冬眠动物达乌尔黄鼠离体心脏对缺灌和再灌损伤的耐受性

秋季未入眠之达乌尔黄鼠离体心脏用Langendorff方法灌流,平衡10min,全心缺灌15min,然后再灌10min。于缺灌期和再灌期分别定时收集心脏冠脉流出液,测定流份中肌酸激酶(CK)的活性(U·L^－1),同时记录心电图和心脏收缩力。此外,用恒温动物大鼠作为冬眠动物黄鼠的实验对照,经受完全相同的实验处理。缺灌15 min期内,两种动物心脏皆有大量CK释放,释放量与缺灌时间呈线性关系。但黄鼠各采样点CK释放值都低于大鼠,提示黄鼠心脏对缺灌损伤的耐受性强于大鼠。再灌期大鼠心脏有两个CK释放峰,而黄鼠仅有第Ⅰ峰,且其活性值(179±32U·L^－1)显著低于大鼠(255±17 U·L^－1,P<0.05)。再灌期黄鼠室颤和室速发生率以及心脏收缩幅度下降百分率皆显著低于大鼠(P<0.01)。上述结果证明,与大鼠相比较,冬眠动物黄鼠心脏对缺灌和再灌损伤具有较强的耐受性。     

小鼠心脏缺灌和再灌早期乳酸脱氢酶释放规律

离体小鼠心脏,用Langendorff法灌流,平衡10min后全心缺灌,于再灌期最初5min内按一定时间顺序收集冠脉流出液,测定乳酸脱氢酶(LDH)的活性浓度(U/L),作为心肌细胞损伤的指标。实验分3组,分别采取不同的缺灌时间：5min,10min和15min。平衡期LDH释放对照值3组分别为(7.8±0.8)、(7.9±0.7)和(7.6±0.7)U/L。缺灌期即开始LDH的大量释放,随缺灌时间加长而递增。再灌期,3组LDH均呈现双相释放,第Ⅰ峰出现于再灌开始15s,峰值极高,分别为：5min缺灌组：(55.4±3.8)U/L;10min组：(86.8±5.4)U/L,15min组：(96.2±6.8)U/L,均与各自平衡期对照值差异显著(p<0.001)。该峰升降迅速,主要反映缺灌对心肌的损伤。第Ⅱ峰出现于再灌早期第180～240s之间,峰值较低。3组分别为(15.4±2.0)、(17.3±1.6)和(15.9±1.4)U/L。3组之间,除第Ⅰ峰峰值5min组与10min组、15min组差异显著外,其余各点均无显著差异。此外,统计了再灌期5 min内出现的心律失常,有室性早搏(PVC)和室速(VT)。PVC次数在上述3组中分别为187±17,217±10和244±14。VT所占时间在这3组中分别为(10±2)s,(22±3)s,(24±2)s。再灌期正常窦性节律时间(NSRT)分别为(214±SD29)s(SD为标准差),(196±SD24)s和(183±SD24)s。实验首次用小鼠离体心脏建立了一个以心肌LDH释放为指标的实验模型,为深入研究缺血再灌对心脏损伤及其防护提供了方便和新的可能性。     

大鼠离体心脏缺灌和再灌早期乳酸脱氢酶和肌酸激酶的释放规律

用Ｌａｎｇｅｎｄｏｅｆｆ法灌流雄性Ｗｉｓｔａｒ大鼠心脏，平衡１０ｍｉｎ，缺灌１０ｍｉｎ，于再灌３ｍｉｎ内每隔１５ｓｅｃ收集一次冠脉流份，连续检测冠脉流份中ＣＫ、ＬＤＨ以及ＧＯＴ的活性（Ｕ／Ｌ），比较它们释放的动态特征。结果表明，再灌３ｍｉｎ内，３种酶都呈双相释放。第１峰出现在再灌１５ｓｅｃ，酶活性为对照值的５一９倍，它主要反映缺灌损伤。再灌９０一１２０ｓｅｃ又出现第Ⅱ峰，主要代表再灌损伤。无论是再灌３ｍｉｎ内酶释放总量，还是第Ⅰ，第Ⅱ峰的峰值，依酶活性高低排列的次序都是ＣＫ＞ＬＤＨ＞ＧＯＴ。此外，在部分动物身上进行了反复两次缺灌再灌实验，结果发现，第二次缺灌后ＣＫ释放量明显高于第一次缺灌值。ＬＤＨ的Ⅰ峰和Ⅱ峰出现时间与第一次无差别，只是３分钟内酶释放总量高于第一次。说明在本实验条件下，未见预缺灌处理对随后再次缺灌有保护作用。缺灌期心率逐渐减慢，收缩力逐渐减弱，但多数标本仍有微弱的收缩。这使缺灌期冠脉流份的酶活测定成为可能。实验发现，早在缺灌１ｍｉｎ时心肌细胞释放的酶，其活性可达对照值的２倍（ｐ＜０．０５），至缺灌１０ｍｉｎ时ＣＫ和ＬＤＨ的值可达对照值的１０倍左右。这一现象进一步证实，再灌１５ｓｅｃ内大量酶的     

aFGF对离体大鼠缺氧/再灌损伤心脏的保护作用

目的:探讨酸性成纤维细胞生长因子(aFGF)对大鼠心脏缺氧/再灌损伤的保护作用及作用机制。方法:在Langendorff装置上建立心脏缺氧/再灌模型,用BL-410生物机能实验系统记录经aFGF预处理的大鼠心脏缺氧/再灌前后左室发展压(LVDP)、左室内压上升/下降的最大、最小速率((dp/dt)m ax、(dp/dt)m in)的变化,测定不同时点冠脉流出液中的乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)含量。结果:aFGF预处理可促进心脏缺氧/再灌后心功能恢复,逆转缺氧/再灌导致的SOD降低和LDH、MDA升高。结论:aFGF对缺氧/再灌损伤心脏具有一定的保护作用,其作用机制可能与提高自由基清除酶活性及抑制脂质过氧化有关。     

硫辛酸对大鼠心脏缺血再灌早期肌酸激酶双相释放的保护作用

用Langendorff法灌流大鼠离体心脏,平衡10min,全心缺灌10min。于再灌3min内每15sec收集一次冠脉流份,测定肌酸激酶活性(U/L),作为心肌细胞损伤的指标,以研究自由基清除剂硫辛酸对缺血再灌损伤的保护作用。用无基质Krebs-Henseleit(K-H)溶液灌流心脏作为对照,再灌期CK呈双相释放,其第Ⅰ峰比平衡期正常值高6倍,第Ⅱ峰高3倍。再灌前和再灌后在无基质;K-H溶液中加入硫辛酸(3.5×10~(-5)mol/L),二者皆能显著使CK总释放量下降40％—45％。使第Ⅰ峰值下降39％—47％,并使第Ⅱ峰消失。说明预防给药和治疗给药效果基本相同。含有11.1mmol/L葡萄糖的K-H溶液灌流也有同样效果。如在有基质溶液中加入硫辛酸,二者并用效果更加显著。与单用葡萄糖的效果相比较,加硫辛酸组CK总释放量和第Ⅰ峰值皆进一步下降,下降率分别为葡萄糖组的27％和31％。此外,硫辛酸对本模型再灌期心律失常发生率也有明显保护作用,在3min再灌期内除有少数期前收缩外室颤发生率为零。硫辛酸对缺血再灌损伤妁保护作用与它的自由基清除机制有关。     

大鼠离体心脏缺灌和再灌早期乳酸脱氢酶和肌酸激…

用Ｌａｎｇｅｎｄｏｅｆｆ法灌流雄性Ｗｉｓｔａｒ大鼠心脏，平衡１０ｍｉｎ，于再灌３ｍｉｎ内每隔１５ｓｅｃ收集一次冠脉流份，连续检测冠脉流份中ＣＫ、ＬＤＨ以及ＧＯＴ的活性（Ｕ／Ｌ），比较它们释放的动态特征。结果表明，再灌３ｍｉｎ内，３种酶都呈双相释放。第１峰出现在再灌１５ｓｅｃ，酶活性为对照值的５－９倍，它主要反映缺灌损伤，再灌９０－１２０ｓｅｃ又出现第Ⅱ峰，主要代表再灌损伤。无论是再灌３ｍｉｎ内酶释     

HPLC法测定阿司匹林经皮给药贴剂中阿司匹林的含量

建立阿司匹林贴剂含量的测定方法。乙腈为阿司匹林贴剂的萃取溶剂,用Waters公司Symmetry Shield^TM RP₁₈柱(3.9mm×150mm, 5μm),流动相：乙腈-0.01mol·L^-1的磷酸氢二钠（磷酸调pH值至2.50）;体积比为25∶75;检测波长234nm;流速10mL·min^-1。阿司匹林在3～96μg·mL^-1范围内呈现良好的线性关系,r=0.9993。阿司匹林回收率为100.3%,RSD为0.42%。本方法简单、灵敏、准确,可作为该制剂内在质量的控制方法。     

钨酸根对不锈钢局部腐蚀的作用

采用模拟闭塞电池恒电流实验研究了304不锈钢在0.5(mol·L^-1)NaCl(pH=7)溶液中及添加不同浓度钨酸钠后局部腐蚀闭塞区内化学状态的变化。结果表明,主体溶液中添加一定浓度的WO₄^2-离子后,随着时间的延长,闭塞区的pH值下降明显减缓,Cl^-离子浓集倍数降低。WO₄^2-离子与Cl^-离子向闭塞区内竞争迁移。当添加的WO₄^2-离子浓度较低时,Cl^-离子的电迁移量仍然随时间的延长而增加;WO₄^2-离子浓度达到一定值后,WO₄^2-离子能有效地阻止Cl^-离子向闭塞区的迁移,钨酸根浓度越高效果越显著。闭塞区内WO₄^2-离子浓度随主体溶液中WO₄^2-离子浓度的增加而增大。对一定浓度WO₄^2-的主体溶液,WO₄^2-离子向闭塞区的迁移量随时间延长而增大,迁移速率则随时间的延长而降低。     

微分脉冲极谱法研究稀土离子对乳酸脱氢酶活性的影响

根据前文黄瓜根系伤流液(经La³⁺,Eu³⁺处理)中微量La³⁺,Eu³⁺明显影响氨基酸代谢的结果,用记时电流法研究了稀土对氮同化过程中硝酸还原酶(NR)和谷氨酸脱氢酶(GDH)活性的影响,酶活性的变化以辅酶NADH氧化电流在反应中的衰减速度来表示。用微分脉冲极谱法研究稀土离子对丙酮酸转化为乳酸反应中乳酸脱氢酶(LDH)活性的影响,以反应产物NAD⁺的还原电流的大小表示酶活性的变化。研究结果表明La³⁺在低浓度(<5μmol/L)下对酶活性有微弱的促进作用,其他稀土离子Ce³⁺,Eu³⁺, Dy³⁺,Yb³⁺在浓度稍高时(≥5μmol/L)都显示抑制作用。对比光度法的结果以及反应动力学参数V_max和K_m均证明稀土离子对此体系中LDH活性有抑制作用。     

A3钢在碱性NaCl体系中闭塞电池腐蚀的研究

用模拟闭塞电池法研究了A3钢在0.01 (mol·L^-1)NaCl( pH =12.00 )溶液中闭塞区内化学状态的变化。结果表明, 随着阳极极化时间的延长, 闭塞区溶液的pH值下降,开始时下降较快 ,Cl^- 向闭塞区内迁移 ,闭塞溶液的[Cl^- ]与极化时间成直线关系。在不同 pH值下的NaCl溶液中的极化曲线测试结果表明 ,当 pH值大于11时, A3钢极化曲线阳极区出现明显的钝化, 可见, 在pH值大于11的体系中, A3钢发生局部腐蚀的倾向更大。     

芬太尼联合东莨菪碱预处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤的影响

目的 探讨芬太尼联合东莨菪碱预处理对大鼠心肌缺血再灌注后的心肌保护效应.方法 24只雌性大鼠随机分为3组（每组8只）：即C组（心肌缺血再灌注组）、F组（芬太尼组）、F＋D组（芬太尼＋东莨菪碱组）.记录缺血前、再灌注即刻、再灌注30 min、再灌注120 min等的心率（HR）、左心室收缩压峰值（LVSP）、左心室舒张末压（LVEDP）、左心室收缩及舒张最大压力变化速率（±dp/dtmax）.再灌注120 min后,均取动脉血样3 mL,测定血清超氧化物歧化酶（SOD）活力、血清丙二醛（MDA）浓度、一氧化氮（NO）的浓度进行统计分析.结果 血液动力学的各组时间节点间的HR和LVEDP无显著差异（P＞0.05）,LVSP、±dp/dtmaxF组在再灌注30 min、120 min时较C组显著升高（P＜0.05）,F＋D组则显著高于F组（P＜0.05）.生化指标中F＋D组的SOD活力与C组和F组比较无显著差异（P＞0.05）,F＋D组的MDA浓度显著低于其余两组（P＜0.05）,F组和F＋D组的NO浓度都明显高于C组（P＜0.05）.各组心律失常严重程度评分,F＋D组最低（P＜0.05）.结论 芬太尼联合东莨菪碱比单纯使用芬太尼预处理具有更好的对心肌缺血再灌注损伤的保护作用.     

苦荞黄酮对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用

将Wistar大鼠随机分为5组，分别为假手术组（Sham）、缺血再灌注组（I／R）、苦荞黄酮小剂量组、苦荞黄酮大剂量和芦丁组．手术前30min腹腔注射给药，采用线栓法结扎大鼠双侧颈总动脉，制备脑缺血再灌注损伤模型，缺血30min，再灌注90min．然后断头取脑，测定脑匀浆中各种丙二醛（MDA）、乳酸脱氢酶（LDH）、一氧化氮（NO）和超氧化物歧化酶（SOD）．I／R组，脑组织中MDA、LDH、NO较sham组明显增高，而SOD较Sham组降低．苦荞黄酮大小剂量和芦丁均能降低脑组织中MDA、LDH、NO含量，但对SOD活力影响均不明显．结果说明苦养黄酮可能通过抗自由基和减轻NO介导的神经毒性来发挥对脑缺血再灌注损伤的保护作用，为进一步开发和利用苦养奠定了理论基础．     

大鼠不完全性视网膜缺血的组织学变化

采用双侧颈总动脉阻断血流（２ＶＯ）的方法，造成大鼠不完全性视网膜缺血，用组织学方法观察了不同缺血时间（３０、９０ｍｉｎ，４、７、３０ｄ）的缺血后再灌注与不再灌流对视网膜变化的影响。结果显示：缺血３０和９０ｍｉｎ再灌流４ｄ后，内炕网膜（包括外网层、内核层、内网层、节细胞层、神经纤维怪和内界膜）明显增厚；其他不再灌流的缺血组，厚度趋向减少。节细胞计数随缺血时间延长逐渐减少；缺血４ｄ后明显减少。提示不完     

幼鼠小肠缺血-再灌注肠组织的形态学观察

目的:观察幼鼠小肠缺血-再灌注(ischemia/reperfusion,I/R)肠组织形态学变化。方法:将32只4周龄(Sprague Dawley,SD)大鼠随机分成2组即假手术组(Sham组)和缺血-再灌注组(I/R组),每组各16只。Sham组仅暴露腹腔脏器,不作任何干预;I/R组经阻断肠系膜上动脉60 min后恢复血供,于再灌注30、60、90、120 min每组动物各处死4只取小肠组织进行组织学Chiu’s评分,结果进行单因素方差分析和组间t检验。结果:Sham组肠组织形态正常;I/R组小肠组织发生了明显的缺血和炎症反应并随再灌注时间延长而加重,各观察时间点组织学评分在组间比较差异均有统计学意义,各值在I/R组高于Sham组(P<0.05)。结论:幼鼠肠I/R导致肠组织病理损伤并随再灌注时间延长而加重。     

大鼠局灶性脑缺血再灌注碱性成纤维细胞生长因子蛋白表达的研究

目的 检测大鼠局灶性脑缺血再灌注后中心区、半影区bFGF的蛋白表达动态变化及意义。方法 采用线检法制作大鼠局灶性脑缺血再灌注模型，采用神经病学评分，TTC染色，光镜检测对模型予以评价，并用免疫组化法观察缺血3h再灌注3，6，24，72h缺血中心区、半影区bFGF表达的动态变化，并观察相应时间点、相应区域病理组织学变化．结果 在正常组及假手术组bFGF呈弱阳性表达．缺血3h及缺血3h再灌注3，6h中心区、半影区表达明显增强．与假手术组比较，差异显著(P＜0、05)、缺血3h再灌注24，72h缺血中心区bFGF表达下降，但仍较正常对照组高，此时半影区表达呈持续升高趋势，24h达高峰，72h有所下降。而相应病理变化为：缺血3h可见轻重不等的神经细胞变性坏死，缺血3h再灌注中心区及半影区随缺血再灌注时间延长，病理组织学变化逐渐加重．结论 正常脑组织中bFGF呈弱阳性表达，缺血中心区及半影区随缺血再灌注2d内随时间延长表达增强，与神经细胞缺血改变加重呈正相关．提示bFGF对脑缺血损伤后的神经细胞有保护和修复作用。     

VEGF在大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤中的表达变化

目的 研究局灶性脑缺血再灌注中心区、半影区VEGF表达的动态变化及意义．方法 采用线检法制备大鼠局灶性脑缺血再灌注模型．采用神经病学评分、TTC染色、光镜检测对模型予以评价．在此基础上采用免疫组化技术，观察缺血3h及缺血3h再灌注3，6，24，72h缺血中心区及半影区VEGF表达的动态变化，以及观察相应时间点缺血中心区及半影区病理组织学变化．结果 正常对照组及假手术组VEGF呈阳性表达，缺血3h及缺血3h再灌注3，6h中心区及半影区VEGF表达明显增强，缺血3h再灌注24，72h缺血中心区VEGF表达接近正常，而此时半影区呈升高趋势，24h达到高峰，72h有所下降(与假手术组相比，P＜0．05)．相应神经元的病理组织学变化也随再灌注时间的延长而加重．结论 正常脑组织中VEGF呈弱阳性表达，缺血半影区随缺血再灌注时间延长表达增强．随着缺血再灌注时间延长，中心区神经细胞以坏死为主，半影区以神经细胞以凋亡为主．提示VEGF对脑缺血损伤后的神经细胞有保护和修复作用．     

冠心舒通胶囊对大鼠实验性心律失常的保护作用

目的：探讨冠心舒通胶囊对大鼠心律失常保护作用的效果和机理．方法：采用大鼠心肌缺血再灌注致大鼠心律失常动物模型,以BL-420生物机能实验系统观察ECG的相关指标,并进行统计分析．结果：冠心舒通胶囊组与对照组相比较,可以使心肌缺血再灌注大鼠模型的室性早搏、室速与对照组相比均有明显减少（n=10,P〈0．05）．结论：冠心舒通胶囊对大鼠心肌缺血再灌注心律失常具有保护作用．     

Influence of site-directed mutation of cytochrome b5 Phe35 on the protein’s structure and properties

Kinetic studies of the heme dissociation from the wild type and Phe35Tyr, Phe35Leu mutants of bovine liver microsomal ferricytochrome b 5 indicate that the oxidized Phe35Tyr mutant is more stable towards denaturant than wild type but Phe35Leu mutant proceeded with a different mechanism compared with wild type cytochrome b 5 and Phe35Tyr mutant protein. Because of the decrease of side chain volume in Phe35Leu mutant, a cavity produced in the interior of the protein may offer a channel for urea molecule to enter the hydrophobic pocket. When urea concentration is larger than 5 mol/L, the urea molecule may compete to coordinate the iron of heme with His39, that results in sharp increase of the rate of heme dissociation. The interaction between cytochrome b 5 and cytochrom c demonstrated that a 1:1 protein complex was formed between the two proteins. The binding constants of cytochrome b 5 with cytochrome c are: wild type K A=4.2(±0.01)×10 6(mol/L) -1 , Phe35Tyr K A=3.7(±0.01)×10 6(mol/L) -1 and Phe35Leu K A=4.7(±0.01)×10 6(mol/L) -1 respectively ( I =1 m mol/L, pH 7.0 soldium phosphate buffer, 25℃). These results clearly show that the mutation at Phe35 has no influence on the binding of cytochrome b 5 with cytochrome c and that the hydrophilic patch residues are not involved in the binding of cytochrome b 5 and cytochrome c.