欧洲鳗鲡抗体生成规律的初步研究

用山羊IgG注射欧洲鳗鲡背部肌肉后,采用山羊IgG-琼脂糖亲和层析柱对欧鳗血清免疫球蛋白（IgM）进行分离纯化,并通过SDS-PAGE电泳对纯化后的IgM进行检测,同时制备兔抗欧鳗IgM血清,运用间接ELISA检测正常欧鳗血清（第0天）以及山羊IgG注射欧鳗后第7、14、21、28、35、42天的血清抗体水平,同时利用荧光定量PCR测定了第0天至第28天的欧鳗肾脏、脾脏和鳃中IgM基因表达水平变化.结果表明：纯化后的欧鳗IgM经SDS-PAGE检测含有一条分子质量约68 ku的重链,以及分子质量分别为26 ku和28 ku的两条轻链,获得的兔抗欧鳗IgM血清效价达1/51 200;欧鳗血清抗体水平在第28天达到峰值,脾脏IgM基因表达水平在第14天达到峰值,肾脏和鳃均在第21天达到峰值,血清抗体水平以及三种组织器官IgM基因表达水平的变化规律均为先升高、达到峰值后再降低.     

鸡禽流感母源抗体的消长规律及其免疫效果研究

为探讨科学的鸡禽流感免疫程序,对1～28日龄的土杂肉鸡和罗曼蛋鸡进行禽流感母源抗体检测,以及对雏鸡接种禽流感油乳剂疫苗后的HI抗体水平变化进行了监测。结果表明,两种雏鸡的母源抗体水平在1日龄时均达最高值,然后逐渐下降;肉鸡11日龄后H5、H9抗体滴度分别降低到4.2log2和4.3log2以下;蛋鸡28日龄后H5、H9...     

鸡禽流感母源抗体的消长规律及其免疫效果研究

为探讨科学的鸡禽流感免疫程序,对1～28日龄的土杂肉鸡和罗曼蛋鸡进行禽流感母源抗体检测,以及对雏鸡 接种禽流感油乳剂疫苗后的HI抗体水平变化进行了监测。结果表明,两种雏鸡的母源抗体水平在1日龄时均达最高值,然后 逐渐下降;肉鸡11日龄后H5、H9抗体滴度分别降低到4.2log2和4.3log2以下;蛋鸡28日龄后H5、H9抗体滴度分别降低到 4.2log2和4.8log2以下;分别对肉鸡在11日龄时进行首免,蛋鸡在7日龄时进行提前首免后均可获得较高的抗体水平;同时 根据试验所用的免疫方案,可有效预防鸡禽流感的发生。     

双抗体夹心ELISA检测禽流感病毒方法的初步建立

用饱和硫酸铵初步纯化的兔抗AIV-H9高免血清中的IgG作为包被抗体,利用抗AIV-NP-7B4单抗作为ELISA的第二抗体,建立了检测禽流感病毒(AIV)抗原的双抗体夹心ELISA方法. 经方阵滴定试验测定反应的最佳工作条件为:兔抗AIV-H9高免血清IgG包被稀释度为1: 8 000(浓度为3.531 ug/mL),抗AIV-NP-7B4单抗腹水最佳使用稀释度为1: 800,酶标二抗的工作浓度为1: 4 000. 与其他禽易感病毒(NDV、IBV、EDS-76V)等均没有交叉反应. 结果表明,本方法具有很高的特异性.     

卵黄抗体的研究进展

自从 1983年 ,Klemperer首次报道鸡蛋中存在抗体以来 ,人们对卵黄抗体 (IgY)的研究越来越多 ,认识也越来越深入 ,应用也日益广泛起来。卵黄抗体价格便宜、制备方便 ,具有其它抗体不可比拟的特点 ,是当今生物科学研究的一个热点。1　IgY与IgG的区别历史上 ,曾经有人认为在禽类血清中发现的低分子量 (MW )免疫球蛋白是IgG。但是研究分析发现禽类血清中的抗体不具有类似于IgG的 5 0kDa重链 (γ) [1] 。所以说禽类血清中的抗体不是IgG。现在认为IgY是禽类血清和卵黄中的主要抗体。IgG的重链 (γ)为 5 0kD ,由四个区域组成 :一个可变区 …     

鸭禽流感母源抗体的消长规律及其免疫效果

为研究鸭禽流感免疫程序,对不同日龄的雏鸭进行禽流感母源抗体的检测,并对雏鸭接种禽流感H5、H9二价油乳剂苗后的HI抗体水平进行了检测。结果表明,雏鸭的母源抗体水平在1日龄达最高值,然后逐渐下降;H5抗体20日龄后降低到4.5log2以下,H9抗体25日龄后降低到4.8log2以下。根据试验采用的免疫方案,对雏鸭在8日龄时进行首免,并多次免疫后可提高H5、H9抗体水平,有效预防禽流感的发生。     

犊牛牛病毒性腹泻/粘膜病母源抗体研究

应用细胞中和试验分别对免疫和非免疫母牛所生犊牛的血清进行母源抗体的测定,结果显示两组（每组8头）犊牛血清中均含有滴度不同的母源抗体,母源抗体的变化呈马蹄形变化.1日龄最低,7～8日龄最高,此后逐渐下降.免疫母牛所生的犊牛7～8日龄血清母源抗体达最高峰为8.3 log2,70日龄时达2.5 log2;而非免疫母牛所生犊牛7～8日龄时达最高峰为3 log2,43 d时达0.5 log2.对母源抗体类型鉴别结果表明,牛病毒性腹泻/粘膜病母源抗体的主要类型为IgG,母源抗体呈现的特征变化主要与犊牛吮吸初乳密切相关     

兔抗人多发性骨髓瘤细胞多克隆抗体的制备与鉴定

制备人多发性骨髓瘤全细胞兔多克隆抗体。用人多发性骨髓瘤细胞系ARH-77全细胞和福氏完全佐剂通过背部皮内多点注射首次免疫新西兰大白兔,第14 d用ARH-77全细胞和福氏不完全佐剂同样剂量加强免疫,第28 d和38 d时再次免疫。第45 d颈动脉采血80 mL,4℃静置过夜,收集血清。然后采用亲和层析系统纯化血清中的多克隆抗体。用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测纯化多克隆抗体的效价;免疫印迹法和荧光免疫细胞化学检测纯化多克隆抗体的特异性。结果:ELISA检测多克隆抗体滴度为1∶20 000,免疫印迹检测结果显示该抗体具有较高特异性,荧光免疫细胞化学检测多克隆抗体能够有效的结合细胞表面抗原。实验获得了高效价的特异性的兔抗人骨髓瘤细胞多克隆抗体,为进一步研究多发性骨髓瘤诊断和治疗奠定了基础。     

应用ELISA试剂盒检测鸡传染性支气管炎抗体

应用ELISA试剂盒对西宁市及乐都县344份血清样品进行了鸡传染性支气管炎抗体水平检测，结果阳性率达97．96％，其中333份样品抗体滴度在500—15000之间；1份样品的抗体滴度小于500；3份样品滴度大于15000。     

毛细管柱固定抗原流动注射化学发光免疫法测定IgG

目的建立基于毛细管柱固定抗原流动注射增强化学发光免疫法测定IgG分析的新方法。方法以辣根过氧化物酶(HRP)标记抗IgG与抗IgG竞争毛细管内壁表面固定的IgG抗原,利用HRP催化对鲁米诺-过氧化氢-对碘苯酚体系的增强化学发光,建立测定IgG的流动注射化学发光免疫分析方法。结果在选定的实验条件下,化学发光信号与IgG在稀释比为1∶1×1011~1∶1×1010间成良好的线性关系,相关系数为0.996 0。对稀释比为1:5×1010IgG抗体连续11次测定的相对标准偏差为6.5%。结论将该法应用于合成血清样品中IgG抗体的测定,结果满意。     

鸡新城疫母源抗体的消长规律及其免疫效果研究

为探讨科学的鸡新城疫免疫程序,对1～28日龄的土杂肉鸡和罗曼蛋鸡进行新城疫母源抗体的检测,并对两种雏鸡接种新城疫冻干疫苗和油乳剂疫苗后的HI抗体水平进行了检测。结果表明,两种雏鸡的母源抗体水平在1日龄时均达最高值,然后逐渐下降;肉鸡11日龄后降低到5.2log2以下,蛋鸡28日龄后降低到4.3log2以下。分别对肉鸡在12日龄时进行首免,蛋鸡在11日龄时进行提前首免可获得较高的抗体水平,根据试验所用的免疫方案,可有效预防鸡新城疫的发生。     

季节性流感病毒裂解疫苗在小鼠中的 安全性和免疫原性研究

目的 评价季节性流感病毒裂解疫苗在动物体内的安全性和免疫原性。 方法 按《 中国药典》 三部( 2015 版)方法进行 BALB / c 小鼠异常毒性试验。 免疫原性试验将 BALB / c 小鼠随机分为 2 组,试验组每只小鼠肌肉注射 0. 1 mL 测试疫苗,空白对照组注射 0. 1 mL PBS。 接种后连续观察 49 d,每天记录动物的活动、饮食及体质量情况。 分别于接种后 0、14、28、35 和 49 d,采血并分离血清,红细胞凝集抑制试验( hemagglutination inhibition,HI)检测血清 抗体水平。 结果 异常毒性试验结果提示该疫苗的安全性良好,对小鼠的生长无影响,符合《中国药典》 三部( 2015 版)判定标准。 免疫原性试验结果显示,BALB / c 小鼠免疫后 28 d,血清抗 A( H1N1) pam09 和 A( H3N2) HI 抗体阳 转率均达到了 100% ;免疫后 35 d,抗 B( Victoria 系) 的抗体阳转率达到 70% 。 BALB / c 小鼠抗 A( H1N1) pam09、A ( H3N2)和 B( Victoria 系)抗体水平均达到峰值。 结果表明,该季节性流感病毒裂解疫苗对小鼠进行一次性免疫, 即能达到良好的免疫效果。 结论 该流感病毒裂解疫苗在 BALB / c 小鼠中具有良好的安全性和免疫原性。     

卡介苗加脂多糖建立大鼠急性免疫性肝损伤模型的研究

目的　构建接近临床病毒性肝炎发病机制的肝损伤动物模型 ,以便对病毒性暴发性肝炎作进一步的研究。方法　用不同剂量的卡介苗 (BCG)及不同剂量的脂多糖 (LPS)诱导SD大鼠建立急性免疫性肝损伤模型 ,以大鼠血清转氨酶水平变化和肝脏病理学检查等指标作为肝损伤判断标准 ,并以流式细胞仪对该模型的血清中CD3+ 、CD4 + 、CD8+ 细胞百分比计数 ,以ELISA法对TNFα IgG、白介素 (IL 6和IL 10 )水平进行了检测。结果　“BCG +LPS”所造免疫性急性肝损伤模型当以BCG剂量 5× 10 7个活菌 /只及LPS剂量 30 μg kg时ALT升高明显 ,达正常对照 10倍以上 ,AST也较正常对照升高两倍 ;肝脏组织病理损伤中“Ⅲ”级和“Ⅳ”级大于 70 % ,而且其细胞因子水平较正常大鼠升高。对血清中CD3+ 、CD4 + 、CD8+ 细胞百分比也有影响。结论　以“BCG +LPS”所造模型比较成功 ,该模型能充分造成大鼠急性肝损伤 ,且能影响免疫系统 ,与病毒性肝炎的发病机制相似 ,可以用其对病毒性暴发性肝炎进行研究     

Construction of multivalent DNA vaccines forMycobacterium tuberculosis and its immunogenicity

The coding regions of Ag85B MPT-64, and ESAT-6 secreted proteins were cloned initially into the eukaryotic expression vector pJW4303, then transformed to E. coli Top 10 strain for plasmid DNA extraction and further analysis. Plasmids containing the right insertion were sequenced to confirm their identity. COS7 cells were transfected with a mixture containing serially diluted plasmid DNA encoding three secreted proteins and Lipofectin (Gibco). The supernatants and pellets prepared from various cell lines were run on SDS-PAGE gel and the expression of these proteins in COS7 cells were demonstrated by immunoblot using polyclonal or monoclonal antiserum of M.TBH37Rv. 21 days after first vaccination of C57BL-6 mice by all three recombinant eukaryotic expressing vectors, antibody titer for Ag85B reached 1∶3200. 21 days after second vaccination, the antibody titer reached 1∶102400. The highest antibody levels induced by multivalent vaccines after the second injection were equal to or even greater than the highest antibody levels of single DNA vaccine reported in literature after third injections. Antibody titer of MPT-64 was 1∶50 after the first injection and it reached 1∶200 after the second injection. No antigen-specific antibody against ESAT-6 was detected in sera harvested from immunized mice 21 days after both injections. Antigen-specific IFN-g level of Ag85B was 110 pg/mL while no antigen-specific IFN- g level of ESAT-6 and MPT-64 was detected even after third injections. To our knowledge, it is the first time that studies of polyvalent recombinant DNA vaccines against TB were carried out in C57BL-6 mice. Our results indicated that multiple DNA vaccines could be used to enhance protective responses against M.TB.     

几种常用ND HI试验方法的比较与分析

对几种常用ND HI试验方法作比较，结果表明，在全量法和微量法中以生理盐水为稀释液，以1％红细胞悬液作反应指示剂和100％凝集抑制为判定终点的方法效果为佳，全量法测得的HI滴度较微量法的约高0．5－1个滴度，其灵敏度和准确性较高，从而更适于实际工作中ND抗体水平的免疫监测。     

Beagle犬免疫血清Ⅰ型腺病毒抗体检测

目的为Beagle犬犬传染性肝炎(ICH)的预防制定合适的免疫程序提供依据。方法采用间接血凝抑制实验对24头Beagle犬(雌雄各半,20日龄～14周龄)注苗前后120份Beagle犬血清I型犬腺病毒血凝抑制抗体(HI)进行检测。结果注苗前20日龄仔犬血清母源性HI抗体效价为1:8～1∶32(平均1∶20),35日龄仔犬血清母源HI效价下降为1∶2～1∶8(平均1∶5);首免后2w(56日龄)血清HI效价上升为1∶8～1∶32(平均1∶14),二免后3w(77日龄)血清HI抗体效价上升为1∶32～1∶128(平均1∶45),三免后3w(98日龄)血清HI抗体效价继续上升为1∶64～1∶256(平均1∶79)。结论预防Beagle犬犬传染性肝炎(ICH)建议使用FiveStar犬五联弱毒疫苗,首免为35～40日龄,每间隔3w进行二免和三免加强。     

一种高效制备高特异性高亲和力单克隆抗体的工具--无抗原小鼠的培育

目的　为了寻找一种新的高效制备高特异性高亲和力单克隆抗体的工具 ,提高工作效率 ,增强诊断试剂科学性和准确性。方法　利用无菌隔离器技术 ,无抗原饲料 (由氨基酸、碳水化合物、维生素、必需矿物质、植物油等组成的分子量小于 80 0 0的化合物 )喂养无菌小鼠 ,将无菌小鼠培育成无抗原小鼠。结果　经ELISA方法检测该小鼠血清中IgG的含量 ,其含量是CV和GF小鼠的 5 % - 10 %。结论　无抗原技术已完全成熟 ,无抗原小鼠培育成功。由于该无抗原小鼠未接受过外源性抗原的刺激 ,可利用该动物制备高特异性、高亲和力的单克隆抗体     

温和气单胞菌单克隆抗体的制备及特性分析

利用细胞融合技术建立了5株分泌抗温和气单胞菌CR79-1-1株单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞系,通过特异性鉴定获得两株与参考菌株中的温和气单胞菌发生反应,但与嗜水气单胞菌以及鳗弧菌、爱德华氏菌、克鲁氏耶尔森菌、大肠杆菌、荧光假单胞菌均不反应的杂交瘤细胞系,分别命名为2G3和1A4.快速酶联免疫分析法(ELISA)测得2G3和1A4的亲和常数分别为1.72×108和5×108M-1;应用方阵配对实验证实,2株单抗针对特异性抗原上不同表位.