藻红蓝蛋白连接/异构酶重组体系

把层理鞭枝藻藻红蓝蛋白操纵子A，E和F基因分别克隆在表达载体pET30中，转入大肠杆菌表达了相应蛋白质，利用pET3载体表达的蛋白质具有6个连续组氨酸亲和标记，用Ni^2 螯合亲和层析柱提纯了表达的蛋白质，用这些纯化的蛋白质建立了藻红蓝蛋白α亚基体外重组系统，从而证明藻红蓝蛋白操作子E和F基因编码层鞭枝藻红蓝蛋白为连接／异构酶。     

细菌光敏色素AphA的克隆表达及重组新方法

通过PCR技术，从蓝藻PCC7120中扩增出细菌光敏色素Apha的基因aphA，进而构建aphA的缺失突变体aphA(N-25/C-445)．二者分别转人表达载体pET30a中，在宿主菌中获得高效表达，获得的脱辅基蛋白与CpcA进行体外重组．在本体外重组体系中，以藻蓝蛋白α亚基(CpeA)，在光敏色素自身作用或者藻蓝蛋白裂合酶的帮助下从CpcA上捕获胆色素完成重组．藻蓝蛋白裂合酶CpcE／F能很大程度增强光敏色素脱辅基蛋白从CocA夺取PCB的能力．该结果对于研究细菌光敏色素的色素来源及生理生化机理都具有重要意义．     

层理鞭枝藻的藻蓝蛋白和藻红蓝蛋白α—亚基及其色素肽 …

用紫外可见吸收和圆二色光谱研究了层理鞭枝藻的藻蓝蛋白α－亚基色素肽和藻红蓝蛋白α－亚基色素肽的可逆光化学,这些研究表明藻蓝蛋白α－亚基色素钛和菏红蓝蛋白α－亚基色素肽分别相应于藻蓝蛋白和藻红蓝蛋白的辅基色素结构域,藻蓝蛋白α－亚基色素肽的光谱性质和可逆光化学与藻蓝蛋白α－亚基的相应性质很相似,藻红蓝蛋白α－亚基色素肽的光谱性质和可逆光化学与藻红蓝蛋白α－ 基的相应性质相似,不过藻红蓝蛋白α－亚基色     

藻红蓝α亚基脱辅基蛋白基因的克隆和表达

用ＰＣＲ技术从层理鞭枝藻总ＤＮＡ中扩增藻红蓝蛋白α亚基脱辅基蛋白的基因,将ｐｅｃＡ克隆于ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐ;ｔ,然后将ｐｅｃＡ基因插入表达载体ｐＧＥＭＤ,形成的重组质粒在ＢＬ２１（ＤＥ３）中最高效表达,表达蛋白形成包涵体,高效表达的蛋白的分子量为１９×１０＾３,与藻红蓝蛋白α亚基脱辅基蛋白的分子量一致,经Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ进一步证实该表达蛋白为藻红蓝蛋白α亚基脱辅基蛋白。     

可逆光致变色的藻红蓝蛋白α亚基分子设计

从层理鞭枝藻藻红蓝蛋白α亚基基因表达质粒pGEMD-pecA出发，通过酶切、削平或补充补末端及重新环合等技术，使其后的阅读框发生移码突变，从而到C－端缺失24个和36个氨基酸的两个缺失突变体pGEMD-pecA-C24和pGEMD-pecA-C36，用PCR技术将已突变的基因片段转入表达载体pET30中，得到pET30-pecA-C24和pET30-pecA－C36，获得高效表达，利用PCR技术从pGEMD-pecA中扩增出N－端缺失20个和32个氨基酸pecA的突变基因片段，并克隆于表达载体pET30中,得到pET30-pecA-N20和pET30-pecA-N32，获得高效表达，两个C－端缺的突变的脱辅基蛋白无论有或无藻红蓝蛋白连接／异构酶催化，均不能与藻蓝胆素共价偶联，两个N－端缺失突变脱辅基蛋白均能在藻红蓝蛋白连接／异构酶催化下与藻蓝胆系共价偶联，且色素从藻蓝胆素转化为藻紫胆素。     

藻蓝蛋白裂合酶突变体的构建及其对催化功能的影响

在序列分析的基础上，使用PCR技术构建了藻蓝蛋白裂合酶CpcE／CpcF基因的缺失突变体：cpcE（42～276）、cpcE（1～274）、cpcE（1～272）、cpcF（1～160）、cpcF（10～213）．突变体基因克隆至表达载体pET 30a（＋）后，利用体外重组实验对表达蛋白的酶活性进行了研究．揭示了缺失区域在酶催化过程中的作用．     

藻蓝蛋白裂合酶CpcS1与CpcT1的复合物初步研究

研究证实裂合酶CpcSl、CpcTl能分别催化藻蓝蛋白β亚基(简称CpcB)的两个色素结合位点(84位和155位)共价偶联藻蓝色素PCB(phycocyanobilin),但通过实验发现仅CpcSl和CpcTl共同催化CpcB无法生成天然构像的色素蛋白.为了挑选出辅助裂合酶,经过综合分析,筛选出6个与CpcSl、CpcTl同源的裂合酶.将编码裂合酶的基因按照本实验的需求,重新构建在其它载体上,在大肠杆菌BL21体内表达出蛋白后,分别与CpcSl、CpcTl混合·利用亲和层析分离,然后通过蛋白质电泳图谱初步分析裂合酶之间形成复合物的情况.能形成复合物的裂合酶,再与CpcSl、CpcTl及脱辅基蛋白共同转入大肠杆菌BL21体内进行体内重组研究.结果表明,CpcTl能分别与CpcSl、CpcT2、PecF形成复合物,但这些复合物均不能辅助催化CpcB生成天然产物.     

重组蓝细菌藻蓝蛋白RpcA共价偶联多种藻胆色素

利用建立的藻胆蛋白大肠杆菌异源表达系统,证明了Synechococcus sp.WH8102的藻蓝蛋白α亚基RpcA能分别结合蓝细菌中的4种藻胆素.裂合酶RpcG利用PCB或PEB做色素底物,连接它们到RpcA上,并伴随着异构作用,分别生成色素蛋白PVB-RpcA、PUB-RpcA;但裂合酶CpcE/CpcF利用PCB或PEB做色素底物,连接它们到RpcA上,则分别生成了色素蛋白PCB-RpcA、PEB-RpcA.后者荧光量子产率较高.2种裂合酶使用2种不同的色素底物,可以产生4种完全不同的、仅偶联到RpcA的色素蛋白.RpcG和CpcE/CpcF的对比研究可以探讨裂合酶异构功能的结构基础.同时这些色素蛋白有潜在的应用价值,可以作为生物学荧光探针。     

藻红蓝蛋白α-亚基体外重组体系的优化

对我们建立的藻红蓝蛋白α－亚基体外重组体系进行了优化。实验表明：让表达的不具有组氨酸亲和标记的藻红蓝蛋白α－亚基连接／异构酶E亚基（简称PecE)与具有组氨酸亲和标记的藻红蛋白α－亚基连接／异构酶F亚基（简称Histag-PecF)共同变异再复性，然后通过Ni^2 金属鳌合亲和层析提纯PecE/Histag-PecF复合物，该PecE/Histag-PeF具有更好的催化活性。     

一种实用的F/F信号转换变送电路

F/F信号转换变送电路设计,实现了自排器与监测系统的联网,达到了地面对井下瓦斯的集中管理。     

通过V/F实现A/D的一种方法

介绍了通过V／F完成A／D的一种新实现方法，利用V／F将模拟信号转发换为对应的频率信号，传送至微机系统后程控分频，形成周期为10～20ms之间的方波信号，测其周期，即可用软件方法求得对应的模拟量信号。最后举了一个应用实例。     

F/HY催化剂用于挂式四氢双环戊二烯的制备

采用室温过量浸渍法,制备不同F用量改性的HY分子筛催化剂。采用氨程序升温脱附法(NH3-TPD)、X线衍射仪(XRD)、傅里叶变换红外光谱仪(FT-IR)对催化剂的结构及酸性质进行表征,并在桥式四氢双环戊二烯(endo-TCD)制备挂式四氢双环戊二烯(exo-TCD)的反应中考察催化剂的催化性能。结果表明:最适宜的反应条件为以1.0%F/HY为催化剂,活化温度300℃,反应温度240℃,催化剂与原料质量比0.25∶1,溶剂环己烷与endo-TCD的摩尔比10∶1,初始压力1.0 MPa,反应时间1.5 h。最优条件下桥式四氢双环戊二烯的转化率达到92.6%,挂式四氢双环戊二烯的收率达到了59.4%。失活的催化剂可以通过550℃高温焙烧再生,其活性变化不大。     

L／F BASIC语言移植的研究

本文介绍将IBM PC高级解释BASIC语言移植到L/F 1650分布式多用户擞型计算机系统的方法,解决了移植过程的二类技术问题:仿真软件TPC2的功能扩充和IBM PC高级解释BASIC解释程序的改造(包括ROMBASIC)。     

推广的F/G-展开法及其应用

首先推广了F/G-展开法,使之能应用于变系数微分方程的求解中。作为推广的F/G-展开法应用实例,本文在非对称势阱下,求解了(3+1)-维三次-五次Gross-Pitaevskii方程。导出了方程含有较多任意参数的双曲函数形式精确解、三角函数形式周期波解,得到了孤波的传播速度及啁啾随时间的变化规律。     

折衍混合F/0.65红外物镜设计

设计了三片式折衍混合,波段范围8～12μm,焦距50 mm,F数达0.65,全视场10°的适用于非致冷焦平面阵列探测器的红外物镜.比较了全折射式的初始镜头与设计的折衍混合镜头,发现折衍混合镜头像质有大幅度的提高.     

Cd/Ba/F/Cl 系玻璃结构的X射线衍射和分子动力学研究

采用Ｘ射线衍射和分子动力学（ＭＤ）计算模拟等手段研究了６７ＣｄＦ２／３３ＢａＣｌ２玻璃（Ⅰ）和４０ＣｄＦ２／４０ＢａＦ２／２０ＣｄＣｌ２玻璃（Ⅱ）的结构。研究表明，在Ⅰ中Ｃｄ原子主要为６配位，Ⅱ中Ｃｄ原子主要为６或７配位。Ｃｄ—Ｆ的平均键长分别为２３１．６ｐｍ和２３０．４ｐｍ。在ＭＤ计算的玻璃中同时存在非桥Ｆ，桥Ｆ，３配位Ｆ和４配位Ｆ，几乎不存在不和Ｃｄ原子成键的游离Ｆ。弱的形成体阳离子和阴离子的连接较弱，Ｃｄ在大的阴离子空隙中的位置较松弛，体系随Ｃｄ含量增加稳定性下降。对混合卤化物玻璃的结构与形成的特点进行了讨论。     

使用V/F转换器的电子吊秤电路

介绍一个由称重传感器、Ｖ／Ｆ转换器和８０３１单片机构成的称重系统，对系统的各部分硬件线路进行分析和试验，并提出称重数据处理和系统控制程序的设计方法。     

F/O法处理含氮有机废水工艺研究

采用F/O工艺对含己内酰胺废水的脱氮效果进行了研究。结果表明,此工艺的脱氮效果良好,剩余污泥产量低。系统的水力停留时间18h,好氧池溶解氧1.0～2.0mg/L,填料COD_(cr)负荷最高不超过1.29kg/m~3·d为宜,用剩余污泥作为内碳源效果不理想,有待进一步探讨,好氧池有机物的降解符合动力学方程。     

HMX/F2602纳米含能微球的制备及其性能表征

为了降低HMX的感度,采用喷雾干燥工艺制备了HMX/F_(2602)纳米含能颗粒,其比例为:HMX∶F_(2602)=97∶3;并将喷雾干燥法制备的HMX/F_(2602)纳米颗粒与同等条件下制备的HMX/NC、HMX/Estane5703进行对比表征。采用SEM、XPS、XRD、DSC,以及撞击感度仪对原料HMX、HMX/F_(2602)纳米颗粒进行表征。结果表明:制备的HMX/F_(2602)纳米颗粒的热稳定性、撞击感度均优于同等条件下的HMX/NC、HMX/Estane5703颗粒。制备出的HMX/F_(2602)纳米颗粒呈规则的球形,粒径0.5~4μm之间;其晶型保持不变。原料HMX、HMX/F_(2602)纳米颗粒的活化能分别为523.16 kJ/mol,469.89 kJ/mol;热爆炸临界温度分别为279.34℃,279.20℃,特性落高分别为17.6 cm,82.2 cm。