抗伊氏锥虫单克隆抗体的研究——一、分泌抗伊氏锥虫单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

为了对伊氏锥虫病的免疫诊断提供有价值的单克隆抗体,笔者通过了3次SP2/0骨髓瘤细胞与伊氏锥虫抗原免疫的BALB/c小鼠脾细胞间的融合试验和多次筛选以及克隆化,建立起7株分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株。对其中ⅡG_6杂交瘤作了进一步的检定分析,用ⅡG_6上清液对T.e.抗原进行ELISA试验,显示出高度的特异性,与血吸虫、弓形虫抗原均未出现交叉反应。ELISA测试ⅡG_6细胞株培养上清效价为1:5.1×10~3,而杂交瘤细胞接种BALB/c小鼠诱生腹水抗体的效价为1:1.6×10~7。该株单克隆抗体免疫球蛋白的类型鉴定属IgG_1亚类。该株细胞已在体外培养下,稳定地分泌特异性抗体至少达6个月之久,同时在液氮冻存近8个月之后仍能保持分泌抗体的能力。     

环氧合酶-2单克隆抗体的制备和初步应用

以合成肽COX-2-KLH为完全抗原免疫BALB/c 小鼠,通过脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0融合的杂交瘤技术,筛选获得4株(1E10、3D6、5B11、6G4)稳定分泌抗COX-2单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞株.采用ELISA的方法鉴定McAb效价、亚型及特异性.各株McAb均属IgG1 亚型,其中1E10腹水纯化后MCAb效价在1∶107以上,SDS-PAGE电泳为单一条带,与同源异构体蛋白不发生交叉反应.获得的McAb被成功应用于COX-2生物学研究中的免疫组织化学(IHC)和Western Blot试验中.本研究获得的单抗具有特异、高效的特点,为COX-2生物学相关研究提供理论依据.     

抗迟缓爱德华氏菌单克隆抗体制备及初步鉴定

用灭活迟缓爱德华氏菌菌株AL60306NA1免疫Balb/c小鼠,采用杂交瘤技术制备抗迟缓爱德华氏菌的McAb,获得3株可持续分泌抗迟缓爱德华氏菌McAb的杂交瘤细胞株3A7、4F11和4C9;腹水效价分别达到1.0×10-6、1.0×10-6和1.0×10-5;细胞亚型分别为IgG1、IgG2b、IgM.交叉反应结果...     

应用流式微球检测黄曲霉毒素B1方法的建立

采用活性酯法,将AFB1-BSA人工抗原交联于含有羧基表面的荧光微球,通过与游离AFB1竞争抗AFB1单克隆抗体后,再与异硫氰酸荧光素标记二抗的反应,建立基于微球的间接竞争免疫检测方法.检测结果表明,流式细胞仪检测AFB1的检测限为0.03 ng·mL-1,检测范围为0.05～1.0 ng·mL-1.与黄曲霉毒素B2、黄曲霉毒素G1、黄曲霉毒素G2、黄曲霉毒素M1和黄曲霉毒素M2的交叉反应率均低于1.0%.在玉米样品中的加标回收率为87%～103%,变异系数为6.1%～8.4%.     

抗促黄体激素单克隆抗体的研制 Ⅰ杂交瘤细胞株的建立

用促黄体激素(LH)为抗原免疫BALB/C小鼠,通过免疫小鼠脾细胞和SP_2/0小鼠骨髓瘤细胞的融合,产生分泌抗LH单克隆抗体(McAbs)的杂交瘤细胞。用ELISA法检测融合细胞培养上清,从195份检样中测出两份能与LH抗原起反应。对该2孔杂交瘤细胞进行亚克隆和扩大培养。经体外四个月传代培养及液氮冻存后复苏培养。仍保持分泌抗LH的McAbs的能力,所建立的二株杂交瘤细胞命名为AL—01和AL—02。给予注液体石蜡的BALB/C小鼠注入该二种细胞,均能诱生腹水。用ELISA法测腹水抗体,效价分别为10~(-6)以上和10~(-5)以上。通过染色体组型分析,确认AL—01和AL—02皆为杂交瘤细胞。     

卡那霉素单克隆抗体的研制及ELISA检测方法的建立

采用EDC法制备卡那霉素(KAN)完全抗原、卡那霉素-牛血清白蛋白(KAN-BSA)、卡那霉素-鸡卵清蛋白(KAN-OVA).用KAN-BSA完全抗原免疫BALB/c小鼠,并通过杂交瘤技术制备能够稳定分泌抗KAN单克隆抗体的杂交瘤细胞(1E1).通过体内诱生腹水大量制备单克隆抗体,鉴定1E1单克隆抗体,其效价为8×10~5,亲和力为2. 8×10~9L/mol,半数抑制浓度(IC50)为1. 09 ng/mL,与妥布霉素(TOB)的交叉反应率为53. 4%,与其他氨基糖苷类化合物没有交叉反应性.利用该单克隆抗体,建立KAN间接竞争酶联免疫吸附试验(ciELISA).ciELISA检测KAN在牛奶中的回收率为64. 4%～89. 6%,最低检测限为1. 92 ng/mL.     

溴酚蓝·丁基罗丹明B染料离子对的性质

对溴酚蓝、丁基罗丹明B以及溴酚蓝和丁基罗丹明B形成的离子对的性质进行了研究 .溴酚蓝与丁基罗丹明B的缔合比在pH =7时为 1∶3,其Ksp=2 .66× 10 - 2 3,缔合物在甲苯中的萃取率为 94 .9% .缔合物的吸光度在溴酚蓝浓度为 0～ 6× 10 - 6mol/L时服从比耳定律 .为进一步研究溴酚蓝·丁基罗丹明B的萃取光度分析奠定了理论基础     

飞船搭载菌株的阿维菌素B_(1a)组分分析

阿维链霉菌HY1进行飞船搭载后,筛选得到了24株高产且遗传性状稳定的菌株,它们的总效价比出发菌株HY1提高24%以上,最高的达到了83%.同时,用HPLC法筛选B1a化学效价较高菌株,最终得到菌株2株,其中菌株HY365的总效价为5 924.7 mg/L,它的B1a化学效价为3 894.8 mg/L,占总效价的比例达到65.74%;HY516的B1a化学效价为3 151.9 mg/L,占总效价的59.90%.     

福莫特罗单克隆抗体的制备及免疫学特性鉴定

本实验采用重氮化法成功合成了FMT人工免疫抗原FMT-BSA和检测抗原FMTOVA,并用免疫抗原免疫BALB/c小鼠,通过细胞融合技术制备抗FMT的单克隆抗体(FMT mAb),并对其效价、敏感性、特异性和亲和性等免疫学特性进行了鉴定。结果表明,融合后筛选出1D8、3E6共2株分泌抗FMT小分子的高特异、高灵敏的单克隆抗体的细胞株,采用间接ELISA法测定的腹水效价1:5.12×105,在0.1μg/L～8.1μg/L的范围内,线性回归方程为y=-0.422x+0.507(R2=0.978),IC50为1.04μg/L,对FMT具有较高的敏感性,亚型为IgG1,亲和常数K(FMT-3E6)=7.24×108 L/mol,与沙丁胺醇、西马特罗等β-激动剂类似物的交叉反应率CR(%)均小于0.1%,特异性良好,为FMT残留检测的免疫学方法的建立奠定了基础。     

柱后碘衍生—高效液相色谱法测定脂必妥片中黄曲霉毒素B1的含量

为建立测定脂必妥片中黄曲霉毒素B1含量的高效液相分析法,样品经80%甲醇溶液超声提取后,通过免疫亲合柱净化、柱后碘衍生化,以荧光检测器检测,采用Waters Sunfire C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm);甲醇—乙腈—水(40∶18∶42)为流动相;流速,0.8 m L/min;柱温,25℃;衍生溶液为0.05%的碘溶液,衍生化泵流速,0.3 m L/min,衍生化温度70℃;激发波长λex=360 nm,发射波长λem=450 nm.结果显示,黄曲霉毒素B1在0.0008~0.0040 ng(r=0.9999)范围内呈良好的线性关系;回收率为97.13%(RSD=0.73%),检出限为0.5μg/kg.本方法简便,结果准确可靠,适于测定脂必妥片中黄曲霉毒素B1的含量.     

煤炭海运总量的灰色预测

基于灰色数学理论,通过常规全数据GM(1,1)模型及等维新陈代谢GM(1,1)模型分别对煤炭海运总量进行建模并预测,并与传统的最小二乘曲线拟合所得结果进行比较,结果表明,运用灰色理论所建立的等维GM(1,1)进行预测是可行的,而且精度较传统方法高。     

用递归下降方法实现自底向上的语法分析

针对LR(1)语法分析方法的分析能力较强,但其语法分析器的状态数太多,很难被应用的问题,提出了改进的LR(1)语法分析方法--RDLR(1)(Recursive Descent LR(1)语法分析方法,同时给出了将LR(1)文法等价变换成RDLR(1)文法的一般方法.结果表明,该文法对语言的识别能力与LR(1)文法相同,比LALR(1)文法强;但其语法分析器的状态数却比LR(1)语法分析器的少,与LALR(1)语法分析器的状态数相当.     

工程建筑变形分析的灰色模型探讨

为研究工程建筑的变形规律,合理预测未来的变形趋势,针对工程建筑变形中存在的变形因素复杂、变形大小不确定性、点位间主次关系不明确等情形,采用灰色系统理论建立变形分析灰色模型。通过两个工程实例,分别应用GM(1,1)模型和MGM(1,n)模型进行变形的预测和检验,充分证实了应用灰色模型进行工程建筑变形分析的可行性和可靠性,为工程建筑的变形分析和安全性诊断提供了可靠的理论依据和科学的分析方法。     

三类四舍五入数据的点估计问题

首先考虑源于正态分布的样本,在四舍五入后不再服从正态分布,根据四舍五入后的数据构造似然函数,对原正态总体的参数进行估计.然后分别考虑源于AR(1)和MA(1)的四舍五入数据,构造修正的似然函数,对模型参数进行估计.     

鹅常见病毒性疾病的快速诊断技术的建立及其应用

根据3种病原基因组相关基因的序列特征设计了三对PCR引物，用于鹅常见的病毒性疾病包括鹅副粘病毒病、鸭瘟、小鹅瘟的鉴别诊断．三对引物均能从各自的参考毒株扩增出与预计片段大小一致的产物，而对其它的病原的扩增结果均为阴性；应用建立的PCR方法对来自广西不同地方的38份临床可疑病例分别进行诊断，DPV、APMV-1和GPV的检测阳性率分别为66．6％(10／15)、55．6％(15／27)和75％(6／8)，二重及三重混合感染的占42．8％(9／21)．研究结果表明建立的PCR方法具有快速、敏感、特异的特点，可用于疫病的临床快速鉴别诊断特别是多重感染的诊断以及流行病学的调查研究．     

超表达转运膜蛋白21对介导阿尔茨海默氏病γ分泌酶复合物重要组分PS-1及NCT蛋白表达量的影响

研究转运膜蛋白21(TMP21)在小鼠胚胎成纤维细胞中超表达对PS-1及NCT蛋白表达量的影响.脂质体介导TMP21 cDNA转染敲除淀粉样前体蛋白表达基因的小鼠胚胎成纤维细胞系(MEF(KO)),以梯度浓度G418筛选TMP21表达量最高的细胞.处理超表达组(T)和对照组(C)细胞,并收集纯化过程中含γ分泌酶复合物的样本,用Western blotting检测γ分泌酶复合物重要组分Nicastrin(NCT)、Presenilin-1(PS-1)以及TMP21的蛋白表达量.结果表明,样本T1、T2及IPT2所含TMP21的蛋白表达量较相应对照组样本C1、C2和IPC2分别上升11.5%(P=0.08)、28.1%(P＜0.01)及69.1%(P＜0.001),提示经TMP21 cDNA转染后MEF(KO)细胞中TMP21蛋白表达明显提高,而转染组和对照组中,构成γ分泌酶复合物的重要组分NCT与PS-1蛋白表达量无明显变化.这表明在TMP21蛋白高表达状态下,不会影响MEF(KO)细胞中γ分泌酶复合物的重要组分NCT与PS-1蛋白表达量.     

Ⅰ型单纯疱疹病毒包膜糖蛋白L基因片段的克隆及高效表达

 采用PCR方法扩增HSV-1病毒型特异性包膜糖蛋白L(gL)基因片段并克隆至原核表达载体pGEX-5X-1获得重组质粒pGEX-5X-1-gL,将重组质粒转化E.coli BL21表达菌后经IPTG诱导表达目的蛋白.SDS-PAGE蛋白检测表明,在分子质量56 ku处有HSV-1 GST-gL融合蛋白的高效表达,通过IPTG浓度筛选和诱导前表达菌扩增培养时间的比较分析对诱导条件进行了优化,GST-gL融合蛋白表达量可达到菌体蛋白总量的48.65%.Western blot中利用HSV-1灭活病毒获得的多克隆抗体确证所表达蛋白为HSV-1病毒组分.这一表达系统的建立和优化对进一步探讨HSV-1 gL蛋白功能及其免疫原性提供了有利条件.     

多变量灰色模型在预测中的应用

单变量的GM(1,1)模型用于单一时间序列的建模与预测,而MGM(1,n)模型是对GM(1,1)模型在多元变量情况下的自然推广,通过对MGM(1,n)模型建立过程以及应用方法的示例,来说明该模型的现实应用价值.     

Reissner-Mindlin板的选择简化积分元S_1的改进

分别在引入剪应力作为独立变量和引入剪应力和弯矩分别作为独立变量的基础上,将求解Reissner-Mindlin板问题的S1元作了一些改进,构造了两组Reissner-Mindlin元———CHRM(S1)及CHRM(0,S1),阐述了CHRM(S1)元和S1元的关系以及弯矩独立变量的引入对双线性元精度提高的促进作用.     

带变量核参数型Marcinkiewicz积分的有界性

考虑带变量核的参数型Marcinkiewicz积分μρΩ (0＜ρ＜ n)从H1(Rn)到L1(Rn)以及H1,∞(Rn)到L1,∞(Rn)的有界性.同时还得到μρΩ是在Companato空间有界的,作为Companato空间的一个特例,还得到了其在BMO(Rn)上的有界性.