抗人膀胱癌单抗的导向治疗实验研究

用北医大泌尿所建成的人体膀胱移行细胞癌细胞系BIU 87免疫BALB/c小鼠,制备了一株抗人膀胱癌单克隆抗体,多项鉴定表明此单抗特异性较好。用此单抗与放射性同位素~131I偶联后,注入载瘤裸鼠体内,肿瘤显像明显,进一步证实单抗的导向作用。然后用这种单抗通过顺乌头酸与抗肿瘤药物阿霉素偶联,用膀胱癌细胞BIU-87和E-J二种作为靶细胞,大肠癌细胞Lovo作为对照,检查免疫偶联物在体外的杀伤活性,结果表明阿霉素与单抗的龟疫偶联物对Lovo细胞没有杀伤作用,对BIU-87及E-J细胞有明显的杀伤作用,而两种膀胱癌细胞对免疫毒素的敏感性是有所不同的。单独使用单抗在体外没有杀伤作用,单独使用药物会产生非特异性杀伤作用。单抗与阿霉素混合使用其作用与单独药物相同。载瘤裸鼠体内用药实验结果表明免疫偶联物能抑制肿瘤生长,单独使用单抗,通过体内补体激活也可起一定治疗作用,但不如免疫毒素明显。停药后有些肿瘤有增长趋势,提示今后临床用药应注意治疗间隔时间及用药方案。     

博安霉素及其单克隆抗体偶联物对裸鼠移植的人大肠癌的作用

大肠癌是我国常见的消化道恶性肿瘤之一,对大多数化疗药物均不敏感。本研究用裸鼠移植的人大肠癌动物模型,观察博安霉素及其与单克隆抗体R19偶联物对人大肠癌生长的抑制作用。在裸鼠可以耐受的剂量下,博安霉素对移植的人大肠癌(人结肠癌HT-29和人盲肠癌HCe-8693)均有明显的抑制作用。博安霉素15mg/kg和10mg/kg对人结肠癌HT-29的抑制率为92％和89％(P<0.01)对肓肠癌HCe-8693的抑制率分别为92％和190％(P<0.01)。博安霉素MMC和5-Fu在相当于l/9 LD50的剂量进行比较,博安霉素对HT-29的抑制率为82％;MMC为53％;而5-Fu仅为12％。博安霉素对人大肠癌的抑制作用明显较MMC(P<0.05)和5-Fu(P<0.01)为强。用人盲肠癌HCe-8693细胞免疫Lou/C大鼠,用大鼠杂交瘤技术获得抗人大肠癌单抗R19。用免疫组织化学的方法检测了R19单抗对肠癌的特异性。用ABC法检测,发现R19对裸鼠移植的人结肠癌HT-29和人结肠癌的外科手术切块呈阳性反应,对人胚脑、胸腺、淋巴结、肺、脾和血细胞等呈阴性,对肾小管上皮细胞显示弱阳性。用DextranT-40为中介体的方法连接大鼠R19和博安霉素形成的偶联物兼有二者生物学活性。实验共设5组,各治疗组的剂量以博安霉素计算为1mg/kg,每周二次,共8次,最后通过称量瘤重计算各组的抑制率,游离博安霉素为52％;R19与博安霉素混合物为34％;无关抗体M_3与博安霉素偶联物为48％;R19与博安博素偶联物为90％,显著地高于其它几组(P<0.01)。综上所述,博安博素及其与R19的偶联物对裸鼠移植的人大肠癌均有明显的抑制作用,尤其是博安霉素和单抗R19的偶联物在同等剂量下对肿瘤的抑制率显著地高于游离博安霉素。     

CMCT-FA修饰阿霉素纳米脂质体的制备与体外pH敏感释放

利用1-乙基-3-(3-二甲基丙基)-碳二亚胺(EDC)介导反应合成了叶酸偶联的羧甲基壳聚糖(CMCT-FA),以阿霉素为模型药物,采用薄膜分散-pH梯度法制备CMCT-FA修饰的阿霉素纳米脂质体。考察了CMCT-FA修饰阿霉素纳米脂质体的包封率、粒径、ζ电位以及在不同pH释药介质中的释放特性。结果表明:CMCT-FA修饰阿霉素纳米脂质体的ζ电位较未修饰脂质体明显减小,但较CMCT修饰阿霉素纳米脂质体无明显差别;与阿霉素纳米脂质体和CMCT修饰的阿霉素纳米脂质体相比,CMCT-FA修饰的阿霉素纳米脂质体在酸性条件下的药物释放速率和药物释放量均有明显提高。     

单克隆抗体连接表阿霉素导向治疗乳腺癌的体外基础研究

本文报道了抗人乳腺癌单克隆抗体Ｍ４Ｇ３与表阿霉素结合物的制备及其体外免疫活性．首先用高碘酸钠氧化葡聚糖，使其成为多醛基葡聚糖，并以此为中间载体将表阿霉素与单抗连接，经测定，每一抗体分子能携带３１个药物分子，且结合物仍具有良好的免疫活性，为单抗导向药物治疗乳腺癌提供了理论基础和实验依据．     

姜黄素联合阿霉素对膀胱癌 T24生长抑制的协同作用

目的探讨姜黄素联合阿霉素对人膀胱癌T24细胞的生长抑制及其诱导肿瘤凋亡的协同作用.方法用不同浓度的姜黄素和阿霉素分别及联合作用T24细胞,用MTT法检测细胞增殖抑制率,流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期分布.结果阿霉素和姜黄素联用时,能较大幅度增强姜黄素的抑制效果(P<0.05);流式细胞仪检测结果显示:姜黄素与阿霉素联合将细胞周期阻滞于S期.结论姜黄素联合阿霉素对膀胱癌细胞T24的生长有协同抑制效应,能提高阿霉素对人膀胱癌T24细胞的敏感性.     

单克隆抗体连接表阿霉素导向治疗乳腺癌的体外基础研究

本文报道了抗人乳腺癌单克隆抗体Ｍ４Ｇ３与表阿霉素结合物的制备及其体外免疫活性，首先用高碘酸钠氧化葡聚糖，使其成为多醛基葡聚糖，并以此为中间载体将表阿霉素与单抗连接，经测定，每一抗体分子能携带３１个药物分子，且结合物仍具有良好的免疫活性，为单抗导向药物治疗乳腺癌提供了理论基础和实验依据。     

SN38与呋咱氮氧化物偶联物的合成及抗肿瘤活性研究

SN38为喜树碱类拓扑异构酶抑制剂。本研究以羧基呋咱氮氧化物与SN38的酚羟基成酯合成制备SN38与呋咱氮氧化物的偶联物,采用griess法、MTT法及划痕实验分别测定了该偶联物的体外NO释放、抗肿瘤活性及抗肿瘤转移活性。结果显示合成的SN38与呋咱氮氧化物偶联物24 h体外释放NO达32.4%,抗肿瘤活性比SN38及SN38与呋咱氮氧化合物的混合物更强,且具有一定的抗转移活性。可见SN38与呋咱氮氧化物的偶联物表现出显著的协同效应。     

用In－111通过1B4M－DTPA标记单克隆抗体的研究

研究了双功能联接剂１－（４－异硫氰基苄基）－４－甲基二乙三胺五乙酸（１Ｂ４Ｍ－ＤＴＰＡ）与抗体偶联反应以及用Ｉｎ－１１１标记偶联物的条件，得到了体内外稳定的Ｉｎ－１１１标记抗体；用高纯Ｉｎ－１１１通过１Ｂ４Ｍ－ＤＴＰＡ标记了抗胃癌单抗３Ｈ１１，标记抗体免疫活性保持完好，放射性比活度为２．０×１０￣（１１）Ｂｑ／ｇ；荷瘤裸鼠注射标记物２４ｈ后，即得到靶目标的清晰显像，１６８ｈ的瘤／肝放射性比值为２．０。     

磷酸壳寡糖修饰阿霉素脂质体的制备及体内外评价

本研究首次合成了磷酸壳寡糖-胆固醇接枝物(PCS-Chol),并对其结构、取代度和特性黏度等进行了考察.制备了由该接枝物所修饰的磷酸壳寡糖-阿霉素脂质体(PCS-DOX-L),考察了该脂质体的粒径、包封率、形态以及体外释放.采用MTT法评价了该制剂对MG63细胞的毒性,并进一步研究了其在荷瘤裸鼠体内的组织分布情况.结果表明,该脂质体的粒径为209. 5±0. 5 nm,包封率为(85. 4±2. 2)%;体外释放具有一定的pH响应性和缓释特性.MTT实验表明该脂质体对MG63细胞的毒性具有时间和浓度双依赖性.荷瘤裸鼠的体内分布实验表明,PCS-L具有一定的骨肉瘤靶向性.本研究初步证明了PCS在体内具有良好的骨靶向性,所修饰形成的PCS-L可用于骨肉瘤的靶向治疗.     

~1I-抗膀胱癌单克隆抗体在荷瘤裸鼠的体内分布与放射免疫显像

用氯胺T法际记鼠抗人膀胱癌单克隆抗体(抗BIU-87McAb),标记率及标记抗体免疫活性满意。抗体注射于荷瘤裸鼠,靶与非靶放射性比值随肘间延长而增高,尾静脉注射后72h:肿瘤/血液=0.99、肿瘤/肌肉=8.43、肿瘤/膀胱壁=4.04;注射后120h:肿瘤/血液=1.38、肿瘤/肌肉=12.31、肿瘤/膀胱壁=5.24。于注射后72h行Y照相,肿瘤影像明显可见,5—7天影像更为清晰。与非特异性对照放免显像对比,表明抗BIU-87McAb具有高度特异牲,有可能进一步应用于人体膀胱癌及其转移灶的导向诊断与治疗。     

E-选择素肽配体及其与羟基喜树碱的偶联物合成与抗肿瘤活性评价

利用固相合成方法设计并合成了12个E-选择素七肽配体(IELLQAR)的衍生肽分子(1—12)以及3个肽分子配体(1)与羟基喜树碱的偶联物(13—15).体外肿瘤细胞HL-60与血管内皮细胞HUVEC的黏附实验表明:在1μmol/L测试浓度下,多个肽分子(1、7、8、10、11、12)表现出比已报道七肽(2)更好的活性.进一步的评价显示偶联物基本保留了原药HCPT的细胞毒活性,同时具备肽配体的抗黏附活性,而多肽分子本身并没有明显的细胞毒作用.尤其偶联物13和14在0.3μmol/L浓度下有显著的抗黏附作用,说明偶联物在同样浓度水平下可同时发挥抗肿瘤和抗黏附作用.上述结果表明该类肽分子具有应用于肿瘤靶向和抗肿瘤转移的潜力.     

^99Tc^m通过金属硫蛋白标记抗肿瘤单克隆抗体的研究

本文系统研究了^99Tc^m通过双功能联接剂金属硫蛋白（MT）标记抗肿瘤单克隆体的化学问题，并发展了新的实验方法和技术。用交联剂戊二醛制备MT与抗体（Ab)偶联物（MT－Ab)，偶联率为58％。用还原标记法制备^99Tc-MT-Ab，放射性利用率高达90％以上，而非特异标记低于10％。体外试验表明，在强络合剂竞争时，标记物有较高的稳定性。抗结肠癌单抗CL－3标记物的免疫反应活性保留87％。     

裸鼠饲养繁殖与应用研究

1990年,改建了一个约70m~2的裸鼠饲养繁殖与应用实验室。研究结果表明,该实验室设计科学、安全可靠、布局合理、切合实际、设施先进,投资少、见效快,其环境条件达到了SPF动物的饲养标准;裸鼠饲料中蛋白质的含量为25％;每胎平均产裸鼠4.2只,其成活率为73.3％;平均寿命为535.4±56.3天;用BALB/c-nu/+小鼠生产单克隆抗体,其效价高、品质好、产量增加50％以上;建立了人白血病、宫颈癌和膀胱癌三种肿瘤模型,并得到实验应用,取得了满意的结果。     

人参水提物对阿霉素所致大鼠心肌损伤的影响

目的探讨人参水提物对阿霉素所致心脏损伤的保护作用.方法50只Wistar大鼠随机分3组:对照组(NS组,10只)、阿霉素组(ADR组,20只)、阿霉素 人参水提物组(ADR G,20只).13 d后在光镜下观察心肌细胞病理形态学变化,检测心肌ATP.含量.结果光镜下ADR G组心肌损害程度较ADR组轻,ADR G组心肌ATP含量明显高于ADR组(P<0.01).结论人参水提物对阿霉素所致大鼠心肌损伤有明显的保护作用.     

超细改性粘土粉料对橡胶的补强作用

以粘土矿物为原料，通过超细粉碎，偶联改性，制成了制细改性粘土粉料，探讨不同的粘土矿物、粒径、偶联剂、偶联工艺所得的粉料对橡胶制品力学的影响，从而获得了具有良好性能的橡胶补强剂。     

扩张型心肌病动物模型的建立与评估

目的 探索建立扩张型心肌病(DCM)动物实验模型的方法并对其进行评估，为DCM的临床诊断治疗提供思路与方法。方法 实验选择成年比格犬，分为两组，实验组注射阿霉素，对照组注射等量0.9%氯化钠溶液。经麻醉诱导进行冠状动脉造影后，经左侧冠状动脉主干注射阿霉素(多柔比星),每周注射一次，连续注射5周。建立实验组6只，对照组4只，末次注射4周后对各组动物进行心脏超声检测、多导生理记录仪及心导管技术检测、血液学检测及心室重构评价检测，以评估DCM建模的可行性及有效性。结果 与对照组相比，DCM组实验动物心脏出现明显扩大，且心室收缩力出现明显降低；DCM组实验动物与对照组相比，各项血液学指标(除白细胞计数外)均出现明显差异；与对照组相比，DCM组实验动物出现明显地全心扩大，Collagen Ⅰ/Ⅲ的含量明显升高。结论 采用冠脉多次注射阿霉素(多柔比星)的方法建造DCM动物模型，具有可行性及有效性，其周期较短、简单易行，并且更接近于人类DCM病理生理过程。     

抗肺癌免疫光敏剂的制备及其杀伤作用

以碳二亚胺(EDCI)为连接剂将抗肺癌单克隆抗体(McAb 3D3与血卟啉衍生物(HpD)共价连接,制备成免疫光敏剂,经ELISA法测定及溶血试验,结果表明偶联物保留了 McAb的反应性及HpD的光敏活性,偶联物经紫外光谱及荧光光谱扫描分析表明,偶联HpD与非偶联HpD的光谱特性有所差别,体外杀伤试验表明,偶联物的杀伤效率提高了10.5倍,且对非靶细胞的杀伤作用微弱,证明HpD与McAb偶联后,对靶细胞具有特异杀伤作用,可为肿瘤的治疗提供一种新的药物。     

载姜黄素/阿霉素叶酸偶联壳聚糖纳米粒的制备

姜黄素(CUR)是一种天然植物多酚,具有逆转肿瘤多药耐药的功效,与抗癌药物阿霉素(DOX)联合用药可以提高阿霉素对肿瘤细胞的敏感性,从而逆转肿瘤多药耐药性。以壳聚糖为载体,叶酸为靶向受体,三聚磷酸钠(TPP)为聚阴离子,姜黄素与阿霉素为药物模型,利用阴阳离子间的静电相互作用,制备了叶酸偶联壳聚糖载双药纳米粒,以达到纳米粒同时具有肿瘤靶向性和抗多药耐药的双重目的。目标产物通过红外光谱、SEM、Zeta电位仪表征了结构和形态,同时考察了不同反应条件对生成纳米粒的影响。结果显示在适宜反应条件(偶联叶酸的壳聚糖浓度和TPP的浓度分别为2.5 mg/m L和1 mg/m L,反应温度25℃,搅拌速度500 r/min,反应体系p H为5.0~6.0)下,得到载药纳米粒粒径约190 nm,Zeta电位为30.72 m V,阿霉素和姜黄素的包封率分别可达85.7%和93.9%,相比目前其他的一些双载药纳米粒,包封率具有明显的提高。     

布洛芬-偕二膦酸偶联物的合成及体外靶向性研究

以偕二磷酸为骨靶向载体,设计并合成了一个新型的骨靶向抗炎药布洛芬偕二磷酸偶联物L,该化合物将抗炎药布洛芬通过酯键与偕二磷酸偶联,其结构经1HNMR、IR和MS确证,体外吸附性实验显示目标化合物能与羟磷灰石晶体(HPA)发生良好结合,初步验证了其体外骨靶向性.     

单抗Fab片段与抗癌抗生素C1027偶联物对裸鼠移植人肝癌的治疗作用

抗人肝癌单抗3A5用氯化汞合木瓜蛋白酶消化,经SDS-PAGE、ELISA方法检测证实得到Fab活性片段。单抗3AS及Fab片段与抗癌抗生素C1027偶联,得到3A5-C1027和Fab-C1027偶联物。克隆生成测定对肝癌细胞具有极强的杀伤作用,C1027、3A5-C1027和Fab-C1027的IC50值分别为6.5 x10~(-16)、4.2×10~(-14)M和8.6×10~(-16) M。 Fab-C1027对人咽上皮癌细胞与靶细胞的杀伤活性相比,两者相差32倍,呈选择性杀伤作用。观察C1027、Fab-C1027对移植人肝癌裸鼠的治疗作用,其抑瘤率分别为59％和85％。在可耐受剂量下,C1027对人肝癌有明显的抑制作用,而Fab-C1027显示更强的抑制作用。