黄腐酚逆转B16-F10黑色素瘤细胞恶性表型

本研究从体外增殖、细胞周期分布、克隆形成和迁移能力、黑色素合成以及糖酵解水平等考察了黄腐酚(XN)对B16-F10高转移潜能小鼠黑色素瘤细胞恶性表型的影响。结果表明，XN明显抑制B16-F10细胞增殖、克隆形成和体外迁移，阻滞细胞周期于G0/G1期，并上调细胞黑色素合成水平。同时发现XN下调B16-F10细胞的葡萄糖摄取，降低乳酸脱氢酶和己糖激酶活性及NAD⁺/NADH比率，下调缺氧诱导因子1(HIF-1α)和沉默信息调节因子2相关酶1(SIRT1)表达。另外，XN明显延长荷B16-F10黑色素瘤小鼠生存期。总之，本研究表明XN逆转B16-F10黑色素瘤恶性表型，并发挥抗肿瘤增殖和转移活性，或与其调控肿瘤糖代谢效应相关。     

分化诱导因子–3对黑色素瘤细胞增殖及趋电性的影响

为探讨分化诱导因子(DIFs)对黑色素瘤细胞B16-F10增殖及趋电性的影响,利用MTT法检测不同浓度的DIF-1、DIF-3和Br-DIF-1处理后的B16-F10,并分别从单细胞、成片细胞和单层细胞三个层面研究DIF-3是否影响B16-F10细胞的趋电性.结果显示,DIF-3处理24h就可以明显抑制B16-F10细胞增殖;在直流电场作用下,DIF-3抑制单细胞、成片细胞和单层细胞的运动速度,但运动方向不受影响.     

培养基诱导B16细胞黑色素合成及机理研究

研究不同培养基对B16细胞体外培养生物学特性的影响及其黑色素表达能力与相关分子作用机制.方法:利用不同培养基对B16细胞进行体外连续传代培养,考查培养基对细胞形态、细胞成活率、细胞周期和黑色素合成等方面的影响.同时,借助RT-PCR、Western Blot和双向电泳等技术,研究与黑色素生物合成相关蛋白质的表达水平.结果:B16细胞在Gibco-RPMI-1640-31800和Gibco-DMEM-12800这两种培养基中培养时,细胞外观形态良好、细胞活力强、传代周期短并且均可稳定连续传代培养,两者的细胞周期也一致;B16细胞在GibcoRPMI-1640-31800培养基中基本不合成黑色素,而在Gibco-DMEM-12800培养基能大量合成黑色素.分析B16细胞中三种黑色素合成相关蛋白质(Tyrosinase,Tyrosinase-related protein 1和Tyrosinase-related protein 2)在以上两种培养基中表达的差异,发现这三种蛋白质的m RNA转录水平基本没有差异,在Gibco-DMEM-12800培养基中这三种蛋白质的翻译水平均明显提高,总蛋白质组也更加多样.结论:Gibco-DMEM-12800培养基通过提高Tyrosinase、TRP1和TRP2等三种蛋白质的翻译水平使B16细胞黑色素大量合成.     

利用亲和质谱技术从中药材提取物中筛选马尔堡病毒核蛋白的小分子配体

马尔堡病毒的RNA基因组编码7种结构蛋白,其中核蛋白在基因组的复制和核衣壳形成中发挥重要作用,成为十分有吸引力的抗病毒药物潜在靶标.实验利用亲和质谱技术从甘草提取物中筛选马尔堡核蛋白的配体.首先从甘草粗提物中发现了可能与蛋白结合的配体甘草查尔酮A.在此基础上,对甘草中已知组分的单体混合物和甘草查尔酮A单体分别进行亲和质谱分析,验证了粗提物的质谱筛选结果.而后进一步利用SPR实验确认甘草查尔酮A单体对核蛋白靶标的结合作用,进而通过一系列生化实验发现该单体对马尔堡核蛋白热稳定性和构象均能产生功能性影响.实验发展的亲和质谱技术为从中草药提取物中直接筛选新型抗病毒药物分子提供了简便高效的新方法.     

中草药对铜绿假单胞菌及其群体感应抑制作用

为了筛选对多重耐药铜绿假单胞菌具有抑菌作用的中草药,并筛选铜绿假单胞菌的群体感应蛋白LasR的抑制剂,本实验利用纸片扩散法对59株临床分离的铜绿假单胞菌和1株PAO1进行抗生素药敏试验,并对其中3株菌进行中草药提取物体外抑菌试验,通过检测报告质粒中β-半乳糖苷酶的活性来筛选LasR蛋白抑制剂。实验发现,丁香、赤芍等中药粗提物具有良好的抑菌效果,部分中草药可通过影响LasR蛋白的水溶性或信号分子与受体蛋白的结合来实现对细菌群体感应的调控。     

补骨脂胰蛋白酶抑制剂的提取及其特征

前文~(1)我们报道了从五十种中草药中筛选出补骨脂、黑豇豆、天花粉等八种含有胰蛋白酶抑制剂的活性植物物质。本文报道补骨脂胰蛋白酶抑制剂的分离纯化及其一些特性。材料和方法(一)实验材料及其预处理1.补骨脂购自省医药采购供应站。将补骨脂装入索氏提取器,用氯仿抽提六小时,风干后粉碎,经80目筛筛分备用。2.胰蛋白酶新疆伊犁地区肉联厂生化制药厂产品。3.羊胰蛋白酶结晶品。上海生化所东风试剂厂产品。(二)底物及试剂     

银杏酸GA1对酪氨酸酶和黑色素瘤细胞的作用

对银杏外种皮提取的银杏酸通过制备型HPLC进行分离纯化,得到同系物单体GA1.研究GA1对酪氨酸酶的作用机理和对黑色素瘤细胞B16的作用.结果表明GA1可抑制酪氨酸酶单酚酶活力,对酪氨酸酶双酚酶具有较强的竞争性可逆抑制作用.低浓度GA1对黑色素细胞没有明显的杀伤作用,能明显降低细胞中黑色素的表达,是良好的酪氨酸酶抑制剂.     

营养物失衡是维持癌细胞恶性生长的因素之一--DMEM培养基使黑色素瘤B16细胞的恶性生长抑制

对小鼠黑色素瘤B16细胞在DMEM和RPMI1640两种培养基中培养产生的活细胞数和黑色素量进行了检测.结果显示,该癌细胞在DMEM培养基中培养产生的活细胞数比在RPMI1640培养基中培养产生的活细胞数平均减少87.9%,而黑色素量平均增加795%.以"黑色素量/活细胞数"计算分化指数,再以"DMEM中的分化指数/1640中的分化指数"计算DMEM相对于1640的对B16细胞的分化指数,显示DMEM中的分化指数平均是1640中的分化指数的67.8倍.提出营养物失衡是维持癌细胞恶性生长的因素之一.     

2种咖啡酸吗啉胺的合成及其对酪氨酸酶的激活和对黑色素合成的调控

合成了2种新型咖啡酸衍生物咖啡酸-2-氨乙基吗啉胺(C-1)和咖啡酸-N-氨丙基吗啉胺(C-2),并通过质谱、核磁共振以及红外光谱技术鉴定其结构.2种化合物对蘑菇酪氨酸酶具有良好的激活效果,其对于酪氨酸酶活性的半激活质量浓度(EC_(50))分别为0.06和0.12 mmol/L,且2种化合物的激活类型均为混合型激活.通过紫外-可见光谱法验证了C-1和C-2对酪氨酸酶的激活作用.通过荧光猝灭和分子模拟进一步分析了2种化合物与酪氨酸酶之间的相互作用,结果表明两者对酪氨酸酶的影响可能是基于化合物的碳链长度.2种化合物对人体正常肝细胞LO2无毒性,并能够增强人体黑色素瘤细胞M14中的酪氨酸酶活力.进而对M14细胞中黑色素合成相关蛋白的研究发现,2种化合物对酪氨酸酶蛋白(TYR)、酪氨酸酶家族相关蛋白(TRP-1和TRP-2)以及α-促黑色素激素(α-MSH)的表达量均起上调作用.综上所述,该化合物有望提供一种有效治疗酪氨酸酶失调的新方法.     

补骨脂酚对阿霉素心肌细胞损伤的保护作用及机制研究

探究补骨脂提取物补骨脂酚(Bakuchiol,BAK)是否可以减轻ADR引起的心肌细胞损伤及其作用机制。首先建立损伤合适的H9c2心肌细胞ADR损伤模型,采用不同浓度BAK处理,观察其对心肌细胞ADR损伤是否有保护作用并筛选最佳保护浓度。检测的指标包括:细胞活力、凋亡率、活性氧(ROS)含量以及培养液中乳酸脱氢酶(LDH)水平,并用Western blot检测AMPK/PGC1α通路相关分子表达情况,初步明确该通路在BAK抗ADR心肌损伤中的作用。ADR可显著降低H9c2细胞的活力,并呈浓度依赖性,当浓度为2μM时损伤明显,用于进一步研究。BAK对H9c2细胞有明确的保护作用,当其浓度为1. 25μM时效果最佳,具体表现为:细胞活力增加、凋亡率下降、ROS含量下降以及培养液中LDH水平下降。Western结果显示,BAK可以逆转ADR下调的p-AMPK和PGC1-α蛋白表达。BAK可显著减轻ARD引起的H9c2心肌细胞损伤,其作用跟激活AMPK/PGC1α信号通路有关。     

温和气单胞菌对10种中草药耐药性的初步研究

利用纸片扩散法和二倍稀释法分别测定10种中草药沸水提取物的抗菌活性和最低抑菌浓度。结果表明所选取的10种生药中，五倍子（Rhus chirensis M）、黄柏（Phellodendron anurense R）、大黄（Pheumofficinale B）、野菊（Chrysanthemum morifolium Ramat）的抑菌性强，抑菌效果好，缺点是药力减退快。地榆（Sanguisorba officinalis L）、黄连（Coptis chinensis Franch）、黄芩（Scutellaria baicalensis G）、乌梅（Prunus mune S.et Z.）抑菌性没有以上4种强，但药效持久，稳定。由此可见，利用中草约对温和气单胞菌能够起到抑杀作用。在实际生产中，运用五倍子、黄柏、大黄、乌梅、地榆是治疗气单胞菌引起的疾病是较为理想的选择。     

中药双联用复方对养殖鳗鲡主要致病菌的抑制作用研究

筛选单用抑菌作用较强的6种中药药材,依据棋盘法设计15种双联用复方,采用超微药粉琼脂稀释法测定各系列浓度组合的复方对养殖鳗鲡18株常见致病菌的抑制作用.实验结果表明,15种双联用复方对18株致病菌中绝大多数菌株的抑制作用比6种中药单用的抑菌作用强,呈现协同效应(FIC≤1)的比例占85.7%,其中显著协同(FIC≤0....     

上三角算子矩阵值域的闭性

设A∈B(H),B∈B(K),定义MC=(A C0B),其中C∈B(K,H)。基于算子分块的技巧,讨论了当R(A),R(B)都是闭的时候,对每一C∈B(K,H),R(MC)是闭的充要条件。进而研究了:(ⅰ)当R(A)不闭,R(B)闭时,以及当R(A)闭,R(B)不闭时,对任意C∈B(K,H),R(MC)不闭的充要条件;(ⅱ)当R(A),R(B)同时不闭时,对任意C∈B(K,H),R(MC)不闭的充要条件。     

黑种草籽调节黑素合成的药效物质基础

以高效液相色谱( HPLC)法对黑种草籽不同体积分数的醇提取物进行色谱峰表征,以体外培养的小鼠B16黑素瘤细胞为模型,采用MTT法测定黑种草籽不同体积分数的醇提取物对B16黑素瘤细胞增殖的影响,采用L-DOPA氧化法测定黑种草籽不同体积分数的醇提取物对B16黑素瘤细胞酪氨酸活性的影响,采用NaOH裂解法测定黑种草籽不同...     

中国汉族人群MC1R基因多态与皮肤颜色等表型特征关联研究

皮肤癌是一种比较常见的肿瘤,在西方人群中研究表明,通过影响皮肤颜色等色素表型特征,黑色素生成通路中相关基因多态性(MC1R等)可增加皮肤癌发生风险.本研究首次在中国汉族人群中选择MC1R基因编码区的多态位点为研究对象,分析其与中国汉族人群的皮肤颜色、对阳光的敏感性、雀斑情况及头发颜色的关联性.在MC1R基因编码区发现7个SNP位点:c.200G>A,c.274G>A,c.359T>C,c.421G>A,c.488G>A,c.497C>G和c.942A>G.其中c.421G>A为新发现的SNP位点,c.497C>G则首次在中国汉族人群中报道.c.942A>G与皮肤颜色相关,其突变纯合基因型GG与皮肤颜色浅显著相关(P=0.044,OR=0.16,95%CI:0.03～0.95).c.359T>C杂合基因型TC与雀斑数目多显著相关(P=0.040,OR=5.76,95%CI:1.05～31.53),表明MC1R基因多态与中国汉族人群的皮肤颜色等色素表型特征具有一定相关性,为相关临床研究提供了参考.     

7种黔产补益类中草药抗氧化性的研究

共选取7种黔产补益类中草药白术、太子参、何首乌、淫羊藿、麦冬、石斛、黄精,测定其水提取液和乙醇提取液对自由基.OH、O2-.和DPPH.的清除能力,并和维生素C的抗氧化能力进行比较,对其抗氧化能力进行评价.本实验还以烘箱试验来研究这些中草药抗菜籽油氧化的作用.结果表明,这7种补益类中草药对.OH、O2-.、DPPH.均具有一定抗氧化作用,并且能很好地抑制菜籽油氧化.     

以鼠腹腔微环境研究三氧化二砷对食管癌EC109细胞骨架的影响

目的:细胞骨架微丝是与肿瘤细胞生长密切相关的因素之一,本文以生物机体腹腔为免疫的微环境,研究化疗药物三氧化二砷(As2O3)对人食管癌细胞株微丝骨架的影响.方法:利用鬼笔环肽(Phalloidin)及碘化丙碇(Propidium Iodide,PI)标记,以流式细胞仪技术分析小鼠腹腔液中食管癌EC109细胞周期的各期细胞内F-actin的变化.结果:诱导肥大细胞(mast cell,MC)迁移入腹腔的同时,迅速升高G0/G1期细胞及降低S期细胞内的F-actin含量,DNA检测结果显示G0/G1期的肿瘤细胞数量迅速增加(p<0.05),S期细胞含量降低;三氧化二砷作用后,食管癌细胞各期的F-actin含量均降低,尤其S期为甚.MC和As2O3共同作用后,食管癌细胞各期的F-actin含量均也减少,但G0/G1期细胞数量却显著增加.结论:在小鼠腹腔微环境中,免疫功能改变(免疫细胞MC的聚集)引起G0/G1期细胞数量迅速升高、S期细胞的数量降低,可能促使EC109细胞G0/G1期向S期跨越的延迟;在此环境中,As2O3也可能通过抑制S期EC109细胞内F-actin的重组来延迟细胞从G0/G1期进入S期;诱导肥大细胞迁入腹腔的同时加入药物As2O3,其作用主要表现为短期效应,促进了肿瘤细胞内F-actin含量的降低,G0/G1期细胞数量较高,出现短暂的延迟G0/G1期向S期跨越,增强了对肿瘤细胞生长的抑制作用.因此,以生物机体为研究环境,可能更真实地呈现化疗药物对肿瘤细胞的治疗效果.     

复方中草药添加剂对银香鸡生长性能及免疫功能的影响

选用黄芪、党参、当归、枸杞子、刺五加、山楂和甘草7种补益类中草药作饲料添加剂,添加到银香雏鸡日粮中进行饲养试验,以研究复方中草药添加剂对银香鸡生长性能和免疫机能的影响。试验各组基础日粮相同,试验组添加1%中草药,抗生素对照组添加50mg/kg杆菌肽梓,空白对照组只是基础日粮。试验测定试验鸡体重、增重及免疫器官相对重,于3周龄时接种新城疫疫苗检测血清抗新城疫抗体效价评价中草药添加剂的免疫促进作用。结果表明,6周龄试验组鸡体重和增重与抗生素对照组体重和增重相比差异不显著(P0.05),与空白对照组体重和增重相比差异显著(P0.05),复方中草药添加剂与抗生素具有同样的促生长作用;试验组脾脏和法氏囊相对重,血清抗新城疫抗体效价都显著高于对照组,复方中草药饲料添加剂对银香鸡有免疫促进作用。     

金雀异黄素对小鼠黑色素瘤B16BL6细胞增殖、迁移和黏附的影响

利用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法、细胞划痕实验和细胞黏附实验等研究了金雀异黄素对小鼠黑色素瘤B16BL6细胞增殖、迁移以及与血管内皮细胞黏附的影响;利用免疫荧光实验观察了金雀异黄素对B16BL6细胞中微管和肌动蛋白分布的影响.结果表明,与对照组相比,金雀异黄素可以抑制B16BL6细胞的增殖、迁移和与血管内皮细胞的黏附,影响B16BL6细胞中肌动蛋白的组装,但不影响细胞中微管的组装.这些结果提示,金雀异黄素抑制B16BL6细胞的增殖、迁移和与血管内皮细胞的黏附可能是通过诱导细胞中肌动蛋白的重排来实现的.     

高腐蚀条件下用铝合金材料腐蚀机理

铝合金具有低密度、低熔点、高比强度及优良的耐腐蚀性能等特点，被广泛用于航空航天、建筑、船舶等领域。在服役过程中，铝合金的表层氧化膜易受到环境中活性阴离子的破坏而发生腐蚀，对其性能造成严重的损害，故研究铝合金在高腐蚀性环境的腐蚀行为对工程选材具有非常重要的指导意义。选择6061铝合金、2195铝锂合金和7075铝合金为研究对象，对其在特定腐蚀介质中的腐蚀过程和力学性能进行分析，研究了铝合金在特定腐蚀介质中腐蚀形貌与力学性能的变化规律。结果表明：腐蚀初期，在高Cl^-、NO₂^3-、SO₂^4-离子浓度的腐蚀环境中，3种铝合金的氧化膜受到阴离子破坏后发生点腐蚀，使基体暴露在腐蚀环境中，进而发生电化学腐蚀，6061铝合金和2195铝锂合金腐蚀方式是由点腐蚀向面腐蚀转变，7075铝合金腐蚀方式为晶间腐蚀；经过腐蚀后6061铝合金能保持稳定的强度和塑性，7075铝合金和2195铝锂合金的强度和塑性都明显降低。