激素剂量、小鼠品系及周龄对超数排卵的影响

目的采用孕马血清促性腺激素（PMSG）和人促绒毛膜性腺激素（hCG）对不同品系和周龄小鼠进行超数排卵处理,比较激素（PMSG/hCG）注射剂量、小鼠品系和周龄对超排效果的影响,以便获得比较优良的超排方法。结果 1）激素剂量为PMSG（10 IU/只）＋hCG（10 IU/只）的超排效果优于PMSG（5 IU/只）＋hCG（5 IU/只）,但无显著差异（P〉0.05）;2）相同剂量时I,CR小鼠和C57BL/6J小鼠的超排效果显著优于BALB/c小鼠和FVB小鼠（P〈0.05）;3）5周龄与8周龄的小鼠比较,8周龄超排效果较好,但差异不显著（P〉0.05）。结论采用10 IUPMSG＋10 IU hCG的组合对8周龄的ICR、C57BL/6J进行超排处理效果相对较好。     

二甲双胍通过调控STAT3的表达抑制头颈部肿瘤转移机制的研究

探讨二甲双胍是否通过调控STAT3的表达抑制头颈部肿瘤的EMT和迁移.在头颈部肿瘤686LN细胞株上给予二甲双胍处理,Western blot检测上皮-间叶样转化(EMT)相关蛋白的表达;通过Transwell实验检测二甲双胍对头颈部肿瘤细胞迁移能力的影响;在高转移特性的头颈部肿瘤细胞株和配对的低转移特性的细胞株上,检测STAT3蛋白表达;用脂质体转染STAT3的小干扰RNA,检测头颈部肿瘤EMT相关蛋白的表达;在686LN上给予IL-6处理或者给予二甲双胍处理或者同时给予IL-6和二甲双胍处理,检测STAT3蛋白和EMT相关蛋白表达;以及通过Transwell实验检测二甲双胍对IL-6诱导的细胞迁移的影响.结果显示,给予二甲双胍处理,抑制头颈部肿瘤的EMT,并且细胞迁移能力减弱. STAT3磷酸化和总蛋白在高转移特性的头颈部肿瘤细胞株高表达.转染STAT3 siRNA抑制STAT3的表达可抑制头颈部肿瘤的EMT.二甲双胍抑制IL-6介导的STAT3磷酸化水平升高,抑制IL-6诱导的EMT,同时二甲双胍抑制IL-6诱导的细胞迁移.结论说明,二甲双胍抑制头颈部肿瘤EMT和细胞迁移,并且能抑制IL-6介导的STAT3磷酸化水平升高,其抑制头颈部肿瘤迁移作用机制可能与下调STAT3的磷酸化水平有关.     

重组人促性腺激素对小鼠排卵影响的机理

探讨不同剂量和组合的重组人促性腺激素对小鼠卵泡发育和排卵的影响及其与小鼠血清中雌、雄激素水平变化的相互关系.实验采用DNA重组技术合成的重组人促性腺激素对性成熟前雌性昆明白小鼠(22～24日龄)以不同剂量和组合进行超数排卵处理,结果表明,一定剂量和组合的重组促性腺激素的处理对小鼠卵泡的发育和血清中雌、雄激素水平产生较大影响,卵泡的正常发育及最终的排卵要求一定的重组人卵泡刺激素(r-hFSH)、重组人促黄体生成素(r-hLH)、重组人绒毛膜促性腺激素(r-hCG)的配比组合和相应的剂量范围.重组促性腺激素处理后小鼠卵泡的发育和排卵与雌、雄激素生成的量有关.     

Wistar大鼠超数排卵及胚胎移植

不同剂量激素对Wistar雌鼠超数排卵,并与正常雄鼠交配,收集2-细胞胚胎进行输卵管移植,收集8-细胞胚胎进行子宫移植,结果发现每只Wistar雌鼠间隔48h分别腹腔注射50IU的PMSG与hCG,Wistar大鼠的超数排卵效果最好,平均可获得2-细胞胚胎36.3±15.8枚,输卵管移植后产仔率为73.33%,平均可获得8-细胞22.6±13.1枚,子宫移植产仔率为75.00%.     

小鼠未成熟卵母细胞体外培养

目的：探讨小鼠未成熟裸卵体外培养,获得较高的成熟率和受精率的适宜培养时间和培养条件。方法：在培养液中添加不同剂量的人绝经期促性腺激素（hMG)和卵泡刺激素（FSH）,分别培养从未行激素刺激排卵处理的昆明系小白卵巢中获得的未成熟裸卵,培养24h和48h后,进行体外受精和胚胎培养,结果：添加不同激素和培养不同时间对未成熟裸卵的体外成熟无显著性影响（P＞0．05）,但黄体生成素（LH）的存在对培养48h后成熟卵子的体外受精率有显著性影响（P＜0．05）,并随LH含量的增多,影响也越大。结论：未成熟裸卵能在体外培养成熟并受精,但培养液中LH含量对培养较长时间的成熟裸卵的体外精率有极显著的不利影响。     

CCL18与TGF-β促进乳腺癌EMT的比较

目的:研究比较CCL18与β转化生长因子(TGF-β)促进乳腺癌细胞上皮间质化(EMT)的分子机制,从而进一步明确靶向CCL18和TGF-β所激活的信号通路,抑制乳腺癌浸润迁移的分子靶点.方法:设计并合成针对CCL18的受体基因PITPNM3的特异性siRNA,利用脂质体携带siRNA转染乳腺癌MCF-7细胞,沉默PITPNM3的表达,分别用CCL18和TGF-β处理乳腺癌细胞,用免疫荧光和western blot的方法检测EMT的特异性标志物E-cadherin和Vimentin表达的变化以及Smad2和Smad3的磷酸化状态.结果:PITPNM3-siRNA转染MCF-7细胞24 h后,用CCL18或TGF-β分别处理乳腺癌细胞4 d,western blot证明CCL18不能磷酸化激活Smad2和Smad3,TGF-β磷酸化激活Smad2和Smad3促进乳腺癌EMT,沉默PITPNM3表达,western blot和免疫荧光证明不影响TGF-β促进乳腺癌EMT.结论:TGF-β通过Smad2/smad3磷酸化激活促进乳腺癌EMT,不通过CCL18的受体PITPNM3发挥作用.     

不同激素对哺乳动物超数排卵作用的研究

本文就PMSG、APMSG、hCG、LHRH等激素对大鼠、小鼠、豚鼠、家兔、绵羊、猪、牛等动物的超数排卵作用进行了系统探索,结果发现PMSGhCG各5～10IU可致小鼠产生稳定的超排、取卵数可达50±10个;用200IU加等量hCG可使大鼠稳定超排,取卵数可达50±10个;用400IUPMSG和等量hCG可使家兔产生稳定起排、取卵数可达35±5个;使用PMSG1500IU和APMSG100IU可使羊产生超排、取卵数可达25±5个：在猪使用1500IUPMSGT和1000IUhCG平均获得卵26±5个;,使用PMSG3000IU和1500IUAPMSG,平均可稳定获得8±12个卵,而在豚鼠得不到稳定起排卵的结果。所有这些结果提示我们PMSG几乎对各种哺乳动物的超排作用显著,且有稳定的剂量可寻,而hCG的促超排也是很显著的。     

卵细胞体外成熟(IVM)在小鼠生物净化中的应用

目的 在小鼠生物净化中,从超排后未排卵的卵巢,取卵泡内未成熟卵采用卵母细胞体外成熟(in vitro maturation,IVM)使之在体外成熟并具备受精能力,以提高卵子利用率和作为常规促超排失败的一种补救措施。方法 在小鼠生物净化中,取注射PMSG和HCG后未排卵卵巢,在实体显微镜下划破卵泡挑选卵丘卵母细胞复合物(COCs),置于成熟液滴中在体外发育成熟。同时以注射PMSG和HCG后正常超排卵、只注射PMSG后取未成熟卵体外成熟和注射PMSG和HCG后取疑似成熟卵和裸卵体外成熟作为对照。经体外受精、体外胚胎发育后,将2-细胞胚移植到受体输卵管,使其在受体内发育成为成熟的个体。结果 注射PMSG和HCG后未排卵组(A组),卵细胞体外成熟率为87.0%±3.2%,二胞率为55.1%±12.3%,囊胚率为23.1%,移植41枚二细胞胚至2只受体鼠,出生5只幼崽,产仔率12.2%。只注射PMSG,48 h后取未成熟卵组(B组),体外成熟率为83.9%±3.9%,二胞率为51.8%±9.3%,囊胚率为38.5%±13.9%。注射PMSG和HCG正常超排组(C组),其二胞率为78.9%±0.6%,囊胚率为78.0%±3.8%。注射PMSG和HCG未排卵卵巢,取裸卵和疑似成熟卵(D组),体外成熟培养0 h,6 h和16～18 h,其成熟率、二胞率和囊胚率与其它三组相比均较低且有极显著性差异。A组和B组与正常对照C组相比,二胞率均有显著性差异,囊胚率均有极显著性差异。结论 卵母细胞体外成熟(IVM)可以作为小鼠生物净化中促超排失败的一种补救措施,并且可以提高珍稀品系小鼠的卵子利用率。     

Rac1突变重组体的构建及对JAK/STAT信号通路的影响

通过构建Rac1突变体，研究Rac1激活对肾小球系膜细胞(MES)JAK2/STAT3信号通路的影响.以Rac1目的基因为模板，在引物中设计突变，扩增突变体Rac1(G12V)的目的基因，与PiggyBac(PB-FLAG)载体质粒连接，构建突变重组体PB-Rac1(G12V),并运用脂质体核酸试剂转染系膜细胞.比较正常组、Rac1(G12V)突变组中系膜细胞的ROS含量及NADPH氧化酶活性；Elisa法检测细胞因子TGF-β表达水平；Western blot法检测系膜细胞中JAK2/STAT3信号及FN蛋白的表达.结果表明，成功构建了Rac1(G12V)持续磷酸化突变体并在MES细胞中表达，与正常组相比，Rac1(G12V)激活突变MES细胞NADPH氧化酶的活性和ROS含量明显增加；JAK2/STAT3信号通路激活，TGF-β和FN表达明显增加.Rac1能激活系膜细胞氧化应激和JAK2/STAT3信号通路，并促进TGF-β及FN的表达.     

猪卵母细胞体外成熟及电激活后发育能力的研究

探讨了不同的成熟培养液及外源激素对猪卵母细胞体外成熟培养及电激活后孤雌胚胎发育能力的影响. 结果表明：（1）改良M199（mM199）组猪卵母细胞成熟率显著高于M199组，且这两组又较NCSU-23组能极显著提高卵母细胞的成熟率. （2）孕马血清（PMSG）+人绒毛膜促性腺激素（hCG）+促卵泡素（FSH）组卵母细胞成熟率略高于FSH+促黄体素（LH）组，两者卵母细胞成熟率极显著高于尿促性腺激素（hMG）组. （3）含胎牛血清（FBS），猪卵泡液（PFF），表皮生长因子（EGF）的培养液较对照组在卵母细胞成熟率上无显著差异，但均能显著提高电激活后的卵裂率.添加EGF组桑囊率明显高于不添加组.但分别添加FBS和PFF组较对照组在桑囊率上均无显著差异. （4）卵丘细胞扩散与卵母细胞第一极体排出之间无直接相关性，但扩散程度好能提高电激活后的卵裂率.     

小鼠冲胚效果与子宫内膜形态变化的组织学观察

本实验对５５例昆明小鼠用同等剂量的ＰＭＳＧ和ｈＣＧ注射，诱导其超排，在冲胚后取其子宫制作组织切片进行光镜下观察，其结果表明，有冲胚效果组中子宫腺腔数和子宫内膜微血管数量普遍高于无冲胚效果组。且当子宫内膜上皮呈高立方型时及子宫腺上皮呈高立方型和立方型时，在子宫腺腔数量上，两组差异显著，Ｐ〈０．０１（Ｐ〈０．０５）两组中子宫内膜微血管数与上皮形态变化曲线相似，而子宫腺腔数与上皮形态的关系，两组曲线变化     

Expression of Smad2 and Smad4 in rhesus monkey endometrium during the menstrual cycle and early pregnancy

Expression of Smad2 and Smad4 mRNAs in the endometrium of rhesus monkey on Days 8, 20 and 28 of the normal menstrual cycle and on Days 12, 18 and 26 of early pregnancy was detected using in situ hybridization. The results showed that Smad2 and Smad4 mRNAs were mainly localized in luminal epithelium and glandular epithelium. The expression of Smad2 mRNA in glandular epithelium was sustained at moderate level on Days 8, 20 and 28 of the menstrual cycle, while the expression of Smad4 gradually increased with the menstrual cycle. Both Smad2 and Smad4 mRNAs in functionalis glandular epithelium were expressed at the highest levels on Day 12 of early pregnancy, while in basalis glandular epithelium the most abundant expression of both Smads occurred on Days 12 and 18 of pregnancy. On Day 26, both Smads mRNAs were expressed at the lowest levels either in functionalis or in basalis. The data suggest that the epithelium is the major compartment where TGF-βs/activins exert their biological effects via Smads, and that Smad4 may play a role in the maintenance of endometrial gland function during secreting period of the menstrual cycle. During lacunar stage of early pregnancy, Smad2 and Smad4 are implicated in the tissue remodeling of endometrial functionalis and basalis, and during early villous stage both Smads are functional primarily in basalis.     

精子和酒精对小鼠卵母细胞激活的比较

对不同卵龄的小鼠卵母细胞被精子和酒精激活后的激活率进行了比较。结果显示,卵母细胞对常规的体外受精和酒精的人工激活的激活率存在卵龄的差异。注射hCG后15～24h的卵母细胞容易被酒精的人工刺激所激活,20h卵龄的卵母细胞激活率最高,平均为81．6％,且速即卵裂率也最高,平均为48％,卵龄更大的卵母细胞激活率降低,而13h的卵母细胞难以被酒精激活。另一方面,13～15h的卵母细胞容易被精子激活而受精,卵龄较大的卵母细胞在体外难以被精子激活受精。这表明,精子和酒精对卵母细胞的激活机制有所不同。     

克罗米酚对继发性不孕患者子宫内膜组织形态及E2和P的影响

本研究观察了８名继发性不孕患者子宫内膜组织形态结构及血清Ｅ２、Ｐ在克罗米酚治疗前后自身变化对比,发现克罗米酚治疗前子宫内膜腺上皮组织形态明显落后于分泌中期应有的形态结构;克罗米酚治疗后子宫内膜腺上皮组织形态符合或接近分泌中期。光镜下分泌早期或分泌中期子宫内膜腺上皮形态结构克罗米酚治疗前、后同期比较无明显区别。提示：克罗米酚可改善继发性不孕子宫内膜腺上皮的生长与成熟,其机理可能与克罗米酚使排卵作用有关。克罗米酚治疗后７名患者血清Ｅ２水平较用药前升高（经检验,Ｐ＜００５）,差别有显著意义,其机理可能与克罗米酚促排卵作用及促卵巢及肾上腺的雄烯二酮转化为Ｅ２有关。     

BMP2，BMP4及BMP信号通路相关成员在发情周期小鼠子宫中的表达

研究目的：研究骨形态发生蛋白（BMP）2,4及BMP信号通路相关成员在发情周期小鼠子宫中的表达模式。创新要点：运用实时荧光定量聚合酶链式反应（PCR）系统地研究了Bmp2和Bmp4及其BMP信号通路相关成员在小鼠子宫中mRNA水平表达模式,同时运用免疫组化方法研究了BMP2蛋白在小鼠子宫中的定位模式。研究方法：重要结论：收集发情周期各个时期小鼠子宫,一侧子宫角贮存于液氮或-80℃冰箱用于实时荧光定量PCR,另一侧子宫角用40mg／ml多聚甲醛固定用于BMP2蛋白免疫组化定位。实时荧光定量PCR结果表明,Bmp2的表达水平在发情前期显著高于发情期和发情后期（P〈0．05）,Bmp4的表达水平呈现显著波动,但Bmp2与Bmp4差异不显著（P〉0．05）。Bmprla和Bmpr2的表达水平在整个发情周期无显著变化（P〉0．05）。然而,Bmprlb的mRNA水平在发情期显著下降（P〈0．05）,在发情后期上升。此外,Bmprlb的mRNA水平显著低于相应时期Bmprla和Bmpr2的mRNA水平（P〈0．05）。三种R—Smads差异地表达于小鼠子宫,并且Smad1和Smad5的表达水平显著高于Smad8（P〈0．05）。此外,Smad4的表达水平在整个发情周期无显著变化。免疫组化结果显示,BMP2蛋白在整个发情周期差异表达,并主要定位于子宫腔上皮细胞和腺上皮细胞。我们的结果提供了BMP2和BMP4及其BMP信号通路相关成员mRNA水平表达变化信息,这些数据为论证BMP在子宫内膜中的作用如子宫内膜的退化与重塑提供量化和有用的信息。     

鹿茸对孕鼠和胎鼠的影响

目的本实验旨在探究鹿茸对孕鼠和胎鼠的影响。方法昆明小鼠随机分组,A组：早48只,6 24只以6：9 =1：2的比例合笼,孕第5天一第14天连续对雌鼠经口灌胃给3 mg·kg。1d～、6 mg·kg“d“和12 mg·kg。d’1剂量 的鹿茸;B组：早96只,6 48只,雄鼠连续给鹿茸(剂量同A组雌鼠)60 d后,以6：辛=l：2的比例合笼,从受孕率、 孕鼠体重、死胎率、吸收胎率、胎盘重、子宫和胎鼠重以及胎鼠的外观、内脏和骨骼等方面进行检查。结果A组： 在第18天时,高剂量组体质量、死胎率、吸收胎率、胎鼠外观、内脏和骨骼畸形率与对照组比较,具有统计学意义(P <0．05);随剂量的升高,胎盘重、子宫和胎鼠重有所降低．但没有统计学意义。B组：中剂量组与对照组之间比较, 受孕率显著增加,具有统计学意义(P<0．05);随着剂量的增加各组死胎率、吸收胎率、胎盘重、子宫和胎鼠重无显 著差异(P>0．05);各给药组与对照组比较,对胎鼠畸形没有造成影响。结论在本实验剂量范围内,高剂量组鹿 茸在雌鼠妊娠期间可导致孕鼠体质量下降,死胎率、吸收胎率增加;胎鼠外观、内脏和骨骼畸形增加;中剂量鹿茸在 交配前对雄鼠灌胃可提高受孕率,对胎鼠不造成畸形。     

Apparent role of the macrophage growth factor, CSF-1, in placental development

Colony stimulating factor-1 (CSF-1) is a glycoprotein growth factor required for the proliferation and differentiation of mononuclear phagocytic cells (reviewed in ref. 1). A 10,000-fold elevation of mouse uterine CSF-1 during pregnancy, suggested by studies of the bone marrow colony stimulating activity of uterine extracts, was recently demonstrated by radioimmunoassay (RIA). This increase and the observations that placenta and choriocarcinoma cell lines express c-fms messenger RNA and the c-fms proto oncogene product (CSF-1 receptor) respectively, suggest an additional role for CSF-1 in pregnancy. We now show that uterine CSF-1 concentration is regulated by the synergistic action of female sex steroids, oestradiol-17 beta (E2) and progesterone (P) and that the elevation in CSF-1 concentration can be attributed to the preferential expression of an alternatively spliced CSF-1 mRNA by uterine glandular epithelial cells. These findings indicate that CSF-1, under hormonal influence, plays a role in placental development and function and that steroid hormones may regulate developmental processes via their effects on the expression of tissue-specific growth factors.