植物乳杆菌Y42无细胞培养上清抑制单增李斯特菌生物膜形成研究

为研究植物乳杆菌Y42无细胞培养上清对单核细胞增生李斯特菌(LM)生物膜形成的抑制作用,采用微孔酶标板刃天青显色法确定Y42上清的最小抑菌质量浓度(MIC),微孔酶标板结晶紫染色法检测Y42上清对LM生物膜形成的影响,软琼脂法测定Y42上清对LM爬行运动性的影响。结果显示Y42上清最小抑菌质量浓度为60mg/mL;当Y42上清作用质量浓度为MIC的1/32、1/16、 1/8、 1/4、 1/2时,LM的运动圈直径由81.15mm减小为78.31、 75.35、 69.51、 54.91、33.09mm,对LM生物膜形成的抑制率达到32.90%、 30.81%、 40.75%、 39.93% 、12.15%;普通光学显微镜在10×40倍放大倍数下,观察到Y42上清可显著减少LM在盖玻片上形成生物膜的量。Y42无细胞培养上清可通过抑制LM的运行性来抑制其生物膜的形成。     

白及多糖提取工艺及抑菌活性检测

以水提醇沉法提取白及多糖,以不同料液比、提取温度和提取时间作为实验条件,以白及多糖提取率为指标进行正交实验,从而确定最佳的提取工艺.在最佳条件下将提取得到的白及多糖以合适的用量和添加方式加入到膏剂中制成白及膏.采用滤纸片扩散法测定白及多糖提取液和白及膏对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的生长抑制作用.结果表明,白及多糖最佳提取工艺为料液比1∶35（g∶mL）,提取温度80 ℃,提取时间4.0 h,在此提取条件下,白及多糖得率为25.97%.当质量浓度达到0.33 g/mL时,白及多糖对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌均有抑制作用;当质量浓度提高至0.66 g/mL时,白及多糖提取液抑菌效果较强,对大肠杆菌的抑菌效果优于市售的一夫百应抑菌膏.白及膏性能稳定,对大肠杆菌抑菌效果强于金黄色葡萄球菌.     

银杏叶总黄酮的微波提取及纯化工艺研究

通过正交设计确定银杏叶总黄酮用微波提取的最佳工艺,对溶剂浓度、料液比、提取时间和提取次数4个因素进行考察,确定其对银杏叶总黄酮提取率的影响,最佳提取条件为乙醇浓度60%、料液比1∶70、提取2次、提取时间3min,银杏叶总黄酮得率为2.061%。银杏叶总黄酮进一步采用大孔树脂分离纯化,以黄酮含量为指标确定其最佳工艺参数,选定D101型大孔树脂,以80%乙醇、2倍柱体积/h的流速洗脱、收集乙醇洗脱液至3倍柱体积,为最佳工艺。经D101型大孔树脂纯化后,提取物中黄酮含量由17.08%提高到44.17%。     

刺五加多糖的提取及其抗氧化性

用热水浸提法提取刺五加多糖, 用乙醇对其分级沉淀, 当乙醇的体积为提取液的1倍时, 多糖沉淀量最大, 随着乙醇用量增加, 各级产物减少, 其多糖的总收率为原刺五加质量的0.54%. 用邻苯三酚法及fenton体系测定各分级产物对O₂^-和 ·OH的抑制作用, 随着乙醇用量增加, 其产物的抗氧化能力增强, 当乙醇用量是提取液体积的6倍时, 其产物对O₂^-的清除率最大可达47.7%; 当乙醇用量达4倍时, 其产物对·OH的清除率最大达68.2%. 刺五加多糖对红细胞膜脂质过氧化的抑制作用随糖浓度的增加而加大, 当多糖浓度在0.4　g/L以上时, 不仅H₂O₂ 对红细胞膜的氧化作用完全被抑制, 而且对红细胞膜产生还原作用.     

桑叶多糖提取及抑菌实验研究

以超声波辅助水提醇沉法提取桑叶多糖,采用正交实验法优化桑叶多糖的提取工艺;采用滤纸片法进行抑菌试验评价桑叶多糖体外抑菌作用。实验考察提取时间、液固比、提取温度等因素对桑叶多糖提取率的影响,观察桑叶醇提物和桑叶多糖对枯草芽孢杆菌、大肠杆菌抑制作用。实验结果证明:超声波提取时间50 min,液固比40:1(m L.g~(-1)),提取温度为70℃,其桑叶浸提液中的多糖得率达到5.50%,体外抑菌实验结果显示桑叶醇提物对枯草芽孢杆菌、大肠杆菌有明显的抑制作用,桑叶多糖对这两种菌则没有抑制作用。     

艾草抑菌抗炎作用研究

研究艾草（Artemisia argyi）水煎液的抑菌抗炎作用。用试管二倍稀释法和牛津杯法测定艾草水煎液的最低抑菌浓度（Minimum Inhibitory Concentration，MIC）、最低杀菌浓度（Minimum Bactericidal Concentration，MBC）和抑菌直径；用乙酸致小白鼠毛细血管通透试验、二甲苯致小白鼠耳肿胀试验及小白鼠棉球肉芽肿增生试验测定艾草抗炎效果。结果表明艾草具有一定的抑菌抗炎作用，艾草对大肠杆菌的MIC和MBC分别为0.125和0.25 g/mL；艾草水煎液（1.0 g/L）对大肠杆菌的抑菌圈直径为16.622 mm，为高度敏感。艾草高、中、低浓度组对小白鼠毛细血管通透性增高的抑制率分别是29.107%、27.143%和16.607%；艾草高、中、低浓度组对小白鼠耳肿胀抑制率分别是25.045%、21.779%和5.082%；艾草高、中、低浓度组对小白鼠肉芽肿增生抑制率分别是19.990%、9.101%和2.611%。这表明艾草具有一定的抑菌抗炎作用，且抑菌抗炎作用在有限范围内随药物浓度增加而增加。     

鲍曼不动杆菌生物膜抑制剂的设计合成及其活性测试

国内外临床实践和研究结果均证明细菌的耐药性、慢性感染疾病难以治愈和反复发作都与细菌的生物膜密切相关。生物膜顽固的黏附性和致密性对游离细菌的保护,使得细菌对抗生素的耐药性增加10~1000倍。基于群体行为控制的生物膜抑制剂开发有望提供解决思路,为此合成出9个具有生物膜抑制作用的化合物,并测试其生物膜抑制活性。研究发现在20μmol的抑制剂条件下,其中8个化合物均显示鲍曼不动杆菌的生物膜抑制活性,其中2个化合物在20μmol条件下生物膜抑制率超过60%,并且通过扫描电镜观察研究细菌在硅胶片表面的生长情况,在添加化合物6的硅胶片表面并未形成生物膜群落,而在未添加化合物的硅胶片表面形成了生物膜群落,进一步说明了合成化合物对生物膜的抑制作用。     

黄酮类化合物在银杏不同部位含量的分布

目的研究银杏不同部位中的黄酮类化合物含量的分布规律。方法采用有机溶剂索氏提取法,利用分光光度计、高效液相色谱等分析仪器对几种银杏叶、银杏外种皮、银杏果梗中黄酮类化合物活性成分进行了提取和含量测定,并对其分布规律进行了分析研究。结果黄酮类化合物在银杏叶中质量分数为1.9%左右,在银杏梗中的质量分数为0.5%-0.7%,在外种皮中的质量分数为0.1%-0.8%。结论银杏叶中黄酮类化合物含量最高,是理想的提取原料;银杏叶梗和外种皮中含较少量的黄酮,从资源综合利用和环保角度考虑,同样可作为提取原料。     

芦笋总皂苷对人乳腺肿瘤细胞MCF-7体外增殖的影响

为了研究芦笋总皂苷对人乳腺肿瘤细胞MCF-7体外增殖的影响,利用超声波辅助法提取芦笋总皂苷,MTT法检测芦笋总皂苷对人乳腺肿瘤细胞MCF-7的药物敏感性.结果表明,质量浓度为150,350 mg/L的芦笋总皂苷对乳腺肿瘤细胞的增殖具有促进作用;质量浓度750mg/L时,具有抑制作用,抑制率为19.46%,之后抑制率随质量浓度增加而增加;质量浓度1 550mg/L,抑制作用最大,抑制率为54.14%.说明低质量浓度的芦笋总皂苷对人乳腺肿瘤细胞MCF-7的体外增殖具有促进作用,高质量浓度具有抑制作用并呈剂量依赖性.     

两种苦瓜多糖对人白血病细胞体外增殖的影响

采用热水浸提法提取苦瓜粗多糖,经DEAE-52纤维素层析柱对其进行分离纯化,以蒸馏水和0.1mol/L NaCl进行洗脱,分别得到水洗苦瓜多糖(W-MCP)和盐洗苦瓜多糖(S-MCP).采用MTT法对这两种苦瓜多糖对人白血病系细胞K562体外增殖抑制作用进行研究,并对其抗氧化(O2-.、DPPH和脂质过氧化)活性进行测定.结果显示:W-MCP和S-MCP对K562细胞的抑制作用随着时间延长而增强,48h时抑制率趋于稳定,在72h、400μg/mL下W-MCP和S-MCP的最大抑制率分别为30.46%和28.61%;W-MCP和S-MCP对O2-.的最高清除率分别为58.52%和44.71%,对DPPH自由基的清除作用随浓度的升高而降低,最高清除率分别为19.01%和30.11%,对脂质过氧化反应的抑制作用都较小,可见苦瓜多糖具有一定的抗氧化和抑制癌细胞增殖作用.     

黄芩提取物对脓肿分枝杆菌生长及生物膜形成的影响

为了研究黄芩提取物对脓肿分枝杆菌浮游细菌及生物膜的影响，本研究以脓肿分枝杆菌标准菌株ATCC 19977以及临床分离株作为受试菌，采用Alarmar-Blue液体药敏法测定黄芩提取物对脓肿分枝杆菌的最小抑菌浓度（MIC），平板涂布法测定最小杀菌浓度（MBC），结晶紫染色法和扫描电子显微镜分析黄芩提取物对脓肿分枝杆菌生物膜形成量及形态结构的影响，进一步采用了RT-qPCR探究黄芩提取物对分枝菌酸合成相关基因表达的影响.结果表明黄芩提取物对脓肿分枝杆菌标准菌株ATCC 19977以及8株临床分离株的MIC90为50~100 mg/mL，MBC为50~200 mg/mL；黄芩提取物可显著降低脓肿分枝杆菌生物膜形成量（P<0.05），破坏生物膜的结构，并且显著降低分枝菌酸合成相关基因表达量（P<0.01）.本研究表明黄芩提取物能够抑制脓肿分枝杆菌的生长以及生物膜的形成.     

痤疮丙酸杆菌亚油酸异构酶的克隆表达 及酶学性质研究

为了研究使用生物酶法制备共轭亚油酸的可行性,笔者对痤疮丙酸杆菌亚油酸异构酶进行了异源表达和理化性质研究。根据大肠杆菌偏好密码子,优化了来源于痤疮丙酸杆菌亚油酸异构酶(PAI)的基因(pai),将克隆的基因在BL21(DE3)中进行表达,纯化目的蛋白,获得重组PAI蛋白。SDS-PAGE结果显示,重组PAI分子质量为48 ku,重组蛋白主要以包涵体沉淀的形式存在。经测定重组PAI在35 ℃、pH 7.0时酶活最高,比酶活为752.3 μmol/(min·mg)。经35 ℃保温2 h,酶活保持90%以上,pH 为6.5～7.0时,PAI具有较好的稳定性,Mn²⁺和Zn²⁺对酶活力分别有22.4%和15.8%的抑制作用,以亚油酸为底物时该酶的K_m值为1.13 mmol/L, k_cat为4.67 s^-1。相关分析表明,痤疮丙酸杆菌亚油酸异构酶性质优良,适合以亚油酸为底物生物催化制备共轭亚油酸。     

发酵乳杆菌 B44 益生性能的体外评价

发酵乳杆菌 B44 是一株分离自保加利亚家庭手工制作酸奶的乳酸菌株. 体外实验发现: 发酵乳杆菌 B44 具有较强的疏水性(79.67%)和低酸高碱的静电作用, 可耐受 1 mg/mL 溶菌酶, 在口腔中具有较佳的黏附和存活能力; 此外, 具有较高的自聚率(13.34%)以及与变形链球菌(Streptococcus mutans)的共聚集作用, 当与变形链球菌共培养时能抑制变形链球菌生物膜的形成, 其抑制率可达 63.43%. 实验表明, 发酵乳杆菌 B44 对人类龋病的防治能起到一定的积极作用, 是一株潜在的口腔益生菌, 在人类口腔健康中具有良好的应用前景.     

Box-Behnken Design响应面法优化银杏叶总黄酮柱层析纯化工艺

为得到质量分数较高的银杏叶总黄酮提取物,在单因素试验基础上,以上样质量浓度、乙醇体积分数、洗脱液接收体积和洗脱流速为考察因素,以银杏叶总黄酮质量分数、收率为考察指标,采用BBD(Box-Behnken Design)响应面法对银杏叶总黄酮柱层析纯化工艺进行优化。得到最佳工艺为上样质量浓度3.1 mg/mL,乙醇体积分数71%,洗脱液接收体积2 BV(BV为装柱体积)及洗脱流速2 BV/h。在最佳工艺条件下,完成三批验证实验,银杏叶总黄酮平均质量分数可达到35.77%,收率为93.30%,银杏总内酯质量分数达到《中国药典》标准。利用BBD响应面法优化银杏叶总黄酮柱层析纯化工艺是科学、合理、可行的,可为工业化大生产提供参考。     

基因筛选克隆表达原花青素降解酶及其酶解条件优化的初步研究

针对化学法制备低聚原花青素存在环保压力和副产物多等问题，研究了通过生物酶法降解高聚原花青素来制备低聚原花青素的方法。首先通过基因筛选方法筛选出SananA和EcnanA基因用于酶法降解高聚原花青素，将SananA和EcnanA基因连接在不同质粒载体表达蛋白的结果表明，SananA基因连接在pETDuet-1载体上时的蛋白表达效果较优。进而，利用纯化的SananA蛋白优化高聚原花青素降解条件，结果显示较优的酶解条件为温度50℃、pH=10、反应时间8 h，在此条件下原花青素单体积累量为35.67 mg/g，二聚体积累量为14.49 mg/g。     

氯离子对AZ91镁合金微生物腐蚀的影响

摘 要：本文研究了Cl-对AZ91镁合金微生物腐蚀的影响。硫酸盐还原菌(SRB)在镁合金表面形成生物膜,能够对Cl-穿透生物膜到达金属表面起到阻挡作用。随着Cl- 浓度的增加,镁合金在含菌培养基中的平均腐蚀速度逐渐增加,腐蚀电位逐渐降低。当含菌培养基中的Cl-浓度小于1.5g/l时,Cl-对镁合金微生物腐蚀的影响不大;当Cl-浓度大于1.5g/l时,微生物生物膜的存在显著地降低了镁合金对Cl-的腐蚀敏感性。     

鹅掌楸树叶和树皮提取物的抑菌活性研究

林源生物活性物质的研究和利用是森林资源利用的重要方面。为研究重要的药源植物鹅掌楸属植物树皮及树叶提取物的抑菌活性,用琼脂稀释法检测鹅掌楸属不同种间和种内树皮及叶片提取物对大肠杆菌、绿脓杆菌、金黄色葡萄球菌和粪链球菌的抑菌反应。结果表明:鹅掌楸属3个树种的树皮和树叶提取物对大肠杆菌、绿脓杆菌、金黄色葡萄球菌和粪链球菌有明显的抑菌效果; 树皮提取物对大肠杆菌、绿脓杆菌、金黄色葡萄球菌及粪链球菌的最低抑菌质量浓度(MIC)分别为5.12、0.64、0.64 和0.64 mg/mL; 树叶提取物的MIC分别为40.96、2.56、2.56和2.56 mg/mL。鹅掌楸属树种不同部位的提取物抑菌效果有明显差别,树皮提取物抑菌效果强于树叶提取物,但不同种间提取物的抑菌效果差异不显著。     

狼爪瓦松提取物对伤寒杆菌和痢疾杆菌的抑菌活性机制

研究狼爪瓦松提取物对伤寒杆菌和痢疾杆菌的抑菌效果及机理.实验结果表明:乙酸乙酯相、石油醚相和氯仿相对伤寒杆菌和痢疾杆菌有明显的抑菌效果,与对照组相比差异极显著(p0.01),各提取物对实验菌的最小抑菌质量浓度(MIC)差异较大,乙酸乙酯和石油醚提取液对伤寒杆菌的MIC为1.5 mg/mL,乙酸乙酯提取液对痢疾杆菌的MIC为1mg/mL;各种瓦松提取液作用于伤寒杆菌和痢疾杆菌可导致菌体内有电解质渗透,与对照组相比差异显著(p0.05),即瓦松提取液可能通过干扰细菌细胞壁的合成以及抑制生物被膜的形成而抑制伤寒杆菌和痢疾杆菌生长,其抑制作用随提取液质量浓度的提高及作用时间的延长而提高.     

In vitro antibacterial and osteogenic properties of plasma sprayed silver-containing hydroxyapatite coating

The objective of the present investigation was to characterize the antibacterial and osteogenic properties of plasma sprayed silver-containing hydroxyapatite （HA/Ag） coating in vitro. HA/Ag coating was deposited via vacuum plasma spraying. The concentration of silver ions released from HA/Ag coating, the efficacy of the HA/Ag coating against bacterial biofilm development, the effect of the HA/Ag coating on early adhesion and ossification of osteoblast cells in vitro was measured. The silver ion concentration released from the HA/Ag coating was between the minimum inhibitory concentration to bacteria and the cytotoxic concentration. Bacterial biofilm inhibition studies indicated an antibacterial activity on the HA/Ag coating surface when compared with hydroxyapatite （HA） coating alone. Moreover, it was demonstrated that osteoblast cell adhesion and mineralization occurred on the HA/Ag coating surface during the testing period. We conclude that the vacuum plasma sprayed HA/Ag coating possesses good antibacterial capability and osteogenic properties in vitro and represents a promising candidate for coating orthopedic implants.