烟草原生质体的分离纯化

研究从烟草叶片分离原生质体的若干影响因素.通过酶解法降解细胞壁释放出原生质体,利用离心和蔗糖漂浮法从粗提取液中纯化出原生质体,并通过血球计数板计数来比较制备的效果.结果表明:酶的种类、质膜稳定剂、渗透压稳定剂、pH及酶解时间是影响原生质体制备的重要因素.纤维素酶含量2%,果胶酶含量1%,2-N-吗啉乙烷磺酸(MES)浓度50mmol/L,Ca2+与甘露醇作为渗透压稳定剂,pH6左右,温度28℃,酶解时间4h时原生质体的分离效果最佳.     

拟南芥叶肉细胞原生质体分离及影响因素

通过对拟南芥(Arabidopsis thaliana)叶肉细胞原生质体分离条件的研究,探讨了酶解法制备拟南芥叶肉细胞原生质体的分离条件和影响因素.在不同纤维素酶质量浓度、山梨醇质量浓度、酶解液pH值、酶解时间下,测定了拟南芥叶肉细胞原生质体的产量.结果表明,在20 g/L纤维素酶、140 g/L山梨醇、pH=5.8的酶解液中,酶解时间为1.5 h,原生质体产量最高.同时,在相同分离条件下测定了拟南芥幼叶和老叶的原生质体产量,结果表明,幼叶原生质体产量显著高于老叶.     

3种杜鹃属植物原生质体制备纯化条件的研究

以云锦杜鹃、西洋杜鹃、锦绣杜鹃的组培苗叶片为试验材料,研究了酶液组成、酶解时间、酶液pH值、材料生理状态对其原生质体分离效果的影响以及离心速度和离心时间对原生质体收集纯化的影响,实验结果表明:杜鹃组培苗叶原生质体分离最佳条件是酶液组成为2%纤维素酶+1%果胶酶,酶解总时间为14 h,酶液pH值为6.0;杜鹃原生质体收集纯化的离心适宜条件为1 000 r/min转速下离心6 min,能收集到大量有活力的原生质体,有活力的原生质体达79.27%.     

紫锥菊愈伤组织原生质体分离方法初探

紫锥菊提取物属于目前国际上流行的草本植物药,其主要运用于增强免疫力等方面.以加拿大狭叶紫锥菊愈伤组织为材料,研究影响其原生质体分离的因素,结果表明选用浅黄绿色、质地均匀且呈疏松颗粒状的紫锥菊愈伤组织易游离出原生质体;采用纤维素酶浓度为2.0%,果胶酶浓度为1.0%,半纤维素酶浓度为0.5%,甘露醇浓度为0.7 mol·L-1的酶液配方酶解时间为8 h时,原生质体的产量为每克鲜重含50.0×104个.由此归纳出一套完整的愈伤组织诱导,组织培养,原生质体分离纯化,原生质体鉴定及计数的方法.     

酵母菌原生质体形成与再生多因子综合效应分析

研究了酶解时间、酶解温度、渗透压稳定剂和预处理剂对酿酒酵母Ａ００１与克鲁维酵母Ｙ０３４原生质体形成时间与再生的综合效应．统计分析表明，在２％蜗牛酶，菌龄为对数生长期时，影响原生质体形成的主要因素是酶解时间、酶解温度，且两者存在交互作用．影响原生质体再生的主要因素是渗透压稳定剂．确立了实验菌株原生质体形成与再生的最佳匹配条件     

酵母菌原生质体形成戌再生多因子综合效应分析

研究了酶解时间、酶解温度、渗透压稳定剂和处理剂对酿酒酵母Ａ００１与克鲁维酵母Ｙ０３４原生质体形成时间与再生的综合效应，统计分析表明，在２％蜗牛酶，菌龄为数生长期时，影响原生质体形成的主要因素是酶解时间、酶解温度，且两者存在交互作用，影响原生质体再生的主要因素是渗透压稳定剂，确立了实验菌株原生质体形成与再生的最佳匹配条件。     

正交设计法探讨茯苓原生质体的最佳制备条件

应用正交设计法研究了不同因素对茯苓原生质体制备的影响.实验结果表明，渗稳剂的种类和酶解时间对茯苓原生质体产量的影响最显著；培养5 d的菌丝体在30 mg/L溶壁酶＋20 mg/L蜗牛酶的酶液中，以0.6 mol/L的蔗糖作为渗稳剂，30℃酶解1 h，茯苓原生质体的产量最高.     

刺孢吸水链霉菌与淡紫灰链霉菌原生质体制备条件研究

通过对甘氨酸浓度、酶解温度、酶浓度、酶解时间等影响因素考察，及正交试验优化，确定了刺孢吸水链霉菌和淡紫灰链霉菌原生质体制备的最佳条件.实验结果表明，刺孢吸水链霉菌最佳原生质体制备条件是：甘氨酸浓度为0.5%，酶解温度28 ℃，溶菌酶浓度为3×10-3 g/mL，酶作用时间60 min；淡紫灰链霉菌：甘氨酸浓度为1.0%，酶解温度32 ℃，溶菌酶浓度4×10-3 g/mL，酶作用时间60min.有效的原生质体保存条件是：-20 ℃，在5 d内，原生质体再生率在15%以上.     

蒙古口蘑原生质体的制备与再生研究

影响蒙古口蘑原生质体形成和再生的因素很多,重点探讨了酶浓度、酶解时间、菌龄、渗透压稳定剂和再生培养基对原生质体形成和再生的影响.结果表明,蒙古口蘑原生质体制备和再生的最佳条件是:菌龄为5 d,2.5% 溶壁酶处理4 h,酶解温度25℃,0.6 mol·L-1KCl为渗透压稳定剂,MB为再生培养基,再生率为8.4×10-4左右.     

担子菌LMPQ39和CSP菌丝原生质体分离和再生的研究

本文以蜗牛酶和纤维素酶的混和酶液作为脱壁酶，通过酶解试验比较了菌龄，酶解时间，酶解温度及酶液浓度等对担子菌ＬＭＰＱ３９和ＣＳＰ菌丝原生质体分离的影响，通过原生体再生试验，比较了渗透压稳定剂对ＬＭＰＱ３９和ＣＳＰ菌丝原生质体再生的影响，获得了１０＾５－１０＾８数量级的原生质体再生菌落，同时，本文还对ＣＳＰ原生质体再生过程的形态变化作了适当的描述。     

烟草K326叶肉原生质体培养再生植株及影响因素的研究

以烟草K326无菌苗为材料,成功地将烟草叶肉原生质体培养出再生植株.并同时就烟草叶肉原生质体的酶解条件、培养方法及培养基中的激素组成等因素对植株再生的影响进行了研究和探索.     

烟草种间叶肉原生质体融合方法的研究

利用PEG法、高Ca2 高pH法和PEG-高Ca2 高pH法等三种原生质体融合方法,对普通烟草K326和黄花烟草叶肉原生质体进行融合,结果表明,PEG-高Ca2 高pH法的有效融合率最高,融合效果最好.并同时对影响烟草叶肉原生质体融合的其它因素进行了研究和探讨.     

乙烯释放剂对烟草抗氧化系统的影响

采用不同浓度乙烯利处理烟草K326品种幼苗叶片,探索外源乙烯对其叶片中酶促和非酶促活性氧(ROS)清除系统的影响.结果表明,适当浓度的乙烯利处理可提高烟草K326品种幼苗叶片内抗坏血酸(AsA)和谷胱甘肽(GSH)含量以及超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)和过氧化氢酶(CAT)活性.试验证实外源乙烯能够明显增强烟草K326的抗氧化能力,为进一步研究乙烯在胁迫应答以及提高植物抗逆性过程中的作用奠定了一定的基础.     

不同烤烟品种对硒的富集能力及动态研究

分析了不同烤烟品种对微量元素硒的富集能力差异及动态变化,结果表明:①K326具有较强的富硒能力,红大富集硒的能力则相对较弱;在烟草大田生育期,中烟103、云烟87叶片中硒的富集动态呈现出"持续上升—下降"的趋势,红大、K326、NC82则表现为"下降—上升—下降".②土壤强化供硒易促进硒往上部叶中富集;中烟103和云烟87相比其他品种对硒肥的利用率高;各烤烟品种对硒肥的敏感程度不同,土壤强化供硒改变了红大、K326、NC82叶片中硒的富集动态,表明红大、K326、NC82对硒肥较为敏感.     

烤烟糖质量分数与气象因子的相关性评价——以昭通烟区为例

为探索昭通烟区烟叶糖质量分数与其气象因子的关系,研究了2011-2015年昭通烟区3个主要基地(昭阳、彝良、镇雄)烤烟K326各部位初烤烟叶糖质量分数(总糖、还原糖、两糖差)与气象因子的相关性.结果表明:昭通烟区各部位初烤烟叶的总糖质量分数与大田期5-8月日照时数、降雨量、温度的相关性因基地不同而异;各部位初烤烟叶还原糖质量分数与大田期5-8月日照时数负相关、与降雨量正相关、与气温的相关性因基地不同而异;各部位初烤烟叶两糖差与大田期5-8月日照时数正相关、与降雨量负相关、与温度的相关性因基地不同而异.因此,影响昭通烟区各部位初烤烟叶两糖协调性的主导生态因素为大田期5-8月的日照时数和降雨量.     

湖北烤烟多酚类物质质量分数及其与海拔高度的关系分析

分析了湖北K326烤烟多酚类物质含量特征及其与海拔高度的关系.结果表明:(1)湖北烤烟多酚类物质总量平均为37.63mg/g,随叶位由上而下逐步增加.(2)相关分析表明,C3F和X2F等级烟叶多酚物质总量随海拔升高显著增加.(3)聚类分析将海拔高度与烟叶单宁类物质含量、莨菪亭、黄酮类物质含量、多酚类物质总量共5项指标分为3类.海拔高度为1050～1200m左右时,各等级烟叶多酚类物质总量相对较高.     

烟株不同叶位及接种方式对TMV传播的影响

为进一步弄清烟草普通花叶病毒病的传毒规律.试验以烟草品种K326为材料,连续3a以不同接种方式对健康烟株进行TMV接种试验.结果表明:烟草普通花叶病不通过烟叶气孔传毒,而是通过微伤口、大伤口和叶面与叶面接触渠道传播病毒,而且病毒人口离生长中心越近,病毒传播表现的速度更快,病毒的潜伏期为15～30 d,且在接种30～45d内,烟叶的发病率有一高峰值;烟草普通花叶病毒在烟株的幼嫩叶片上更易传播,症状表现在接种以上的叶片上,带病症的老叶片随着烟株的生长,症状会慢慢消失;在20～35℃的范围内,高温高湿有利于病毒的侵染和症状的表现.杜绝烟草幼嫩叶片摩擦伤口和TMV接触,是防治烟株上TMV传播的有效途径.     

烟株叶片化学差异及聚类分组法在烟叶分组中的应用

选取云南烤烟云87、K326和红花大金元植株,通过测定烟株每片烟叶总糖、总氮和烟碱含量,研究这3个化学成分在植株不同部位的分布规律,并用聚类法对数据进行分析.结果表明,烟株不同部位叶片的化学成分差异变化规律非常明显,从基叶到顶叶,总氮和烟碱含量由低到高,总糖含量则先升高后降低.对植株叶片分组的聚类分析结果与国标分组基本一致,从而在内在化学质量差异性上印证了国标部位分组的科学性,同时也表明烟叶原料进一步精细化分组的可行性.