雨生红球藻的培养及虾青素的提取与检测

以雨生红球藻为原材料,通过对光照条件、培养液pH和温度等条件的优化确定雨生红球藻在改良后的BBM培养基中的适宜生长条件;采用研磨结合超声波破碎的方法对雨生红球藻进行破壁,利用乙酸乙酯、丙酮和70%乙醇分别提取雨生红球藻中的虾青素,并通过紫外吸收光谱、红外吸收光谱以及高效液相色谱对虾青素的含量进行检测分析,确定虾青素的最佳提取方法。结果表明:在pH=8.0的改良BBM培养基中,光照度为2 000~2 500 lx时连续24 h光照条件下雨生红球藻能够快速生长和繁殖,采用研磨法破壁后利用乙酸乙酯提取虾青素的提取率可达91.41%。本实验优化了雨生红球藻的培养条件,确定了虾青素提取的有效方法,为雨生红球藻的扩大生产及深入研究奠定了基础。     

雨生红球藻的培养及虾青素累积条件的探讨

探讨了雨生红球藻(Haematoccuspluvialis) 712株的适宜培养条件及藻体诱导累积虾青素的培养基条件.重点研究了温度、pH和光照条件对雨生红球藻营养生长的影响,以及NaNO3 、Fe2 + 盐和乙酸钠浓度对雨生红球藻诱导累积虾青素含量的影响.结果表明,2 4℃、10 0 0～15 0 0lx连续光照,pH8.0左右的生长条件适合雨生红球藻游动细胞增殖,使平均生长速率达到0 .2 5 2d-1.通过正交试验表明缺氮培养基对于雨生红球藻细胞累积虾青素最为有利,虾青素含量达到6 .72 μg·mL-1,而FeSO4和乙酸钠浓度对虾青素的累积无显著性的影响     

雨生红球藻农杆菌转化体系的建立

文章以植物表达载体pBI121、农杆菌EHA105为体系,建立了农杆菌介导的雨生红球藻转化方法,通过筛选羧苄青霉素、G418等抗生素对雨生红球藻生长的影响,确定了以200μg/L G418和500mg/L羧苄青霉素为筛选体系。转化的雨生红球藻以CaMV 35S和来源于番茄的八氢番茄红素脱氢酶基因的启动子(PDS启动子)成功表达了报告基因GFP和YFP,拓宽了pBI121载体的应用范围,为雨生红球藻的转化提供了一个新的遗传转化途径。番茄来源的PDS启动子能够启动报告基因的表达,表明植物源的启动子能够在雨生红球藻中表达,为植物源的启动子验证及基因瞬时表达提供了一个新的方法。     

维生素B1、B12在雨生红球藻不同培养阶段的作用研究

研究了维生素B1、B12对雨生红球藻营养生长及胁迫阶段各生长指标的影响.研究结果表明适量维生素的加入具有促进雨生红球藻生长、提高胁迫条件下的微藻存活率、以及促进虾青素积累等作用.其中,在培养基中添加w(B12)=5×10-8维生素B12,可以使雨生红球藻的生长率、存活率和虾青素产量分别较空白组提高21%、264%和43%以上.此外,研究还发现在单独加入维生素B1和B12的培养组中,大部分培养组的孢子比率均明显下降,这为降低虾青素的提取难度和提高虾青素的利用率提供了新的思路.     

雨生红球藻提取虾青素不同机械破壁方法的研究

对雨生红球藻厚壁孢子细胞的几种常用机械破壁方法的工艺条件分别进行研究,得到高压均质法,超声波法和冻融法的较优工艺条件.并分别在上述几种机械破壁方法的最佳工艺条件下比较了几种不同破壁方法对破壁率和虾青素提取率的影响.结果表明,高压均质法最适合于雨生红球藻厚壁孢子的破碎和虾青素的提取.高压均质的优化条件为:40MPa,循环3次,室温,破壁率达到91.4%,虾青素提取率为28.0μg mg(细胞干重),比未经破壁处理的提取率提高了10.1μg mg(细胞干重),提高了56.3%.     

雨生红球藻规模化培养技术的研发进展

作为一种重要的类胡萝卜素,天然虾青素因其强抗氧化能力而具有抗癌、增强免疫、抗紫外线、着色等功效,故具有很高的经济价值和市场需求.雨生红球藻(Haematococcus pluvialis)被公认为天然虾青素的最佳来源,现已成功实现规模化培养.另一方面,由于其生长缓慢、易受污染等特点使其大规模高密度培养受到限制,该领域研究遂成为当前国际研究和生产方面的重要课题.目前,雨生红球藻规模化培养技术主要分为开放式和封闭式两类,后者主要包括管道式光生物反应器、立柱式光生物反应器、平板式光生物反应器、薄膜式光生物反应器以及半球体式光生物反应器等培养技术.归纳和总结了目前全球雨生红球藻产业化培养的技术现状,并对新的培养技术做了简单的介绍,以期为我国雨生红球藻规模化养殖提供技术参考.     

雨生红球藻室外大体积培养与虾青素积累初步研究

针对雨生红球藻(Haematococcus pluvialis)大体积室外培养开展实验,对不同品系藻株、不同营养方式、胁迫条件等对雨生红球藻生长及虾青素积累的进行了初步研究.结果表明, HPM品系在室外培养过程中指数生长率为0.22,胁迫后虾青素产率为1.35 mg/L,均优于其他两个品系.室外培养中加入醋酸钠的混合培养基可以缩短胁迫时间,并且其虾青素的积累量比光合自养培养下提高了126.3%.盐胁迫比高光胁迫更能有效地积累虾青素,虾青素产率从0.76 mg/L提高到了1.33 mg/L.     

用RAPD技术分析烟草与曼陀罗体细胞杂种

利用RAPD技术对普通烟草(Nicotiana tabacum L.cv Xanthi nc)和毛曼陀罗(Datura innoxia Mill)原生质体融合获得的体细胞杂种进行了分析.使用了9个10-mer随机引物对7个体细胞杂种和双亲进行RAPD指纹图谱分析,从7个杂种的9组DNA指纹图谱上共得到570条扩增带,其中与烟草特征谱带相同的带数占了67.8%,与双亲共有的谱带相同的带数为24.6%,而与曼陀罗特征谱带相同的带数仅有2.8%.由此可见,杂种组织倾向于排除毛曼陀罗的DNA,融合体是一个高度不对称的体细胞杂种.此外,杂种中还出现了双亲没有的谱带(新带占4.8%).     

雨生红球藻712株营养需求及其培养条件

运用细胞学计数和pH值测定法，研究了3种不同的培养基、维生素B12、氮源、磷源、乙酸钠对雨生红球藻712株(Haematococcus pluvialis 712)生长的影响，实验结果表明添加了维生素B12、乙酸钠及高浓度的氮源、磷源的BBM培养基，在较低的光照(2000Lx)与温度(24℃)下，可以较好地维持雨生红球藻712株的生长。     

光强对雨生红球藻生长的影响

采用BG11培养基,设置日光、500、1 000、2 000、2 500、3 000、4 000 lx的光照强度梯度,用分光光度法测定各组培养液叶绿素a的含量,研究光照强度对雨生红球藻生长速率的影响.结果表明,2 500 lx为雨生红球藻株的最适光照强度,其叶绿素含量随培养时间延长而增长,第8 d其叶绿素a含量达到最大值,之后呈现下降趋势.     

蛋鸡及其正反杂交组合卵巢组织的基因差异显示研究

在杂交试验中发现：白莱航蛋鸡（AA）与农大褐蛋鸡（DD）的正交组合（AD）和反交组合（DA）鸡群在产蛋数上存在着明显的杂种优势.为了探明产蛋数杂种优势的遗传机理，研究了4个组合鸡群在产蛋高峰期（32周龄）卵巢组织的基因差异显示.结果表明，24种引物组合在4个试验鸡群的RNA池中共显示出726条稳定的cDNA条带，其中112（15.43%）条为差异带.在杂种与纯种间共发现7类基因差异表达模式，其中量的差异有2类：Ⅰ杂种超强（T1++1，T1+11，T11+1）表达17条（15.17%）；Ⅱ杂种减弱（T1 1，T1 11，T11 1）表达15条（13.39%）；质的差异表达模式有5类：Ⅲ杂种沉默型（T1001、T1011、T1101）9条（8.04%）；Ⅳ杂种特异型（T0110、T0100、T0010）7条（6.25%）；Ⅴ杂种与单亲一致（T1110、T0111、T1100、T1010、T0101、T0011）型58条（51.78%）；Ⅵ共显性（T+11 、T 11+）6条（5.36%）；Ⅶ杂种与双亲一致型（T1111）614条（84.57%）.试验结果表明4个组合鸡群在产蛋高峰期的卵巢组织中存在着明显的基因表达差异.     

黄姑鱼♀与大黄鱼♂杂交试验与AFLP分析

开展了黄姑鱼♀与大黄鱼♂杂交试验,并对杂交F1初孵仔鱼进行了AFLP分析.黄姑鱼♀与大黄鱼♂杂交能够正常受精,杂交受精率为93.54%,受精卵正常发育、孵化,孵化率为86.23%,但仔鱼在开口后一周内全部死亡.利用8对选择性扩增引物组合对亲本和杂交后代（家系）初孵仔鱼进行AFLP分析,共得到456个条带,其中母本特异条带（Female Special Band,FSB）178条、父本特异条带（Male Special Band,MSB）187条、双亲共有条带（Mutual Band,MuB）91条.且其中84条（47.2%）FSB、89条（47.6%）MSB和75条（82.4%）MuB为全部杂交仔鱼共有,其余94条（52.8%）FSB、98条（52.4%）MSB和16条（17.6%）MuB在杂交后代中发生了分离.分离的FSB和MSB中分别有33.0%和28.6%表现为偏分离.AFLP分析结果表明,黄姑鱼♀与大黄鱼♂杂交的初孵仔鱼含有双亲的条带,是真正的杂交种,是构建大黄鱼与黄姑鱼遗传图谱以及研究杂种在细胞和分子水平隔离机制的适合材料.     

鱼腥草提取物抑菌作用研究

用鱼腥草 (Houttuyniacordata)提取物对几种常见微生物进行抑菌试验 ,结果表明 :鱼腥草提取物对多种微生物的繁殖生长有明显的抑制作用 ,对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯草杆菌、青霉菌、黑曲霉菌及酵母菌的最低抑菌浓度分别为 0 .2 5 %、1%、2 %、8%、8%、8% ,且耐高温短时的热处理 .     

用流式细胞仪和RAPD快速鉴定柑橘体细胞杂种

利用流式细胞仪和随机扩增多态DNA（RAPD）方法对获得的3例柑橘体细胞杂种进行鉴定,结果表明,两者相结合可快速有效地鉴定体细胞杂种．所检测的3个组合共9株再生植株,有8株是四倍体体细胞杂种,1株为二倍体叶肉亲本型杂种．体细胞杂种一般表现为具有双亲的特征带,且综合双亲的所有带,但在部分杂种中检测到了双亲都没有的新带,也发现有丢失亲本的特征带或共有带的现象,说明融合后染色体发生了重组和交换;有的引物只检测到叶肉亲本的特征带,根据柑橘叶肉细胞无论单独培养还是共培养均不能再生的事实,可推测其为体细胞杂种或二倍体叶肉亲本型胞质杂种．对这两种方法相结合用于体细胞杂种鉴定的可行性进行了讨论．     

AFLP分子标记在鉴定海滨锦葵杂交后代上的应用

海滨锦葵是较好的食用和工业利用的盐生经济植物。用 AFLP分子标记对海滨锦葵两对杂交亲本的36个F1 代个体的真伪进行了鉴定。18个AFLP引物对在亲本Hy103×Hh182间扩增出1 100条AFLP带,其中108条是多态带(多态率为9.82%);在亲本Slhy353×Blho301间扩增出1 181个AFLP条带,其中148条是多态带(多态率为12.51%)。实验结果表明:(1)引物对E AAC / M CTC在亲本Hy103×Hh182间扩增出5条父本特征带:401 bp,390 bp,156 bp,137 bp和108 bp,引物对 E AAG/M CTG则产生了7条:457 bp,356 bp,312 bp,251 bp,240 bp,190 bp和76 bp。父本特征带从Hy103×Hh182的8个F1 代个体均扩增出,表明其为真杂种;(2)引物对E AAC/M CTT在亲本 Slhy353×Blho301 间扩增出 5 条父本特征带:440 bp,393 bp,289 bp,162 bp和67 bp,引物对 E ACA/M CAT 则产生了 4 条: 448 bp, 360 bp, 217 bp和 145 bp;父本特征带从Slhy353×Blho301 28个F1 代个体中的26个个体上扩增出,表明其为真杂种,另外2个为假杂种。     

灭活酵母细胞原生质体融合技术的研究

报道了将单一亲株灭活的原生质体融合方法.融合体细胞形态大小、同化和发酵淀粉的能力均与双亲株不同,多数融合体的DNA含量是二亲株之和,推测为三倍体.融合体的细胞生物量比亲株高,发酵酒精能力增强,具有一定的生产应用价值.     

酵母细胞原生质体拆合技术的研究 Ⅰ.K氏酵母原生质体再生和拆分的研究

微生物细胞原生质体拆合技术是在细胞融合基础上发展起来的一项新兴技术。本课题选择高产酒精的K氏酵母和具有淀粉糖化能力的黑曲霉进行拆合研究,以期形成核体/胞质体一原生质体,核体/胞质体—核体/胞质体等多种类型的融合子,实现远缘杂交。本文深入研究多种因素对K氏酵母原生质体制备的影响,并添加了牛血清白蛋白,聚乙烯吡咯烷酮;酵母细胞壁合成前体物以提高原生质体再生能力,当原生质体形成率>95%时,再生率最高达58.6%。此外,本文初步研究了酵母原生质体的分部拆分。     

松属GAs相关EST SSR标记与火炬松×洪都拉斯加勒比松苗高相关性分析

以火炬松×洪都拉斯加勒比松F1代群体为研究对象,从松树PGI（松类基因索引）数据中筛选出13个与赤霉素（GAs）代谢有关的序列。设计了这13条序列的EST SSR引物对,并筛选出4对引物作为F1代检测的较好的标记。4对引物PCR分析显示在2个亲本和39个子代中共扩增出1 014个多态性位点,其中,杂种F1代扩增出的位点数中有50.19 %与父本相同,5217 %与母本相同,这表明母本（火炬松）和父本（加勒比松）杂交能够得到获得双亲遗传物质的新杂种。4个引物检测的26个等位基因位点中有6个与苗龄6个月的苗高有显著或极显著的相关性,有5个位点与苗龄9个月的苗高有显著或极显著相关性。这为早期选择提供了较好的分子标记。     

缙云山特有植物缙云黄芩的等位酶变异研究

采用聚丙烯酰胺凝胶垂直平板电泳检测了重庆缙云山特有植物缙云黄芩 (ScutellariatsinyunensisC Y WuetS chow) 7个居群 70个个体的过氧化物酶 (POD)、细胞色素氧化酶 (CYT)、超氧化物歧化酶 (SOD)、淀粉酶 (AMY)和酯酶 (ES) 5种等位酶谱带的变异式样 .并将所得酶谱带进行编码 ,然后分别用Jaccard和Sokal Michener结合系数结合不加权组平均法 (UPGMA)进行聚类 .7个居群等位酶谱带分布表明 ,只有 15 5 6 %的等位酶谱带在所有个体中是恒定的 ,其余 84 44 %的等位酶谱带在个体间显示出或多或少的变异 .在居群水平上 ,也只有 2 2 2 2 %的等位酶谱带是恒定的 ,77 78%的等位酶谱带存在有分化 .聚类分析结果表明缙云黄芩同一居群的个体间在等位酶谱带上表现出很大的相似性 ,即居群内个体间表现出较大的遗传同质性 ;而来源于不同居群的个体酶谱则表现出明显的趋异性 ,显示出缙云黄芩不同居群之间发生了较明显的遗传分化