、自治区的34株H9N2亚型禽流感病毒的HA基因进行了测序及系统发育分析, 并采用交叉血凝抑制试验及交叉攻毒保护试验对不同遗传分支下毒株间抗原相关性进行了分析. 结果表明, 所有34个毒株HA基因均符合低致病性禽流感病毒的特征, 但毒株间变异程度增加. 系统发育分析表明, 我国大陆H9N2亚型禽流感病毒主要分为三个系列, 各系列内毒株没有明显的地区及时间特征. 抗原相关性研究表明, 不同遗传系列下的毒株其抗原相关性明显低于同一系列内部毒株间的抗原相关性, 说明我国H9N2亚型禽流感病毒抗原性差异较大. 此外, 本研究同时筛选得到了用于制备多价苗的代表毒株.     

Triton X-100对氧化亚铁硫杆菌氧化活性及浸出黄铜矿的影响

为提高黄铜矿的微生物浸出效果,研究了非离子表面活性剂Triton X-100对氧化亚铁硫杆菌(Acidithiobacillus ferrooxidans)氧化Fe2+和S0的活性以及浸出黄铜矿的影响,并采用XRD对浸出后的产物进行了表征.结果表明,Triton X-100对氧化亚铁硫杆菌氧化Fe2+有一定的抑制作用,而对氧化S0则显现出促进作用;Triton X-100可显著改善黄铜矿的微生物浸出效果,当其质量浓度为30 mg·L-1时,黄铜矿中铜的浸出率提高了52.15%.Triton X-100的加入提高了氧化亚铁硫杆菌对黄铜矿浸出过程中间产物硫的生物利用性和消解作用,从而提高了浸出体系中细菌浓度和Fe3+浓度,进而促进了黄铜矿的溶解.     

无血清微载体培养MDCK细胞和甲型流感病毒H1N1的条件优化

 血清微载体培养MDCK细胞,并接种流感病毒H1N1,优化培养条件,为细胞流感疫苗的工艺研发奠定基础.采用不同的细胞接种量在50mL无血清微载体搅拌瓶中培养MDCK细胞,并接种甲型流感病毒H1N1,检测不同pH值和TPCK-胰酶含量的病毒培养液,不同病毒接种量,补加TPCK-胰酶,以及不同收毒时间对血凝效价的影响.以1.0×10⁵mL^-1的MDCK细胞数量接种到无血清微载体上,病毒培养液pH值为7.2~7.4范围内,TPCK-胰酶质量浓度为1.0μg/mL,接种后不补加胰酶,病毒接种量MOI=1.0,并在72h收获,最高血凝效价达到512.由此获得了在无血清为载体上培养MDCK细胞和甲型流感病毒H1N1的适宜条件.     

Drosophila RNAi screen identifies host genes important for influenza virus replication

All viruses rely on host cell proteins and their associated mechanisms to complete the viral life cycle. Identifying the host molecules that participate in each step of virus replication could provide valuable new targets for antiviral therapy, but this goal may take several decades to achieve with conventional forward genetic screening methods and mammalian cell cultures. Here we describe a novel genome-wide RNA interference (RNAi) screen in Drosophila that can be used to identify host genes important for influenza virus replication. After modifying influenza virus to allow infection of Drosophila cells and detection of influenza virus gene expression, we tested an RNAi library against 13,071 genes (90% of the Drosophila genome), identifying over 100 for which suppression in Drosophila cells significantly inhibited or stimulated reporter gene (Renilla luciferase) expression from an influenza-virus-derived vector. The relevance of these findings to influenza virus infection of mammalian cells is illustrated for a subset of the Drosophila genes identified; that is, for three implicated Drosophila genes, the corresponding human homologues ATP6V0D1, COX6A1 and NXF1 are shown to have key functions in the replication of H5N1 and H1N1 influenza A viruses, but not vesicular stomatitis virus or vaccinia virus, in human HEK 293 cells. Thus, we have demonstrated the feasibility of using genome-wide RNAi screens in Drosophila to identify previously unrecognized host proteins that are required for influenza virus replication. This could accelerate the development of new classes of antiviral drugs for chemoprophylaxis and treatment, which are urgently needed given the obstacles to rapid development of an effective vaccine against pandemic influenza and the probable emergence of strains resistant to available drugs.     

流感病毒疫苗研究现状、发展趋势和展望

 流感大流行严重威胁人类的生命健康和社会经济的发展。及时提供充足、有效的流感疫苗是目前各国应对流感大流行的首选方法。然而,目前流感疫苗还存在许多问题,如生产周期长、保护范围有限（不具备广谱性）、易产生过敏反应等。为此,各国政府和科研团体都在进行着不懈的努力以应对流感的大流行。本文介绍了目前国内外使用的流感疫苗,比较了流感灭活疫苗和减毒活疫苗的优缺点;针对当前流感病毒疫苗研制中亟待解决的问题,即疫苗的保护时效及合适的培养基问题,探讨了解决的思路以及取得的进展;结合中国在流感方面的主要研究进展,探讨了中国流感病毒疫苗相关基础研究中需要解决的关键科学问题,并对未来流感的防控进行了展望。     

静电场与表面活性剂对液-液体系相间传质动力学特性的影响

在Lewis传质池外部施加不同方向的静电场激励,研究反萃传质体系Cu2 -HDEHP-CCl4/H2O在改变相主体搅拌速率、体系添加十二烷基硫酸钠、聚乙二醇辛基苯基醚、十六烷基三甲基溴化铵等条件时的传质动力学特性.研究发现:无静电场激励时,添加十二烷基硫酸钠可提高传质速率42.0%,但添加聚乙二醇辛基苯基醚降低传质速率45.5%,添加十六烷基三甲基溴化铵降低传质速率19.8%;无表面活性剂时,不同方向的静电场均显著加速传质过程,正向静电场增幅达到114%;在垂直静电场作用下,体系添加聚乙二醇辛基苯基醚传质速率降低28.0%;在减速静电场作用下,体系添加十六烷基三甲基溴化铵传质速率降低16.0%;但体系添加十二烷基硫酸钠时,传质速率均被加速,最高达64.0%;提高搅拌速率不仅可以影响相间流体力学层,还可以改变相间分散层结构.     

流感灭活疫苗生产二次收获的研究

流行性感冒（以下简称“流感”）的重要性是可引起严重的发病率和死亡率。流感疫苗的研究迄今年有50多年的历史，是目前唯一可行的流感预防措施。流感灭活疫苗生产二次收获的研究是尽最大的可能将一次收获后的鸡胚尿囊腔中残存的尿液、病毒络合物的沉淀、细胞内未释放的病毒和病毒残片二次收获回来。该方法可降低成本，提高效价，增加收获量。本实验根据渗透压原理，向第一次收获后的鸡胚尿囊腔中加入一定量的高渗液体，然后二次收获。小量试验三次，其结果为使用8．5％NaCl血凝效价为1：128，M/7．5PBS血凝效价为1：256，原液对照分别为1：100及1：128。根据小量结果大量收6批二次苗，其血凝效价可达到1：160以上，收率为第一次收获的70％左右，上述结果表明，流感灭活疫苗的二次收获是可行的。     

玉溪市2009～2012年流感哨点监测流行病学和病原学分析

目的：分析玉溪市2009~2012年流感哨点医院ILI（流感样病例）监测结果,探索流感流行特征及规律,为制定预防和控制策略提供依据;方法对2009-2012年国家流感监测哨点医院发热门诊流感样病例（ILI）进行流行病学分布研究,通过实验室分离培养流感病毒,并对流感病毒型别检测和分析;结果2009~2012年,ILI占门诊总数百分率平均为4.25%,年平均采样数为762,标本占ILI百分率平均为6.56%,每年1~3月、10~12月呈现两个发病高峰,ILl主要集中青壮年人群,职业分布以农民和学生为主,流感病毒型别流行特点：2009~2010年以新型甲型H1N1流行为主,2010~2011年以B型流感Victory系列流行为主,2012年以季节流感H3N2l流行为主;结论对玉溪市2009~2012年流感病毒的监测,发现具有时间、人群和不同型别的流行特点,结合实验室结果科学合理地使用疫苗,积极预防和控制流感病毒的流行。     

姜黄素体外抗流感病毒H1N1、H3N2实验研究

目的：观察姜黄素提取物体外对流感病毒H1N1、H3N2的抑制作用。方法：用狗肾细胞（MDCK）观察姜黄素体外对A型流感病毒H1N1亚型、A型流感病毒H3N2亚型病毒的直接杀灭作用。结果：姜黄素最大无毒浓度为12．5g／L,对H1N1有效抑制浓度为6．25g／L,对H3N2有效抑制浓度为1．56g／L。结论：姜黄素提取物确有明显的抗H1N1、H3N2复制作用。